本发明专利技术公开了螺旋富贵草碱A在制备抗肝癌药物中的应用，通过多项实验对螺旋富贵草碱A进行了进一步的药理和临床研究，活性筛选浓度为2.5μM时螺旋富贵草碱A对肝癌细胞具有明显抑制活性，并首次发现其抗肝癌作用机制不是细胞自噬和副凋亡，也不是经典细胞凋亡和DNA损伤的死亡方式，探究并推测螺旋富贵草碱A诱导肿瘤组织出现的巨泡主要是源于巨胞饮所致的巨泡式死亡，继而产生抑制肿瘤生长的效果。本发明专利技术的实验研究展示了螺旋富贵草碱A具有发展成为抗癌新药的潜质，为开发治疗肝癌的药物奠定了基础。定了基础。定了基础。
【技术实现步骤摘要】
螺旋富贵草碱A在制备抗肝癌药物中的应用
[0001]本专利技术属于中药领域，具体涉及一种螺旋富贵草碱A在制备抗肝癌药物中的应用。
技术介绍
[0002]癌症是严重威胁人们生命健康的恶性疾病，因其居高不下的发病率和死亡率已被列为全世界热点问题。在癌症的治疗中，我国的民族药已形成特有的中国抗癌治疗模式。贵州特色苗族药材三角咪(Pachysandra axillaries Franch.)属于黄杨科三角咪属(板凳果属)植物多毛板凳果的干燥根茎或全草，三角咪中含有丰富的化学成分，主要以甾体类生物碱、挥发油居多。在《中国苗族药物彩色图集》记载道，其具有祛风除湿，活血止痛之功效。但是关于三角咪中的甾体生物碱的抑制癌症活性研究报道较少。我们发现，三角咪富含生物碱，分离纯化得到了6个生物碱化合物(龚小见.柳叶白前和多毛板凳果的化学成分研究.贵州大学,2006)，在近期的活性筛选中发现其中一个生物碱螺旋富贵草碱A具有显著的抗肝癌细胞作用。“巨泡式死亡”源于希腊语，首次发现是在神经胶质母细胞瘤中。巨泡式死亡形式中，最显著的特征是产生许多的小泡，这种小泡会不断增多，相互融合，最终形成大的空泡，但对其在形态学特征、所涉及的蛋白或通路等方面的影响不清楚。
技术实现思路
[0003]本专利技术的目的在于提供螺旋富贵草碱A在制备抗肝癌药物中的应用，其对肝癌细胞具有明显抑制活性，有望开发成为肝癌新药；并首次发现螺旋富贵草碱A抗肝癌作用是一种新型的巨胞饮的巨泡式死亡机制。
[0004]为达到以上技术目的，本专利技术的技术方案为：
[0005]螺旋富贵草碱A在制备抗肝癌药物中的应用，所述螺旋富贵草碱A的结构式如下:
[0006][0007]前述应用，所述肝癌为MHCC97H细胞相关的癌症。
[0008]前述应用，所述螺旋富贵草碱A按以下方法制备：三角咪药材先用75％乙醇加热回流提取3次，合并滤液减压蒸馏至干燥浸膏，浸膏再经硅胶柱层析分离纯化得螺旋富贵草碱A纯品。
[0009]前述应用，所述螺旋富贵草碱A按以下方法制备：取三角咪药材用75％乙醇加热回流提取3次，每次2h，合并滤液减压蒸馏至干燥浸膏，加水稀释，用正丁醇萃取，正丁醇萃取物经硅胶柱层析分离，得螺旋富贵草碱A粗品，再经硅胶柱层析纯化，得螺旋富贵草碱A纯品。
[0010]前述应用，所述螺旋富贵草碱A按以下方法制备：取三角咪药材，加入5
‑
10倍药材重量75％乙醇，加热回流提取3次，每次2h，合并滤液减压蒸馏至干燥浸膏，将浸膏加水稀释，用正丁醇萃取3次，回收溶剂后得正丁醇萃取物，正丁醇萃取物经硅胶柱层析，以V
氯仿
：V
甲醇
＝1:1为洗脱剂，得螺旋富贵草碱A粗品；螺旋富贵草碱A粗品再经硅胶柱层析，以V
石油醚
：V
丙酮
：V
二乙胺
＝20:5:1为洗脱剂，得螺旋富贵草碱A纯品。
[0011]前述应用，所述螺旋富贵草碱A以单体或组合物形式入药，加入药用载体或赋形剂。
[0012]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0013]本专利技术公开了螺旋富贵草碱A在制备抗肝癌药物中的应用，通过多项实验对螺旋富贵草碱A进行了进一步的药理和临床研究，活性筛选浓度为2.5μM时螺旋富贵草碱A对肝癌细胞具有明显抑制活性，并首次发现其抗肝癌作用机制不是细胞自噬和副凋亡，也不是经典细胞凋亡和DNA损伤的死亡方式，探究并推测螺旋富贵草碱A诱导肿瘤组织出现的巨泡主要是源于巨胞饮所致的巨泡式死亡，继而产生抑制肿瘤生长的效果。本专利技术的实验研究展示了螺旋富贵草碱A具有发展成为抗癌新药的潜质，为开发治疗肝癌的药物奠定了基础。
