动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱构建及其中药标准汤剂和中药配方颗粒氨基酸含量检测组成比例

本发明专利技术涉及一种动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建及动物类中药的中药标准汤剂和中药配方颗粒氨基酸含量检测。本发明专利技术的氨基酸特征图谱的构建方法，选择地龙或者僵蚕的标准汤剂作为供试品，并选择合适种类的氨基酸对照品，进一步配合合适的色谱条件，构建得到氨基酸特征图谱，以该氨基酸特征图谱为参照图谱，通过将其与相同色谱条件下获得地龙或僵蚕、土鳖虫、蝉蜕、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其炮制品的标准汤剂或/和配方颗粒的色谱图相比较，可将这些不同动物药标准汤剂或/和配方颗粒区别开来。本发明专利技术的氨基酸含量的测定方法，能够同时用于检测地龙或僵蚕、土鳖虫、蝉蜕、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其炮制品中的氨基酸含量。量。量。

【技术实现步骤摘要】
动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱构建及其中药标准汤剂和中药配方颗粒氨基酸含量检测


[0001]本专利技术属于动物类中药的质量标准研究领域，具体涉及一种动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建及动物类中药的中药标准汤剂和中药配方颗粒氨基酸含量检测。

技术介绍

[0002]动物类中药应用历史悠久，在我国药物应用史上具有极其重要的地位。现存最早有关于动物类中药的专著《神农本草经》中收载了麝香、羚羊角等67味动物药，占药物总量的18.36％；2020版《中国药典》也收载了51味动物药，其中含动物药的成方制剂有461味，占成方制剂和单味制剂总量的30.9％。
[0003]动物药已有的鉴别分析手段针对的是药材，主要通过性状鉴别和显微鉴别来区分，而其标准汤剂以及配方颗粒经过水提取、浓缩制备而来，与药材和饮片相比，已失去固有的形态，在质量控制上缺少性状和显微鉴别所依据的重要指标。土鳖虫、蝉蜕、鸡内金、鳖甲、地龙、僵蚕是常用临床动物药，目前，还没有建立有效的方法来区分土鳖虫、蝉蜕、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其炮制品、地龙、僵蚕的标准汤剂或/和配方颗粒。

