本发明专利技术公开了一种植物源小分子化感物质在生态防治水华爆发中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：1)藻类的活化；2)植物源小分子化感物质的抑制作用；3)植物源小分子化感物质的半抑制浓度IC50测定。本发明专利技术以小分子化感物质为切入点，以小球藻作为藻类生物代表，测定小分子化感物质的抑藻活性。结果表面，本发明专利技术的小分子化感物质能够有效抑制藻类的生物活性，在生态防治水华爆发中具有重要意义和应用。和应用。
【技术实现步骤摘要】
一种植物源小分子化感物质在生态防治水华爆发中的应用
[0001]本专利技术属于环境治理
，具体而言，涉及一种植物源小分子化感物质在生态防治水华爆发中的应用。
技术介绍
[0002]在当代众多的环境问题中，水体富营养化是严峻的水污染之一。来自城市化、工业化、农业现代化等人类活动导致的营养盐(主要是N、P)含量过高，导致藻类、浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象，破坏生态系统。水华的爆发还会伴随着大量的藻毒素的产生。这些毒素会通过生物富集对人体产生危害。
[0003]水华是指淡水水体中某些蓝藻类过度生长所产生的现象。主要优势种有束丝藻、微胞藻、鱼腥藻、空球藻或隐球藻等。小球藻为绿藻门、小球藻属、普生性单细胞绿藻，为淡水球形或椭圆形单细胞藻类，直径3～8微米，是地球上出现的最早生命之一，其光合作用能力是其他植物的几十倍，其繁殖能力与适应能力很强。因此，以自然界中分布范围极广，种类繁多，对温度和气候条件等适应能力较强，小球藻在海洋、湖泊、沟渠、池塘以及潮湿的土壤等环境中均可以生长繁殖。
[0004]化感作用(allelopathy)是某些植物、藻类、细菌和病毒等产生的一种或多种生物分子影响其他生物的生长、生存或繁殖的生物现象。目前尚未公开有小分子化感物质(大多可以微生物发酵产生)在抑制藻类生长方面的作用。
技术实现思路
[0005]针对上述问题，本专利技术提供了一种植物源小分子化感物质在生态防治水华爆发中的应用。本专利技术的小分子化感物质能够有效抑制藻类生长，在生态防治水华作用中具有重要应用。
[0006]本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0007]本专利技术提供了一种植物源小分子化感物质在生态防治水华爆发中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：
[0008]1)藻类的活化：将试管内的藻液摇匀，在无菌操作下直接转入玻璃三角瓶内，封好瓶口在光照培养箱内培养，取5
‑
10mL藻液加入10
‑
20mL新鲜培养基进行活化，在无菌的三角瓶内培养15d左右，至藻种生长状态好，进行扩大培养，转接比例1:5(藻液：培养基)，人工摇动三角瓶2次/d；
[0009]2)植物源小分子化感物质的抑制作用：将植物源小分子化感物质用二甲亚砜配制成为100mg/mL的储备液，并稀释至浓度为10mg/mL，每个孔加入10μL试样以及990μL的藻类，并设定二甲亚砜为对照组、培养基为空白对照组以及苯扎氯胺为阳性对照组，用膜封好口，在光照培养箱内培养，七天后测得其OD
650nm
值，相对应计算各个植物源化感物质的抑制率；
[0010]3)植物源小分子化感物质的半抑制浓度IC50测定：在锥形瓶中加入100mL培养基、1mL对数生长期的藻和100μL植物源小分子化感物质，使得其终浓度分别为1、10、25、50mg/
mL，并设定二甲亚砜为对照组、培养基为空白对照组以及苯扎氯胺为阳性对照组，培养7天，第1天、第3天、第5天和第7天对培养的藻细胞进行取样计数(x400)，根据上述初步浓度的化合物抑藻效果，在合适的浓度范围内对毎种化合物增加多个处理浓度梯度，测定其抑藻效果，使得更精确的计算各种化合物的半抑制浓度。
[0011]优选地，所述植物源小分子化感物质包括以下物质的一种或多种：山萘酚、木犀草素、芦丁、高良姜素、三尖杉酯碱、芹菜素、灵菌红、黄芩素、茄尼醇、橙皮甙、白杨素、C
23
H
24
N2O2、C
18
H
21
NO5S、C
18
H
21
N5O4、C
15
H
18
C
l2
N2O2、C
21
H
21
NO4、C
18
H
22
N2O4、C
23
H
25
N5O2S、C
14
H
10
C
l2
N2O4、C
16
H
23
N3O4。
[0012]优选地，所述藻类包括小球藻、束丝藻、微胞藻、鱼腥藻、空球藻、隐球藻、蓝藻、硅藻。
