一种人参不定根培养的液体培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了一种人参不定根培养的液体培养基及培养方法，液体培养基包括：15

【技术实现步骤摘要】
一种人参不定根培养的液体培养基及培养方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养
，具体地说，涉及一种人参不定根培养的液体培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]人参(Panax ginseng C.A.Mey.)是五加科人参属植物，分布于中国、日本、韩国，其根茎是名贵的中药材，号称“百草之王”。人参味甘、微苦，微温，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智等功效，多用于体恤欲脱，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，惊悸失眠等。人参皂苷是人参主要的活性成分，有抗疲劳、延缓衰老、调节中枢神经系统、提高机体免疫力、改善心脑血管供血不足、抑制肿瘤细胞生产等功效。近年来，人参被广泛地用在各类化妆品、保健品、饮品中，人参的市场前景非常广阔。
[0003]目前由于过度采挖、环境破坏等，野生人参资源几乎灭绝，大田栽培是人参的主要来源。然而人参生长缓慢，种植年限长，对环境条件要求严格，其品质易受气候、栽培条件及病虫害的影响，栽培技术复杂以及农残超标、老参地等问题也极大地限制了人工栽培人参的发展前景。大田栽培人参供应难以满足市场的需求。人参组织培养技术周期短，不受季节限制，容易进行大规模的工业化生产，具有很大的发展前景。
[0004]目前不定根一般是由人参愈伤组织诱导产生的，需要先诱导产生愈伤组织，再诱导产生不定根，所需的实验周期长，操作步骤复杂，污染风险较高的问题。另外，培养的人参中还存在人参皂苷含量低，难以满足临床应用需求的问题。
[0005]申请号为CN201711459037.0的中国专利申请公开了一种野人参不定根组织培养的方法，包括如下步骤：(1)野人参愈伤组织的诱导；(2)野人参愈伤组织的增殖；(3)野人参不定根的诱导；(4)液体培养基中野人参不定根增殖。上述技术方案中，需要先诱导愈伤组织，再诱导不定根，所需要的周期长，过程复杂，且人参皂苷的含量也不高。
[0006]申请号为201410698528.0的中国专利公开了一种人参不定根诱导增殖方法，包括以下步骤：将人参组培苗切割成组织小块后接种于固体诱导培养基中诱导形成不定根，将所述不定根切割成不定根小块后接种于液体增殖培养基中进行不定根的增殖培养；其中，所述固体诱导培养基和液体增殖培养基为以1/2MS(
‑
N)培养基为基本培养基含有浓度为1
‑
10mg/L的吲哚丁酸。上述方案中，将日龄为28
‑
32天的组培苗切成小块直接诱导不定根，组培苗幼嫩，分化能力强，且实际上需要先经过种子萌发或者外植体培养获得组培苗，仍然需要至少28
‑
32天的时间，外植体培养仍然需要诱导愈伤组织，且实际上并没有缩短周期。
[0007]因此，倘若能够探索获得一种能够从成熟人参直接诱导产生不定根的方法，不但能够缩减诱导周期，简化诱导条件，又能够提高人参不定根中有效成分含量的方法则具有广泛的意义。
[0008]有鉴于此特提出本专利技术。