技术实现思路

[0004]基于上述
技术介绍
，本专利技术的主要目的是提供一种动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，采用该构建方法构建得到的氨基酸特征图谱为参照图谱，能将地龙和僵蚕中的一种以及土鳖虫、蝉蜕、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其炮制品的标准汤剂或/和配方颗粒区别开来。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006]一种动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
[0007]提供含氨基酸对照品的对照品溶液，并取地龙标准汤剂或者僵蚕标准汤剂制备供试品溶液；对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行衍生化处理；采用高效液相色谱法对经过衍生化处理的所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，并将检测所得对照品色谱图和供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，获得氨基酸特征图谱；
[0008]所述氨基酸对照品包含酪氨酸对照品、蛋氨酸对照品、赖氨酸对照品和精氨酸对照品中的至少一种。
[0009]在其中一个实施例中，所述氨基酸对照品还包含丝氨酸对照品、甘氨酸对照品、苏氨酸对照品、丙氨酸对照品、脯氨酸对照品、缬氨酸对照品、异亮氨酸对照品、亮氨酸对照品和苯丙氨酸对照品中的至少一种。
[0010]在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为C18色谱柱；
[0011]流动相A为体积比为(6.5～7.5):(92.5～93.5)的乙腈和醋酸钠溶液的混合溶液，所述醋酸钠溶液所含醋酸钠的浓度为0.08mol/L～0.12mol/L，流动相B为体积比为(3.5～
4.5):1的乙腈和水的混合溶液，采用梯度洗脱。
[0012]在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～6min，所述流动相A的体积百分比由100％下降至97％；6min～9min，所述流动相A的体积百分比为97％；9min～11min，所述流动相A的体积百分比由97％下降至88％；11min～13min，所述流动相A的体积百分比为88％；13min～18min，所述流动相A的体积百分比由88％下降至80％；18min～29min，所述流动相A的体积百分比由80％下降至72％；29min～33min，所述流动相A的体积百分比由72％下降至66％；33min～36min，所述流动相A的体积百分比由66％下降至0％；36min～39min，所述流动相A的体积百分比为0％。
[0013]在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8mL/min～1.2mL/min。
[0014]在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：柱温为38℃～42℃。
[0015]在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：检测波长为252nm～256nm。
[0016]在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：进样量为4μL～6μL。
[0017]在其中一个实施例中，制备所述供试品溶液的步骤包括：对所述地龙标准汤剂或者僵蚕标准汤剂进行蛋白水解，收集水解液，除去所述水解液中的溶剂，所得残渣用溶剂溶解。
[0018]在其中一个实施例中，蛋白水解采用酸法水解。
[0019]在其中一个实施例中，所述溶剂采用盐酸的浓度为0.08mol/L～0.12mol/L的盐酸溶液。
[0020]在其中一个实施例中，所述对照品溶液的溶剂包含盐酸浓度为0.08mol/L～0.12mol/L的盐酸溶液。
[0021]在其中一个实施例中，衍生化处理采用的衍生化试剂为异硫氰酸苯酯。
[0022]在其中一个实施例中，所述特征图谱含有酪氨酸、蛋氨酸、赖氨酸和精氨酸的色谱峰。
[0023]本专利技术提供如上构建得到的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱在动物类中药及其中药制剂的鉴别中的应用。
[0024]在其中一个实施例中，所述动物类中药包含僵蚕、土鳖虫、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其炮制品和蝉蜕，或者所述动物类中药包含地龙、土鳖虫、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其炮制品和蝉蜕。
[0025]在其中一个实施例中，所述中药制剂包含中药标准汤剂和中药配方颗粒。
[0026]一种动物类中药的中药标准汤剂和中药配方颗粒中氨基酸含量的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
[0027]提供含氨基酸对照品的对照品溶液，并取待测样品制备供试品溶液；对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行衍生化处理；采用高效液相色谱法对经过衍生化处理的所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，并根据检测所得对照品色谱图和供试品色谱图中的色谱峰的峰面积，确定待测样品中氨基酸的含量；
[0028]所述动物类中药为土鳖虫、蝉蜕、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其炮制品、僵蚕或者地龙。
[0029]在其中一个实施例中，所述氨基酸对照品包含酪氨酸对照品、蛋氨酸对照品、赖氨酸对照品、精氨酸对照品、丝氨酸对照品、甘氨酸对照品、苏氨酸对照品、丙氨酸对照品、脯氨酸对照品、缬氨酸对照品、异亮氨酸对照品、亮氨酸对照品和苯丙氨酸对照品中的至少一种。
[0030]在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为C18色谱柱；流动相A为体积比为(6.5～7.5):(92.5～93.5)的乙腈和醋酸钠溶液的混合溶液，所述醋酸钠溶液所含醋酸钠的浓度为0.08mol/L～0.12mol/L，流动相B为体积比为(3.5～4.5):1的乙腈和水的混合溶液，采用梯度洗脱。
[0031]在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～6min，所述流动相A的体积百分比由100％下降至97％；6min～9min，所述流动相A的体积百分比为97％；9min～11min，所述流动相A的体积百分比由97％下降至88％；11min～13min，所述流动相A的体积百分比为88％；13min～18min，所述流动相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：提供含氨基酸对照品的对照品溶液，并取地龙标准汤剂或者僵蚕标准汤剂制备供试品溶液；对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行衍生化处理；采用高效液相色谱法对经过衍生化处理的所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，并将检测所得对照品色谱图和供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，获得氨基酸特征图谱；所述氨基酸对照品包含酪氨酸对照品、蛋氨酸对照品、赖氨酸对照品和精氨酸对照品中的至少一种。2.根据权利要求1所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，所述氨基酸对照品还包含丝氨酸对照品、甘氨酸对照品、苏氨酸对照品、丙氨酸对照品、脯氨酸对照品、缬氨酸对照品、异亮氨酸对照品、亮氨酸对照品和苯丙氨酸对照品中的至少一种。3.根据权利要求1或者2所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为C18色谱柱；流动相A为体积比为(6.5～7.5):(92.5～93.5)的乙腈和醋酸钠水溶液的混合溶液，所述醋酸钠溶液所含醋酸钠的浓度为0.08mol/L～0.12mol/L，流动相B为体积比为(3.5～4.5):1的乙腈和水的混合溶液，采用梯度洗脱。4.根据权利要求3所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，梯度洗脱的程序包括：0min～6min，所述流动相A的体积百分比由100％下降至97％；6min～9min，所述流动相A的体积百分比为97％；9min～11min，所述流动相A的体积百分比由97％下降至88％；11min～13min，所述流动相A的体积百分比为88％；13min～18min，所述流动相A的体积百分比由88％下降至80％；18min～29min，所述流动相A的体积百分比由80％下降至72％；29min～33min，所述流动相A的体积百分比由72％下降至66％；33min～36min，所述流动相A的体积百分比由66％下降至0％；36min～39min，所述流动相A的体积百分比为0％。5.根据权利要求1、2或者4所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8mL/min～1.2mL/min；或/和，柱温为38℃～42℃；或/和，检测波长为252nm～256nm；或/和，进样量为4μL～6μL。6.根据权利要求1、2或者4所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，制备所述供试品溶液的步骤包括：对所述地龙标准汤剂或者僵蚕标准汤剂进行蛋白水解，收集水解液，除去所述水解液中的溶剂，所得残渣用溶剂溶解。7.根据权利要求6所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，蛋白水解采用酸法水解；或/和，所述溶剂采用盐酸的浓度为0.08mol/L～0.12mol/L的盐酸溶液。8.根据权利要求1、2、4或者7所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，
其特征在于，所述对照品溶液的溶剂包含盐酸浓度为0.08mol/L～0.12mol/L的盐酸溶液。9.根据权利要求1、2、4或者7所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，衍生化处理采用的衍生化试剂为异硫氰酸苯酯。10.根据权利要求1、2、4或者7所述的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱的构建方法，其特征在于，所述特征图谱含有酪氨酸、蛋氨酸、赖氨酸和精氨酸的色谱峰。11.权利要求1至10任一项构建得到的动物类中药标准汤剂氨基酸特征图谱在动物类中药及其中药制剂的鉴别中的应用。12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述动物类中药包含僵蚕、土鳖虫、鸡内金及其炮制品、鳖甲及其...

【专利技术属性】
技术研发人员：童培珍，何嘉莹，魏梅，李国卫，邱韵静，曾荟，杨丽，程学仁，陈向东，孙冬梅，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：