[0013]优选地，步骤1)中所述培养条件为：培养温度25℃，光照条件2000Lux，时间设置16Hr昼/8Hr夜。
[0014]优选地，步骤2)中所述培养条件为：培养温度25℃，光照条件2000Lux，时间设置16Hr昼/8Hr夜，藻细胞培养7天。
[0015]优选地，步骤2)中所述抑制率计算公式为：
[0016][0017]式中，A：该化合物对小球藻的抑制率；N0：空白对照组小球藻密度，cells/mL；Ns：实验组小球藻密度，cells/mL。
[0018]优选地，步骤3)中所述藻初始浓度为5
×
105cell/mL。
[0019]优选地，步骤3)中所述半抑制浓度IC
50
计算方法为：将各浓度的化合物对小球藻的生长抑制率以SPSS20.0中的概率单位回归(probit regression)进行曲线拟合，并计算50％抑制率所对应的该化合物的浓度，即为该化合物的半抑制浓度IC
50
。
[0020]借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点：本专利技术以小分子化感物质为切入点，以小球藻作为藻类生物代表，测定小分子化感物质的抑藻活性。结果表面，本专利技术的小分子化感物质能够有效抑制藻类的生物活性，在生态防治水华爆发中具有重要意义和应用。
[0021]上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例详细说明如后。
具体实施方式
[0022]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]实施例1小球藻的活化与生长状况测定
[0024]将试管内的藻液摇匀，在无菌操作下直接转入玻璃三角瓶(20mL
‑
50mL)内，封好瓶口在光照培养箱内培养，培养温度25℃，光照条件2000Lux，时间设置16Hr昼/8Hr夜。取5
‑
10mL藻液加入10
‑
20mL新鲜培养基进行活化，在无菌的三角瓶内培养15d左右，至藻种生长状态好，进行扩大培养，转接比例1:5(藻液：培养基)。人工摇动三角瓶2次/d。
[0025]由于处于对数生长期的藻类细胞生长代谢旺盛，所以用处于对数生长期的藻液进行紫外可见光的全波段本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种植物源小分子化感物质在生态防治水华爆发中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：1)藻类的活化：将试管内的藻液摇匀，在无菌操作下直接转入玻璃三角瓶内，封好瓶口在光照培养箱内培养，取5
‑
10mL藻液加入10
‑
20mL新鲜培养基进行活化，在无菌的三角瓶内培养15d左右，至藻种生长状态好，进行扩大培养，转接比例1:5(藻液：培养基)，人工摇动三角瓶2次/d；2)植物源小分子化感物质的抑制作用：将植物源小分子化感物质用二甲亚砜配制成为100mg/mL的储备液，并稀释至浓度为10mg/mL，每个孔加入10μL试样以及990μL的藻类，并设定二甲亚砜为对照组、培养基为空白对照组以及苯扎氯胺为阳性对照组，用膜封好口，在光照培养箱内培养，七天后测得其OD
650nm
值，相对应计算各个植物源化感物质的抑制率；3)植物源小分子化感物质的半抑制浓度IC50测定：在锥形瓶中加入100mL培养基、1mL对数生长期的藻和100μL植物源小分子化感物质，使得其终浓度分别为1、10、25、50mg/mL，并设定二甲亚砜为对照组、培养基为空白对照组以及苯扎氯胺为阳性对照组，培养7天，第1天、第3天、第5天和第7天对培养的藻细胞进行取样计数(x400)，根据上述初步浓度的化合物抑藻效果，在合适的浓度范围内对毎种化合物增加多个处理浓度梯度，测定其抑藻效果，使得更精确的计算各种化合物的半抑制浓度。2.根据权利要求1所述的植物源小分子化感物质在生态防治水华爆发中的应用，其特征在于，所述植物源小分子化感物质包括以下物质的一种或多种：山萘酚、木犀草素、芦丁、高良姜素、三尖杉酯碱、芹菜素、灵菌红、黄芩素、茄尼醇、橙皮甙、白杨素、C
23
H
24
N2O2、C
18
H
21
NO5S、C
18
H
21
N5O4、C
15
H
18
C
【专利技术属性】
技术研发人员：孙诗清，赵永军，胡长伟，刘娟，徐微，李俊峰，曹卫星，孙辰，
申请(专利权)人：嘉兴南湖学院，
类型：发明
国别省市：
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