技术实现思路

[0009]本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种人参不定根培养的液体培养基及培养方法。本专利技术的不定根的培养方法，成熟人参的各个部分诱导产生不定根，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以简化诱导步骤、缩短诱导时间，进一步采用本专利技术的液体培养基，不定根的增长倍数高，还能够大大提高不定根中人参皂苷的含量。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术采用技术方案的基本构思是：
[0011]本专利技术的第一目的是提供一种人参不定根培养的液体培养基，液体培养基包括：15
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50g/L蔗糖，0.6
‑
2.4g/L WPM培养基，1
‑
2g/L N6培养基，0
‑
225mg/L柠檬酸，0
‑
7mg/L吲哚丁酸。
[0012]进一步的方案，还包括0
‑
150mg/L抗坏血酸。
[0013]作为一种优选的方案，液体培养基包括：35
‑
45g/L蔗糖，1g/L N6培养基，0.6
‑
1.2g/L WPM培养基，0
‑
50mg/L抗坏血酸，75
‑
225mg/L柠檬酸，1
‑
3mg/L吲哚丁酸。
[0014]本专利技术的液体培养基既适用于培养本专利技术中采用一步法，由成熟人参诱导产生的不定根；也可以用于培养现有技术中采用两步法产生的不定根。采用以上成分和配比的液体培养基培养一步法诱导产生的不定根，不定根的增长倍数高，同时还能够大大提高人参不定根中人参皂苷的含量。
[0015]作为一种更优选的方案，液体培养基包括：35g/L蔗糖，1.2g/L WPM培养基，1g/L N6培养基，50mg/L抗坏血酸，225mg/L柠檬酸，3mg/L吲哚丁酸。
[0016]采用上述优选实施方式的液体培养基培养的不定根，不定根增长倍数与总皂苷含量综合最佳。
[0017]本专利技术的第二目的是提供一种人参不定根的培养方法，将成熟人参清洗消毒，切片，接种到诱导培养基中诱导出人参不定根；将获得的人参不定根再次接种到诱导培养基中继代培养扩繁；然后将获得的人参不定根剪切成段，接种到以上任意方案所述的液体培养基中培养获得不定根。
[0018]目前不定根一般是由人参愈伤组织诱导产生的，需要先诱导产生愈伤组织，再诱导产生不定根，所需的实验周期长，操作步骤复杂，污染风险较高的问题。另外，培养的人参中还存在人参皂苷含量低，难以满足临床应用需求的问题。
[0019]鉴于成熟人参参龄较长，成熟度高，不易再进行分化，目前还没有可以直接从成熟人参诱导不定根的报道。而本专利技术经过大量的试验，意外的发现在特定诱导培养基上，成熟人参切片可以直接诱导产生不定根，如此，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以直接从成熟参一步诱导得到不定根，从而可以简化诱导步骤、缩短诱导时间。
[0020]进一步的方案，所述诱导培养基包括1
‑
6mg/L萘乙酸，0.2
‑
1mg/L赤霉素，0.1
‑
0.6mg/L激动素，0.75
‑
1.5g/L柠檬酸，0.03
‑
1g/L抗坏血酸，1
‑
4g/L B5培养基和1
‑
2.4g/L WPM培养基。
[0021]上述方案的诱导培养基，实现了成熟参的各个部分直接诱导产生不定根，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，从而可以简化诱导步骤、缩短诱导时间。
[0022]本方案中，萘乙酸是植物生长调节剂，赤霉素是植物激素，均可以促进不定根形成。激动素为一种细胞分裂素，可以促进细胞的分裂。柠檬酸和抗坏血酸能够产生协同抗氧化的作用，防止成熟人参离体组织褐变，有利于从成熟参离体组织直接诱导不定根。诱导培
养基中各个成分协同作用，最终实现了从成熟参的各个部分直接诱导产生不定根，而不需要诱导愈伤组织的中间步骤。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人参不定根培养的液体培养基，其特征在于，液体培养基包括：15
‑
50g/L蔗糖，0.6
‑
2.4g/L WPM培养基，1
‑
2g/L N6培养基，0
‑
225mg/L柠檬酸，0
‑
7mg/L吲哚丁酸。2.根据权利要求1所述的液体培养基，其特征在于，还包括0
‑
150mg/L抗坏血酸。3.根据权利要求2所述的液体培养基，其特征在于，包括：35
‑
45g/L蔗糖，1g/L N6培养基，0.6
‑
1.2g/L WPM培养基，0
‑
50mg/L抗坏血酸，75
‑
225mg/L柠檬酸，1
‑
3mg/L吲哚丁酸。4.根据权利要求3所述的液体培养基，其特征在于，包括：35g/L蔗糖，1g/L N6培养基，1.2g/L WPM培养基，50mg/L抗坏血酸，225mg/L柠檬酸，3mg/L吲哚丁酸。5.一种人参不定根的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将成熟人参清洗消毒，切片，接种到诱导培养基中诱导出人参不定根；将获得的人参不定根再次接种到诱导培养基中继代培养扩繁；然后将获得的人参不定根剪切成段，接种到如权利要求1
‑
4任意一项所述的液体培养基中培养获得不定根。6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述诱导培养基包括1
‑
6mg/L萘乙酸，0.2
‑
1mg/L赤霉素，0.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫培生，刘冰，张明臣，高秀君，
申请(专利权)人：山东安然纳米实业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：