一种人参不定根中人参皂苷的转化方法技术

本发明专利技术公开了一种人参不定根中人参皂苷的转化方法，包括以下步骤：(1)制备人参不定根样品；(2)向人参不定根样品中加入碱液，升温至85

【技术实现步骤摘要】
一种人参不定根中人参皂苷的转化方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养
，具体地说，涉及一种人参不定根中人参皂苷的转化方法。

技术介绍

[0002]人参(Panax ginseng C.A.Mey.)是五加科人参属植物，分布于中国、日本、韩国，其根茎是名贵的中药材，号称“百草之王”。人参味甘、微苦，微温，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智等功效，多用于体恤欲脱，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，惊悸失眠等。人参皂苷是人参主要的活性成分，有抗疲劳、延缓衰老、调节中枢神经系统、提高机体免疫力、改善心脑血管供血不足、抑制肿瘤细胞生产等功效。近年来，人参被广泛地用在各类化妆品、保健品、饮品中。人参的市场前景非常广阔。
[0003]目前由于过度采挖、环境破坏等，野生人参资源几乎灭绝，大田栽培是人参的主要来源。然而人参生长缓慢，种植年限长，对环境条件要求严格，其品质易受气候、栽培条件及病虫害的影响，栽培技术复杂以及农残超标、老参地等问题也极大地限制了人工栽培人参的发展前景。大田栽培人参供应难以满足市场的需求。人参组织培养技术周期短，不受季节限制，容易进行大规模的工业化生产，具有很大的发展前景。
[0004]目前不定根一般是由人参愈伤组织诱导产生的，需要先诱导产生愈伤组织，再诱导产生不定根，所需的实验周期长，操作步骤复杂，污染风险较高的问题。另外，培养的人参中还存在人参皂苷含量低，难以满足临床应用需求的问题。
[0005]申请号为CN201711459037.0的中国专利申请公开了一种野人参不定根组织培养的方法，包括如下步骤：(1)野人参愈伤组织的诱导；(2)野人参愈伤组织的增殖；(3)野人参不定根的诱导；(4)液体培养基中野人参不定根增殖。上述技术方案中，需要先诱导愈伤组织，再诱导不定根，所需要的周期长，过程复杂，且人参皂苷的含量也不高。
[0006]申请号为201410698528.0的中国专利公开了一种人参不定根诱导增殖方法，包括以下步骤：将人参组培苗切割成组织小块后接种于固体诱导培养基中诱导形成不定根，将所述不定根切割成不定根小块后接种于液体增殖培养基中进行不定根的增殖培养；其中，所述固体诱导培养基和液体增殖培养基为以1/2MS(
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N)培养基为基本培养基含有浓度为1
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10mg/L的吲哚丁酸。上述方案中，将日龄为28
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32天的组培苗切成小块直接诱导不定根，组培苗幼嫩，分化能力强，且实际上需要先经过种子萌发或者外植体培养获得组培苗，仍然需要至少28
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32天的时间，外植体培养仍然需要诱导愈伤组织。因此，实际上并没有缩短周期。因此，倘若能够探索获得一种能够从成熟人参直接诱导产生不定根的方法，不但能够缩减诱导周期，简化诱导条件的方法则具有广泛的意义。
[0007]另外，目前不定根中皂苷的转化方法也较为繁琐，若能够获得稀有皂苷转化率高、方便快捷的转化方法则能够进一步提高效率。
[0008]有鉴于此特提出本专利技术。