附图说明
[0014]图1为不同浓度螺旋富贵草碱A对肝癌细胞抑制作用效果图；
[0015]图2为不同浓度螺旋富贵草碱A处理MHCC97H细胞后，不同时间点的光学显微镜观察形态变化过程；
[0016]图3为溶酶体荧光探针Lyso
‑
tracker Red染色效果图；
[0017]图4
‑
1MHCC
‑
97H细胞的WB条带图(p62和LC3蛋白)；
[0018]图4
‑
2对LC3蛋白条带的灰度分析定量；
[0019]图4
‑
3对p62蛋白条带的灰度分析定量；
[0020]图5为加入自噬抑制剂3
‑
MA的空泡现象图；
[0021]图6为荧光探针Mito
‑
tracker Green染色效果图；
[0022]图7为荧光探针ER
‑
tracker Red染色效果图；
[0023]图8
‑
1MHCC
‑
97H细胞的WB条带图(p38和p
‑
p38蛋白)；
[0024]图8
‑
2MHCC
‑
97H细胞的WB条带图(JNK,p
‑
JNK,ERK和p
‑
ERK蛋白)；
[0025]图8
‑
3对p
‑
P38蛋白条带的灰度分析定量；
[0026]图8
‑
4对p
‑
JNK和p
‑
ERK蛋白条带的灰度分析定量；
[0027]图9为荧光探针Lucifer Yellow染色效果图；
[0028]图10为荧光探针Lucifer Yellow染色电镜图片；
[0029]图11
‑
1为凋亡细胞的流式图；
[0030]图11
‑
2为凋亡细胞数目的柱状分析图；
[0031]图12
‑
1为MHCC
‑
97H细胞的WB条带图(caspase和Bcl2家族的蛋白)；
[0032]图12
‑
2为对Cleaved Caspase
‑
9和Cleaved Caspase
‑
3蛋白条带的灰度分析定量；
[0033]图12
‑
3为对Bcl2和BAX蛋白条带的灰度分析定量；
[0034]图12
‑
4为对Caspase
‑
8蛋白条带的灰度分析定量；
[0035]图13
‑
1为MHCC
‑
97H细胞的WB条带图(PARP和CleavedPARP蛋白)；
[0036]图13
‑
2为对Cleaved PARP蛋白条带的灰度分析定量；
[0037]图13
‑
3为MHCC
‑
97H细胞的WB条带图(p53和γH2A.X蛋白)；
[0038]图13
‑
4为对p53蛋白条带的灰度分析定量；
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.螺旋富贵草碱A在制备抗肝癌药物中的应用，所述螺旋富贵草碱A的结构式如下:2.根据权利要求1所述应用，其特征在于：所述肝癌为MHCC97H细胞相关的癌症。3.根据权利要求1所述应用，其特征在于：所述螺旋富贵草碱A按以下方法制备：三角咪药材先用75％乙醇加热回流提取3次，合并滤液减压蒸馏至干燥浸膏，浸膏再经硅胶柱层析分离纯化得螺旋富贵草碱A纯品。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：所述螺旋富贵草碱A按以下方法制备：取三角咪药材用75％乙醇加热回流提取3次，每次2h，合并滤液减压蒸馏至干燥浸膏，加水稀释，用正丁醇萃取，正丁醇萃取物经硅胶柱层析分离，得螺旋富贵草碱A粗品，再经硅胶柱层析纯化，得螺旋富贵草碱A纯品。5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：所述螺...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨小生，杨礼寿，范艳华，方媛，彭梅，李齐激，曹家辅，
申请(专利权)人：贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵州医科大学天然产物化学重点实验室，
类型：发明
国别省市：
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