对细胞死亡具有增加的抗性的经修饰的免疫效应细胞制造技术

通过敲除TRAIL受体或通过将TRAIL受体连接至免疫效应细胞共刺激结构域，或通过这两种方式，对免疫效应细胞和免疫效应细胞系进行修饰，以增加对TRAIL诱导的细胞死亡的抗性。以增加对TRAIL诱导的细胞死亡的抗性。以增加对TRAIL诱导的细胞死亡的抗性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对细胞死亡具有增加的抗性的经修饰的免疫效应细胞
[0001]引言
[0002]本专利技术涉及对修饰免疫效应细胞和免疫效应细胞系以制备它们的有用的衍生物。此外，本专利技术涉及制备经修饰的免疫效应细胞和细胞系的方法、含有所述细胞和细胞系的组合物以及所述细胞和含有所述细胞的组合物在癌症治疗中的用途。

技术介绍

[0003]通常，免疫细胞需要靶细胞通过主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)呈递抗原，然后才能触发导致靶细胞死亡的免疫反应。这使得不呈递MHC I类的癌细胞能够逃避大部分免疫反应。
[0004]然而，在缺乏MHC I类表达的情况下，NK细胞能够识别癌细胞。因此，它们在机体抵御抗癌方面发挥着关键作用。
[0005]另一方面，在某些情况下，癌细胞通过表达结合细胞膜上的抑制性受体的配体表现出抑制例如NK细胞和T细胞的免疫效应细胞的细胞毒活性的能力。对癌症的抗性可能涉及这些因素和其他因素之间的平衡。
[0006]在本文中，细胞毒性(cytotoxicity)是指例如NK细胞和T细胞的免疫效应细胞，通过例如，释放细胞溶解蛋白(cytolytic proteins)，或通过结合癌细胞膜上的受体并诱导所述癌细胞的凋亡(无论是直接的还是间接的)而诱导癌细胞死亡的能力。细胞毒性不仅受诱导细胞溶解蛋白释放的信号的影响，还受抑制细胞溶解蛋白释放的信号的影响。如上所述，细胞毒性的增加将因此导致更有效地杀死癌细胞，癌细胞抑制免疫效应细胞的细胞毒活性的机会更小。
[0007]已建议通过遗传修饰去除NK细胞上的抑制性受体功能，作为用于增加NK细胞对缺乏MHC I类表达但能够抑制NK细胞毒性的癌细胞的细胞毒性的方法(Bodduluru等人，2012年)。NKG2A已被确定为在这些情况下值得沉默的抑制性受体(inhibitory receptor worth silencing)，因为已知某些癌细胞表达HLA
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E，HLA
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E与NKG2A结合，并在缺乏MHC I类表达(Shook等，2011年；WO 2006/023148)(Campana D.等，2019年)的情况下抑制NK细胞的细胞毒性。
[0008]另一种下调NKG2A表达的方法已在NK
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92细胞中显示，其中显示转染编码IL
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15的基因与NKG2A表达的减少相关(Zhang等，2004年)。然而，尽管观察到NK细胞的细胞毒性增加，但该增加很可能是活化受体NKG2D表达伴随增加的结果。观察结果支持了这一观点，即阻断NK
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92细胞上的NKG2A受体与针对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒性增加无关(Heidenreich等，2012年)。然而，值得注意的是，NK
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92细胞系是一种具有极低的抑制性受体表达的高细胞毒性细胞系。因此，任何与NKG2A表达减少相关的细胞毒性的增加都可能微不足道而无法检测到。
[0009]在小鼠中也进行了类似的研究。例如，小鼠在NK细胞上表达一种称为Ly49的受体，其类似于人抑制性KIR受体。已经表明，通过用抗体片段阻断Ly49受体，NK细胞具有更强的细胞毒性，并且能够在体外和体内杀死鼠白血病细胞(murine leukemia cell)(Koh等，
2001年)。
[0010]然而，这是抑制性受体功能降低的结果，身体中的“正常”细胞也变得更容易受到修饰的NK细胞的攻击，因为修饰的NK细胞变得不太能够区分“正常”细胞和癌细胞。这种副作用是降低“典型”抑制性受体功能的一个显著缺点。
[0011]已知NK细胞杀死癌细胞的另一种方式是在其表面表达TRAIL。TRAIL配体能够结合癌细胞上的TRAIL受体并诱导所述癌细胞的凋亡。一种推测性方法描述了为了利用这种抗癌机制(EP1621550)而在NK细胞上过表达(overexpressing)膜结合TRAIL配体。此外，据报道IL
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12可上调NK细胞上的TRAIL表达(Smyth等，2001年)。
[0012]然而，癌细胞已经发展出规避(evasive)机制和保护机制来处理表达TRAIL的NK细胞。诱骗性TRAIL受体(decoy TRAIL receptors)常表达于癌细胞膜上，而TRAIL与这些诱骗受体(如DcR1和DcR2)的结合不能诱导细胞凋亡；尚未找到克服这种机制的方法。
[0013]使用表达TRAIL的NK细胞靶向癌细胞的另一个问题是某些NK细胞自身表达TRAIL受体。因此，在某些情况下，NK细胞上的TRAIL表达可能导致自我杀伤(fratricide)。
[0014]急性髓系白血病(AML)是一种造血系统恶性肿瘤，其涉及致力于髓系发育的前体细胞，并且在成人(90％)和儿童(15
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20％)的急性白血病中占很大比例(Hurwitz,Mounce等,1995年；Lowenberg,Downing等,1999年)。尽管80％的患者通过标准化疗获得了缓解(Hurwitz,Mounce等,1995年；Ribeiro,Razzouk等,2005年)，但由于微小残留病(minimal residual disease,MRD)复发率高，存活率仍不令人满意。5年生存率与年龄有关；儿童为60％(Rubnitz,2012年)，65岁以下成人为40％(Lowenberg,Downing等,1999年)，65岁以上成人为10％(Ferrara和Schiffer,2013年)。如果患者有合适的造血细胞供体，这些结果可以得到改善，但许多患者没有，这突出表明需要一种替代治疗方法。