技术实现思路

[0009]本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种人参不定根中人参皂苷的转化方法。本专利技术中，由成熟人参的各个部分诱导产生不定根，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以简化诱导步骤、缩短诱导时间；不定根中人参皂苷的转化方法步骤简单，易于操作，稀有皂苷转化率高。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术采用技术方案的基本构思是：
[0011]本专利技术的第一目的是提供一种人参不定根中人参皂苷的转化方法，包括以下步骤：
[0012](1)制备人参不定根样品；
[0013](2)向人参不定根样品中加入碱液，升温至85
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125℃，保温20
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60min，降至室温，然后重复升温、保温和降温的过程，检测处理后样品中人参皂苷的含量。
[0014]各种人参皂苷在人参属植物中含量不同，并且具有不同的药理功能。有些人参皂苷含量较高，如Re、Rb1和Rg1等，而另外一些人参皂苷含量甚微，称为稀有人参皂苷，如Rh1、Rh2、Rh3和Rg3等。
[0015]许多药理研究表明，稀有人参皂苷通常具有更好的药理活性。人参皂苷苷元的抗肿瘤活性最强，随着糖基数目的增加，人参皂苷抗肿瘤活性依次减弱，即：苷元>单糖苷>二糖苷>三糖苷>四糖苷。通过研究人参皂苷在体内的代谢规律，也发现绝大多数人参皂苷在胃肠道中吸收较差，而脱去糖基的次级苷和苷元比皂苷具有更强的药理活性和更高的生物利用度。稀有人参皂苷和苷元在人参原植物、细胞培养物、不定根及毛状根中含量甚微，目前主要通过物理法和化学法水解皂苷糖苷键获得，或者通过酶法、微生物法进行生物法转化，较为繁琐。
[0016]本专利技术提供的不定根中人参皂苷的转化方法步骤简单，易于操作，稀有皂苷转化率高。
[0017]进一步的方案，步骤(1)中，所述人参不定根样品的制备方法包括：
[0018]取人参不定根，用清水冲洗，剪成小段，加适量水，将小段研碎，按重量分为若干等份，其中一份为对照样品，其他等份为供试样品。
[0019]进一步的方案，所述对照品样品不做处理，所述供试样品中碱液的浓度为2
‑
8mmol/L。
[0020]进一步的方案，步骤(2)中，重复升温、保温和降温的过程，处理2
‑
6次。
[0021]进一步的方案，步骤(2)中，所述碱液选自碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠中的至少一种；
[0022]优选碳酸钠。
[0023]作为一种优选的实施方案，步骤(2)中，向人参不定根样品中加入碳酸钠溶液，人参不定根样品中Na2CO3的浓度为2mmol/L，升温至115℃，保温30min，降温后再重复升温、保温和降温过程，处理4次。
[0024]采用上述优选的条件，添加的碱液为Na2CO3，可以避免碱污染，有利于保护环境，且步骤简单方便，易于操作，同时得到的稀有皂苷Rh2的含量高。
[0025]进一步的方案，步骤(3)中，处理样品的方法包括：将处理后的样品转移到50ml离心管中，加入水混匀，超声破碎，然后冻干；再将冻干后的样品在研钵上研细，准确称取50mg
于离心管中，加入70％甲醇溶液，涡旋，超声振荡，过滤备用。
[0026]本专利技术上述方法中采用的不定根由成熟人参直接诱导产生，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以简化诱导步骤、缩短诱导时间。
[0027]本专利技术的第二目的是提供一种人参不定根的培养方法，将成熟人参清洗消毒，切片，接种到诱导培养基中诱导出人参不定根；将获得的人参不定根再次接种到诱导培养基中继代培养扩繁；然后将获得的人参不定根剪切成段，接种到液体培养基中培养获得不定根。
[0028]目前不定根一般是由人参愈伤组织诱导产生的，需要先诱导产生愈伤组织，再诱导产生不定根，所需的实验周期长，操作步骤复杂，污染风险较高的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人参不定根中人参皂苷的转化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备人参不定根样品；(2)向人参不定根样品中加入碱液，升温至85
‑
125℃，保温20
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60min，降至室温，然后重复升温、保温和降温的过程；(3)处理样品，检测人参皂苷的含量。2.根据权利要求1所述的人参不定根中人参皂苷的转化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述人参不定根样品的制备方法包括：取人参不定根，用清水冲洗，剪成小段，将小段研碎，按重量分为若干等份，其中一份为对照样品，其他等份为供试样品。3.根据权利要求2所述的人参不定根中人参皂苷的转化方法，其特征在于，所述对照品样品不做处理，所述供试样品中碱液的浓度为2
‑
8mmol/L。4.根据权利要求1
‑
3任意一项所述的人参不定根中人参皂苷的转化方法，其特征在于，步骤(2)中，重复升温、保温和降温的过程，处理2
‑
6次。5.根据权利要求1
‑
4任意一项所述的人参不定根中人参皂苷的转化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述碱液选自碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠中的至少一种；优选碳酸钠。6.根据权利要求1
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5任意一项所述的人参不定根中人参皂苷的转化方法，其特征在于，步骤(2)中，向人参不定根样品中加入碳酸钠溶液，人参不定根样品中Na2CO3的浓度为2mmol/L，升温至115℃，保温30min，降温后再重复升温、保温和降温过程，处理4次。7.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：高秀君，刘冰，张明臣，闫培生，
申请(专利权)人：山东安然纳米实业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：