一种质粒DNA原液制备方法技术

本发明专利技术公开了一种质粒DNA原液制备方法，其包括以下步骤：平衡质粒DNA液温度至常温，进行预浓缩至质粒DNA终浓度为500～1000μg/ml，得预浓缩液；采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤，再浓缩至合适浓度。本发明专利技术的质粒DNA原液制备方法通过控制温度条件，并同时采用质粒DNA低浓度预浓缩及通过含多元醇的洗滤缓冲液进行洗滤，可有效减少质粒DNA的聚集沉淀及机械损伤，显著提高了质粒DNA的超滤回收率，回收率可高达85％以上。回收率可高达85％以上。回收率可高达85％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种质粒DNA原液制备方法


[0001]本专利技术涉及生物制药领域，具体涉及了一种质粒DNA原液制备方法。

技术介绍

[0002]质粒DNA在进行精纯后，常通过对其进行浓缩，以使其达到药用质量标准。但因为质粒DNA在浓缩过程中，随着浓度的增大，其粘度也显著增大。这不仅易造成质粒DNA超螺旋结构的损伤，更会严重影响质粒DNA的回收率，导致制药成本的增加。现有技术中常采用中空纤维或膜包对精纯后的质粒DNA进行浓缩，并采用PBS缓冲液进行洗滤，但质粒回收率常常维持在60％～70％间，而且在超滤浓缩中质粒超螺旋构型经常存在机械损伤，造成质粒质量的下降。

技术实现思路

[0003]为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种质粒DNA原液制备方法。
[0004]本专利技术所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
[0005]一种质粒DNA原液制备方法，其包括以下步骤：平衡质粒DNA液温度至常温，进行预浓缩至质粒DNA终浓度为500～1000μg/ml，得预浓缩液；采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种质粒DNA原液制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：平衡质粒DNA液温度至常温，进行预浓缩至质粒DNA终浓度为500～1000μg/ml，得预浓缩液；采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤，再浓缩至合适浓度。2.根据权利要求1所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：(1)温度平衡：将质粒DNA液温度平衡至常温，所述常温为20～30℃；(2)预浓缩：将平衡后的质粒DNA采用超滤进行预浓缩，浓缩至质粒DNA终浓度为500～1000μg/ml，等体积维持至预浓缩结束，得预浓缩液；(3)洗滤：采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤；(4)浓缩：洗滤结束后，预浓缩液再浓缩至合适浓度。3.根据权利要求1或2所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，所述多元醇为山梨糖醇、甘露醇、季戊四醇、甘油或木糖醇。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪云，郭土敬，吴彦萍，吴灼斌，梁富，黄致翔，叶才文，刘爱和，曹静，梁琳琳，郭采平，
申请(专利权)人：深圳市卫光生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：