一种同时提取血浆和血细胞病原菌DNA的试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物技术领域，特别涉及一种同时提取血浆和血细胞病原菌DNA的试剂盒及应用，试剂盒包括抗凝剂、红细胞裂解液、白细胞裂解液、RNase A、Proteinase K、细菌细胞裂解液、蛋白沉淀剂。与现有技术相比，本发明专利技术通过将血液样本中的血浆和血细胞分离，首先提取血细胞中的病原菌的DNA，然后与血浆合并提纯得到血液样本中的全部病原菌DNA，为临床快速提供全面、准确的病原检测结果，本发明专利技术适用于多物种的血液，适用于全血病原菌DNA，包括血浆游离DNA和胞内菌DNA；获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切等实验，并且检测过程简单快速，1小时内即可获得血液中全部细菌的DNA。内即可获得血液中全部细菌的DNA。

【技术实现步骤摘要】
一种同时提取血浆和血细胞病原菌DNA的试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及分子生物
，特别涉及一种同时提取血浆和血细胞病原菌DNA的试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]随着新病原体的不断出现和抗生素的滥用，致病耐药菌不断增加，常见感染病原谱发生变化，导致新型感染性疾病以及易感人群不断增加。传统的微生物诊断技术包括：培养物中微生物的生长和分离，病原体特异性抗体（血清学）或抗原的检测以及微生物核酸（DNA或RNA）的分子鉴定，通常是通过PCR进行的。微生物感染造成的病情恶化非常迅速，因此在临床医学诊断中，如何快速准确及时地检测到病原微生物，并准确地为临床提供病原检测结果，成为现阶段检测技术的发展趋势。
[0003]宏基因组二代测序（metagenomics Next Generation Sequencing，mNGS）技术自2014年首例用于诊断中枢神经系统钩体病患者以来逐步用于临床。当我们对一份临床样本进行mNGS检测后，我们可以同时获得人类的基因序列和微生物的基因序列。除了在痰液、咽拭子、肺泡灌洗液、脑脊液等标本中有良好的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时提取血浆和血细胞病原菌DNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：S1. 将血液样本中加入抗凝剂，离心分离得到上层血浆和下层血细胞；S2. 将血细胞中加入红细胞裂解液，混合均匀，直至红细胞完全裂解，离心分离，取白细胞沉淀；S3. 将白细胞沉淀中加入白细胞裂解液、RNase A和Proteinase K，混合均匀，至白细胞完全裂解，离心分离，取沉淀；S4. 将S3得到的沉淀中加入细菌细胞裂解液、Proteinase K，混合均匀，直至细菌细胞完全裂解，离心分离，取上层清液；S5. 将S1中的上层血浆和S4得到的上层清液混合，加入蛋白沉淀剂，混合均匀，使体系中的蛋白质沉淀，离心分离，取上层清液；S6. 将S5得到的上层清液转移至Clean column柱中，过滤，去除废液；S7. 将过滤后的Clean column柱中加入漂洗液，将杂质洗脱，去除废液后，再次加入漂洗液洗脱，如此循环1
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5次；S8. 将洗脱后的Clean column柱中加入洗脱液，进行洗脱，得到血液病原菌DNA。2.根据权利要求1所述的一种同时提取血浆和血细胞病原菌DNA的提取方法，其特征在于：所述S2中血细胞与红细胞裂解液的体积比为1:（3
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5）。3.根据权利要求1所述的一种同时提取血浆和血细胞病原菌DNA的提取方法，其特征在于：所述S3中，裂解温度为30
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40℃，裂解时间为10
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30min。4.根据权利要求1所述的一种同时...

【专利技术属性】
技术研发人员：盖伟，宋翠丹，魏雪，郑亚风，马桂红，
申请(专利权)人：北京微岩医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：