[0015]自然杀伤(NK)细胞是细胞毒性淋巴细胞，具有不同于例如自然杀伤T(NK
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T)细胞的独特表型和效应子功能(effector function)。例如，虽然NK
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T细胞同时表达CD3和T细胞抗原受体(TCRs)二者，但NK细胞不表达。通常发现NK细胞表达标志物CD16和CD56，其中CD16起Fc受体的作用并介导抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，下文将对此进行讨论。在这方面，KHYG
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1是一个显著的例外。尽管NK细胞具有天然的细胞毒性，但已开发出具有增强的细胞毒性的NK细胞系。NK
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92和KHYG
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1代表了两种已被广泛研究并在癌症治疗中显示出前景的NK细胞系(Swift等，2011年；Swift等，2012年)。
[0016]用于癌症治疗的细胞过继免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy)通常包括向患者施用天然的和修饰的T细胞。T细胞可以通过各种方式进行修饰，例如遗传修饰，以便表达与某些靶癌细胞特异性结合的受体和/或配体。用特异性针对癌细胞抗原的高亲和力T细胞受体(TCRs)和嵌合抗原受体(CARs)转染T细胞，可引起高反应性癌症特异性T细胞应答。这种免疫治本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫效应细胞或免疫效应细胞系，所述免疫效应细胞或免疫效应细胞系已被修饰以具有对TRAIL诱导的细胞死亡的增加的抗性，所述免疫效应细胞或免疫效应细胞系的特征在于：a)所述修饰是敲低或敲除一个或多个TRAIL受体基因的表达；和/或b)所述修饰是表达连接至共刺激结构域的TRAIL受体。2.根据权利要求1所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述免疫效应细胞是NK细胞。3.根据权利要求1所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述免疫效应细胞是T细胞。4.根据任一项前述权利要求所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述对TRAIL诱导的细胞死亡的抗性相对于野生型免疫效应细胞增加至少10％。5.根据任一项前述权利要求所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述TRAIL受体选自DR4和DR5。6.根据任一项前述权利要求所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述共刺激结构域选自4
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1BB、CD28、2B4、DAP
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10、DAP
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12、CD278(ICOS)和OX40。7.根据任一项前述权利要求所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，所述免疫效应细胞或免疫效应细胞系进一步表达或被修饰以表达突变的TRAIL配体。8.根据权利要求7所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述突变的TRAIL配体具有增加的对例如DR4和/或DR5的TRAIL受体的亲和力。9.根据任一项前述权利要求所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述细胞系是NK
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92或KHYG
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1或它们的衍生物。10.根据任一项前述权利要求所述的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其用于治疗患者的癌症。11.根据权利要求10所述的用途的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述癌症是血癌。12.根据权利要求11所述的用途的免疫效应细胞或免疫效应细胞系，其中所述血癌是急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、霍奇金淋巴瘤、包括T细胞淋巴瘤和B细胞淋巴瘤的非霍奇金淋巴瘤、无症状骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、活性骨髓瘤或轻链骨髓瘤。13.一种NK
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92细胞或KHYG
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1细胞，所述NK
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92细胞或KHYG
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1细胞经过修饰以表达连接至共刺激结构域的TRAIL受体。14.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔，
申请(专利权)人：昂克医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：