一种检测四臣止咳颗粒入血化学成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测四臣止咳颗粒入血化学成分的方法。所述方法包含如下步骤：采集动物在未饲喂四臣止咳颗粒前的血液样本作为对照组；给予动物四臣止咳颗粒，预定时间后收集所述动物的血液样本作为实验组；采用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种检测四臣止咳颗粒入血化学成分的方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，特别涉及一种检测四臣止咳颗粒入血化学成分的方法。

技术介绍

[0002]四臣止咳颗粒出自《新编藏药配方》，由岩白菜、螃蟹甲、甘草、猪毛蒿4味药材组成，为藏医理论经典古方，具有清热解毒，止咳平喘，润喉祛痰的功效。
[0003]目前对四臣止咳颗粒的研究主要集中于提取工艺及药效学的研究，如慢性支气管炎急性发作等，研究表明四臣止咳颗粒治疗慢性支气管炎急性发作疗效显著，但其发挥药效的活性成分尚不完全清楚。
[0004]因此，亟需对四臣止咳颗粒提取物入血成分进行分析鉴定，明确其吸收进入体内的原型成分，探讨其直接作用物质，可为四臣止咳颗粒的临床应用提供参考。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了一种检测四臣止咳颗粒入血化学成分的方法，该方法能够对四臣止咳颗粒提取物入血成分进行分析鉴定，且具有靶点筛选效果高、准确度好、灵敏度高、分析速度快等优点。
[0006]在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种检测四臣止咳颗粒入血化学成分的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包含如下步骤：给予动物四臣止咳颗粒，预定时间后收集所述动物的血液样本；采用液相色谱
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质谱法对所述血液样本进行检测，基于所得到的液相色谱结果确定四臣止咳颗粒入血化学成分；所述液相色谱的色谱条件中采用的流动相包括：流动相A，所述流动相A选自甲酸水溶液；流动相B，所述流动相B选自乙腈。
[0007]根据本专利技术的实施例，血清药物化学理论认为，能够吸收入血的原型成分就是发挥作用的有效成分，在此理论基础上，通过分析口服给药后动物血浆中吸收的药源性物质，可以评价中药潜在的药理活性物质。因此，专利技术人通过大量试验，采用血清药物化学理论，结合现代液相色谱
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质谱技术，对四臣止咳颗粒提取物灌胃后的大鼠血浆中的原型成分进行鉴定，该方法能够同时对多种有效成分进行检测，具有操作简便、易于控制、准确性高、检测速度快等优点。并且，专利技术人通过大量试验发现，通过采用上述流动相，能够将待测样品中的入血成分完全分离，从而方便后期对不同入血成分的检测。由此，对入血成分的检测准确性高。若采用其他流动相，容易出现待测组分无法完全分离(分离度低)、待测组分不出峰、峰面积过大或过小、峰型不佳导致无法积分获取相应面积信息、出峰时间晚导致检测时间长等问题，从而导致检测结果准确性低。
[0008]根据本专利技术的实施例，所述四臣止咳颗粒入血化学成分包含：胡麻属苷、山栀苷甲酯、8
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O
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乙酰山栀苷甲酯、毛蕊花糖苷、甘草苷、新甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草酸、绿原酸、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷、岩白菜素、熊果苷、甘草次酸。由此，专利技术人通过
大量试验，确定了上述16中有效成分为四臣止咳颗粒的入血有效成分。
[0009]根据本专利技术的实施例，进行所述检测之前，预先将所述血液样本进行如下处理：将所述血液样本与乙腈混合，将所得混合液进行第二离心，收集上层液；将所述上层液进行干燥，将所得干燥物用甲醇复溶，得到复溶液；将所述复溶液进行第三离心，收集上清液，将所述上清液进行所述检测。由此，能够将血液样本中的有效成分提取出来，从而方便后期对入血成分进行检测。采用乙腈作为提取剂可以同时提取出全部待测组分，且提取充分，其他组分少，保证检测结果的准确性。若采用其他提取剂提取，不易同时提取出所有待测组分，且携带的杂质较多，影响后续色谱分离检测。
[0010]根据本专利技术的实施例，所述乙腈的用量为所述血液样本体积的2
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5倍；所述甲醇的用量为50
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200L。专利技术人通过大量试验发现，采用上述条件，对血液样本中有效成分的提取效果较佳。
[0011]根据本专利技术的实施例，所述第二离心是在10000
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15000r/min的转速下进行10
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20min；所述第三离心是在10000
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15000r/min的条件下进行5
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10min。由此，能够将血液中的沉淀完全去除，从而防止其他杂质后期对四臣止咳颗粒中入血成分的干扰。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述色谱条件中采用的梯度洗脱程序为：0～9min，5
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95％所述流动相B；9～12min，95
