一种莲子芯的微型提取方法技术

本发明专利技术涉及天然药物中生物碱的提取制备领域，针对提取生物碱耗时、费溶剂的问题，提供一种莲子芯的微型提取方法，包括以下步骤：将粉碎后的莲子芯样品和分散剂混合，研磨形成均匀的混合粉末，将混合粉末转移至固相萃取柱中利用溶剂进行洗脱，收集洗脱溶液并离心，取上层清液进行高效液相分析。本发明专利技术将基质固相分散微萃取与高效液相色谱巧妙结合起来，能快速有效的富集天然药物中的生物碱。有效的富集天然药物中的生物碱。

【技术实现步骤摘要】
一种莲子芯的微型提取方法


[0001]本专利技术涉及天然药物中生物碱的提取制备领域，尤其是涉及一种莲子芯的微型提取方法。

技术介绍

[0002]基质固相分散(MSPD)萃取是由Baker等人首次提出的一种高效的样品前处理方法。MSPD的基本原理是将样品和分散剂放在一起，研磨成均匀的混合物，便于样品粉末附着在分散剂上，然后将混合物引入固相萃取管，用不同的洗脱溶剂从分散剂中洗脱出目标化合物。在MSPD过程中，样品的提取和清洁一步完成，明显减少了时间消耗。随着该方法的发展，逐渐被应用于农药残留、重金属和生物活性化合物的提取和分析。此外，近年来MSPD微萃取因其成本低、环保等优点而受到广泛关注。目前常用的分散剂有C18、C8、弗罗里、氧化铝、硅胶等。基于不同分散剂，MSPD法呈现出不同的萃取效率，因此寻找新的分散剂来提高萃取的选择性和提取效率是非常有价值的，特别是对基质固相分散微萃取而言。
[0003]氮化硼(BN)纳米片是一种重要的无机化合物，由数量相等的硼和氮组成，它们交替排列，呈现出无限延伸的六边形蜂窝结构。氮化硼层与层之间在范德华力的作用下堆叠，其结构类似于石墨烯。因此，氮化硼具有高比表面积、优异的润滑性、良好的导热性、显著的热化学稳定性和超强的机械性能。由于上述特性，六方氮化硼在电子器件、光存储、储氢、光催化等领域得到了广泛的应用。此外，氮化硼还被广泛用于油脂、重金属、蛋白质、染料和植物生长调节剂的吸附。然而，从以往的研究中可以发现，氮化硼纳米片尚未作为分散剂应用于基质固相分散微萃取。
[0004]莲子芯为睡莲科植物莲种子的绿色幼叶及胚根，具有治疗心律失常、神经紊乱、高血压和心血管疾病的作用。如今，莲子芯已被广泛应用于人们的日常生活中，尤其是在亚洲，莲子芯被用作菜肴、茶和药物。莲子芯的药理特性与其含有的黄酮类、生物碱、挥发油等活性物质密切相关。莲子中含有莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱等生物碱，具有较高的生物活性和保健功能。特别是甲基莲心碱，它有利于抗氧化，抗血栓，抗高血压。在以往的研究中，生物碱的提取方法主要有微波辅助提取、回流提取、超声波回流提取(药典法)等。例如公开号为CN103893296B的专利公开了一种微波辅助提取松潘乌头生物碱的方法，该方法包括以下步骤：(1)在粉碎至20～30目的松潘乌头药材中加入氨试剂，将其润湿之后置于微波提取设备中放置2～4h；然后加入乙醇，搅拌均匀，并经微波提取得到提取液；(2)所述提取液进行抽滤，得到滤液A；该滤液A经减压浓缩至无乙醇，即得松潘乌头生物碱浸膏；(3)在生物碱浸膏中加入酸性溶液调至pH值为2～4，过滤除去不溶物，得到滤液B；该滤液B用氨试剂调pH值至10～12后，再用乙醚
‑
氯仿溶液萃取，合并萃取液；萃取液经减压浓缩至干膏状，即得纯化的松潘乌头生物碱产品。该专利技术快速、高效，但是消耗大量的时间和洗脱溶剂，需要大量的样品。据此需要一种理想的解决方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了克服提取生物碱耗时、费溶剂的问题，提供一种莲子芯的微型提取方法，将基质固相分散微萃取与高效液相色谱巧妙结合起来，能快速有效的富集天然药物中的生物碱。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种莲子芯的微型提取方法，包括以下步骤：将粉碎后的莲子芯样品和分散剂混合，研磨形成均匀的混合粉末，将混合粉末转移至固相萃取柱中利用溶剂进行洗脱，收集洗脱溶液并离心，取上层清液进行高效液相分析。该方法与传统的生物碱提取方法，如回流提取、微波辅助提取、回流提取、超声波回流等相比，极大的缩短了样品处理时间和样品用量，同时还保持了高的提取效率，对于珍贵或者生物碱含量较低的样品该方法具有较大的实用价值。
