一种固相合成DNA的氨解预处理液及氨解方法技术

本发明专利技术提供了一种固相合成DNA的氨解预处理液及氨解方法，所述DNA氨解预处理液由水与有机溶剂构成；其中，有机体积百分比为70％～80％，所述有机溶剂选自乙腈、乙醇或甲醇中的一种或多种。与现有技术相比，本发明专利技术的有益效果在于：通过配制水与乙腈合理比例配制的DNA氨解预处理液，在保证可以提高氨解效率的同时又能进一步提高产率。又能进一步提高产率。

【技术实现步骤摘要】
一种固相合成DNA的氨解预处理液及氨解方法


[0001]本专利技术为固相DNA合成领域，具体涉及一种固相合成DNA的氨解预处理液及氨解方法。

技术介绍

[0002]固相亚磷酰胺三酯法为现在合成DNA的常用方法，其反应的基本原理是溶液中的亚磷酰胺单体通过缩合反应形成3
’‑5’
磷酸二酯键，连接到固相载体上，并依次延伸，直到序列的最后一个5
’
碱基连接上合成结束。整个合成过程仪器自动完成，每个循环按脱保护、活化、偶合、盖帽及氧化五个步骤依次完成。
[0003]在DNA合成仪完成了对DNA的合成步骤后，其产物会连接在固相载体上。接下来会用氨解将产物从固相载体上进行脱离，纯化后得到产物。在现有的氨解方法中，有采用直接进行氨水氨解的，有采用氨气加水蒸气混合氨解的，但是其氨解的效率均不高，导致后续的DNA合成产率受到影响。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种固相合成DNA的氨解预处理液及氨解方法。
[0005]具体技术方案为：
[0006]一种DNA氨解预处理液，其不同之处在于，所述DNA氨解预处理液由水与有机溶剂构成；其中，所述有机溶剂的体积百分比为70％～80％，所述有机溶剂选自乙腈、乙醇或甲醇中的一种或多种。
[0007]进一步，所述有机溶剂为乙腈。
[0008]一种固相合成DNA的氨解方法，其不同之处在于，包括如下步骤：
[0009]步骤S1:向用于装有合成DNA片段的固相载体的合成柱内加入上述的DNA氨解预处理液进行润湿；
[0010]步骤S2：采用氨气与水蒸气的混合气体进行氨解，然后采用洗脱液进行脱附，得到DNA产物。
[0011]进一步，所述步骤S2中，氨解时间为90min，氨解温度为90℃。
[0012]进一步，所述步骤S2中，经过氨解处理后，再用洗涤液洗去无机盐，再用洗脱液进行脱附，所述洗脱液为水。
[0013]进一步，所述洗涤液为乙腈。
[0014]进一步，所述步骤S1中，加入所述氨解预处理液的体积大于所述合成柱的体积。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0016](1)本专利技术提供了用于氨解的预处理液，通过配制水与有机溶剂的合理比例配制的DNA氨解预处理液，在保证可以提高氨解效率的同时又能进一步提高产率。
[0017](2)选取乙腈作为有机溶剂，乙腈无毒，极性大，性质稳定，不与粗产品中的不稳定的试剂发生反应，相较于其余有机溶剂，选其作为氨解预处理液的组分，有利于进一步提高
氨解效率与产物产率，且价格低廉，有利于进一步的降低成本。
[0018](3)与现有技术相比，本专利技术的氨解方法采用DNA氨解预处理液先进行润湿，然后再进行气相氨解，提高了氨解效率，提高了DNA产物的收率。
[0019](4)本专利技术氨解方法加入氨解柱时，不需要严格控制氨解预处理液的加入含量，操作简便。
具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0021]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，但不止用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0022]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0023]本专利技术实施例涉及原料说明如下：
[0024]固相合成DNA的粗品由Mermade192E DNA合成仪进行合成：选择T10mers(TTTT TTTT TT(5
’‑3’
))做为寡核苷酸的序列，合成柱为50nmol通用合成柱(参数：合成柱载量78nmol；CV值：9.1％；气阻值18～22mmHg；CPG Frits体积：50.20ul，品牌：深逗点生物技术有限公司)。
[0025]实施例1
[0026]本实施例提供一种固相合成DNA的氨解预处理液，具体成分如下：
[0027]水：30％(v/v)；乙腈：70％(v/v)。
[0028]本实施例还提供一种利用上述DNA氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
[0029](1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积大于合成柱的体积即可；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
[0030](2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
[0031](3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
[0032]实施例2
[0033]本实施例提供一种固相合成DNA的氨解预处理液，具体成分如下：
[0034]水：20％(v/v)；乙腈：80％(v/v)。
[0035]本实施例还提供一种利用上述DNA氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
[0036](1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积大于合成柱的体积即可；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
[0037](2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
[0038](3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭
菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
[0039]对比例1
[0040]本对比例提供一种固相合成DNA的氨解预处理液，具体成分如下：
[0041]水：90％(v/v)；乙腈：10％(v/v)。
[0042]本对比例还提供一种利用上述DNA氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
[0043](1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积与实施例3加入的体积相同；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分扩散润湿。
[0044](2)放入气相氨解仪里，加入400pa的氨气与水蒸气，密封，反应时间90min，反应温度90℃。
[0045](3)将氨解完成的合成柱，用无水乙腈洗去无机盐成分的杂质，用200ul体积的灭菌后的高纯水两次洗脱并回收寡核苷酸。
[0046]对比例2
[0047]本对比例提供一种固相合成DNA的氨解预处理液，具体成分如下：
[0048]水：50％(v/v)；乙腈：50％(v/v)。
[0049]本实施例还提供一种利用上述DNA氨解预处理液进行氨解的方法，具体操作如下：
[0050](1)将氨解预处理液加入合成柱中，加入体积大于合成柱的体积即可；并对合成柱进行抽真空处理，直至氨解预处理液在合成柱中充分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA氨解预处理液，其特征在于，所述DNA氨解预处理液由水与有机溶剂构成；其中，所述有机溶剂的体积百分比为70％～80％，所述有机溶剂选自乙腈、乙醇或甲醇中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的DNA氨解预处理液，其特征在于，所述有机溶剂为乙腈。3.一种固相合成DNA的氨解方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1:向用于装有合成DNA片段的固相载体的合成柱内加入权利要求1或2所述的DNA氨解预处理液进行润湿；步骤S2：采用氨气与水蒸汽的混合气体进行氨解，然后采用洗脱液进行脱附，得到DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：张钦，樊梓龙，刘俊，赵梦婷，
申请(专利权)人：武汉奥科鼎盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：