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5％所述流动相B。专利技术人经过大量实验得到上述较佳的洗脱条件，由此，能够将待测样品中的入血成分完全分离，获得良好的色谱图，从而能够准确的检测出入血成分。若采用其他洗脱条件，容易出现待测组分无法完全分离(分离度低)、待测组分不出峰、峰面积过大或过小、峰型不佳导致无法积分获取相应面积信息、出峰时间晚导致检测时间长等问题，从而导致检测结果准确性低。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述甲酸水溶液的浓度为0.05～0.2体积％。由此，对待测样品中入血成分的分离效果较佳。
[0014]根据本专利技术的实施例，所述色谱条件中采用的色谱柱为Cortecs C18色谱柱，流速0.2
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0.4mL/min，柱温20
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40℃，温度为2
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5℃，进样体积2μL。由此，能够将有效分离和检测四臣止咳颗粒中入血成分，并获得良好的色谱图。相比与其他检测方法，该方法仅12min即可实现对样品的检测，可为入血成分的筛查鉴定提供了参考。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述质谱的条件如下：采集模式为MRM模式；毛细管电压在负离子模式下为2.5kV，在正离子模式下为3.0kV；离子源温度150℃，脱溶剂气温度500℃，脱溶剂气流速1000L/Hr。专利技术人通过大量试验得到上述较佳的质谱条件，能够获得良好的二级碎片图，且质量精度高，从而能够准确地对四臣止咳颗粒中入血成分进行鉴定，具有准确度高、灵敏度高的等优点。相比与其他检测方法，该方法仅12min即可实现对样品的检测，可为入血成分的筛查鉴定提供了参考。
[0016]根据本专利技术的实施例，采用口服方式给予动物所述四臣止咳颗粒，给药方式为每天2
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3次，连续给药3
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7天。由此，能够保证四臣止咳颗粒中的有效成分进入到血液，然后通过分析口服给药后大鼠血浆中吸收的药源性物质，可以评价中药潜在的药理活性物质。
[0017]根据本专利技术的实施例，所述含药血浆分别在所述末次给药后0.5、1、2、4、6h进行采集。由此，保证对血液样品中入血成分检测的准确度，避免随机误差。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述四臣止咳颗粒提取物的制备方法包含如下步骤：将四臣止咳颗粒进行研磨后，加水稀释，然后进行离心取上清液，制得所述四臣止咳颗粒提取
物。由此，能够将四臣止咳颗粒中的有效成分进行提取，方便小鼠对四臣止咳颗粒提取物中的有效成分进行吸收。
[0019]根据本专利技术的实施例，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测四臣止咳颗粒入血化学成分的方法，其特征在于，包含如下步骤：采集动物在未饲喂四臣止咳颗粒前的血液样本作为对照组；给予动物四臣止咳颗粒，预定时间后收集所述动物的血液样本作为实验组；采用液相色谱
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质谱法对所述实验组和所述对照组的血液样本进行检测，基于所得到的液相色谱结果确定四臣止咳颗粒入血化学成分；所述液相色谱的色谱条件中采用的流动相包括：流动相A，所述流动相A选自甲酸水溶液；流动相B，所述流动相B选自乙腈。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述四臣止咳颗粒入血化学成分包含：胡麻属苷、山栀苷甲酯、8
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O
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乙酰山栀苷甲酯、毛蕊花糖苷、甘草苷、新甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草酸、绿原酸、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷、岩白菜素、熊果苷、甘草次酸。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，进行所述检测之前，预先将所述血液样本进行如下处理：将所述血液样本与乙腈混合，将所得混合液进行第二离心，收集上层液；将所述上层液进行干燥，将所得干燥物用甲醇复溶，得到复溶液；将所述复溶液进行第三离心，收集上清液，将所述上清液进行所述检测。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述乙腈的用量为所述血液样本体积的2
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5倍；任选地，所述甲醇的用量为50
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200L；任选地，所述第二离心是在10000
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15000r/min的转速下进行10
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20min；任选地，所述第三离心是在10000
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15000r/min的条件下进行5
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10min。5.根据权利要求1
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4任一项所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中采用的梯度洗脱程序为：0～9min，5

【专利技术属性】
技术研发人员：尼玛次仁，曲玉霞，张晨宁，崔爽，旦增曲培，孙毅坤，张硕峰，
申请(专利权)人：西藏藏医药大学，
类型：发明
国别省市：