[0007]作为优选，所述分散剂选自氮化硼、硅胶、壳聚糖、C18和弗罗里。作为进一步优选，所述分散剂为氮化硼纳米片，莲子芯样品和氮化硼纳米片的质量比为4:(1
‑
5)。作为更进一步优选，莲子芯样品和氮化硼纳米片的质量比为1:1。本专利技术首次采用氮化硼纳米片作为基质固相分散剂用于富集技术，并且应用在天然药物中生物碱提取富集领域。
[0008]作为优选，所述研磨在玛瑙研钵中进行，研磨时间为30
‑
150s。作为进一步优选，所述研磨时间为120s。
[0009]作为优选，所述洗脱的溶剂选自甲醇、乙腈、乙醇、丙酮和三氯甲烷。作为进一步优选，所述洗脱的溶剂为甲醇，甲醇用量只需200μL，大大减少了有机溶剂的消耗，遵循了绿色环保的原则。
[0010]本专利技术提供了一种高效的、简便的氮化硼纳米片辅助的基质固相分散萃取方法，来富集提取天然药物中的生物碱。通过单因素实验对影响萃取效率的分散剂的种类、分散剂的用量、研磨时间和洗脱溶剂种类等一系列参数进行了系统的讨论和优化。在最佳条件下进行了线性、日内和日间精密度(RSD％)、检出限(LOD)、定量限(LOQ)、重复性和回收率等验证实验。该专利技术已成功应用于莲子芯中生物碱(莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱)的定性定量分析，还可用于多种药材中生物碱的检测，在天然药材中提取生物碱的微量分析中具有广泛的应用潜力。
附图说明
[0011]图1为基质固相分散萃取工艺流程图。
[0012]图2为氮化硼纳米片分散剂的扫描电镜图。
[0013]图3为氮化硼纳米片分散剂的透射电镜图。
[0014]图4为考察不同分散剂的富集效果柱状图，图中，a、b、c、d、e分别代表分散剂的种类，分别为：a
‑
硅胶；b
‑
弗洛里；c
‑
壳聚糖；d
‑
XB
‑
C18，e
‑
氮化硼纳米片。
[0015]图5为考察不同量的氮化硼纳米片富集效果的折线图，图中，12.5mg、25mg、37.5mg、50mg、62.5mg分别代表不同分散剂量时三种目标化合物的峰面积。
[0016]图6为考察不同研磨时间的富集效果折线图，图中，30s、60s、90s、120s、150s分别代表不同研磨时间时三种目标化合物的峰面积。
[0017]图7为考察不同洗脱液种类的富集效果柱状图，图中，1、2、3、4分别代表洗脱溶剂
的类型，分别为：1
‑
乙腈；2
‑
三氯甲烷；3
‑
丙酮；4
‑
乙醇；5
‑
甲醇。
[0018]图8为氮化硼纳米片分散剂与目标化合物的相互作用示意图。
[0019]图9中A为三种目标化合物的混标色谱图，B为运用富集方法提取的样品色谱图。
具体实施方式
[0020]下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案做进一步说明。
[0021]本专利技术中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0022]一、实施例总实施例样品制备和富集：首先将莲子芯样品在50℃的烤箱中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种莲子芯的微型提取方法，其特征在于，包括以下步骤：将粉碎后的莲子芯样品和分散剂混合，研磨形成均匀的混合粉末，将混合粉末转移至固相萃取柱中利用溶剂进行洗脱，收集洗脱溶液并离心，取上层清液进行高效液相分析。2.根据权利要求1所述的一种莲子芯的微型提取方法，其特征在于，所述分散剂选自氮化硼、硅胶、壳聚糖、C18和弗罗里。3.根据权利要求2所述的一种莲子芯的微型提取方法，其特征在于，所述分散剂为氮化硼纳米片，莲子芯样品和氮化硼纳米片的质量比为4:(1
‑
5)。4.根据权利要求3所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹君，石敏珍，朱思晨，余亚玲，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：