用于二代测序的高效率磷酸化标记核酸的制备方法技术

本发明专利技术公开了用于二代测序的高效率磷酸化标记核酸的制备方法，通过以固体化学磷酸化试剂II为例，首先从羟基中提取质子，从而生成甲醛，其余部分很快发生，得到5'

【技术实现步骤摘要】
用于二代测序的高效率磷酸化标记核酸的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及用于二代测序的高效率磷酸化标记核酸的制备方法。

技术介绍

[0002]含有5'
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磷酸基团的寡核苷酸可用于分子生物学中，用于多种目的：例如，作为接头和衔接子，用于克隆和基因构建以及在连接酶链反应中。古老的T4多核苷酸激酶通过使用ATP作为磷酸盐来源将5'
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末端磷酸化，为研究人员提供了很好的服务。
[0003]多年来，由于可以方便地在合成器上使用，并且5'
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磷酸的收率通常比激酶高得多，因此，作为磺酰乙基亚磷酰胺的一种化学替代品，磺酰乙基亚磷酰胺化学磷酸化试剂已变得越来越流行。该试剂包括二甲氧基三苯甲基(DMT)保护基，可以在合成仪上将其除去，从而确定磷酸化效率。然而，DMT保护基不能用于DMT纯化，如果DMT基团有意留在寡核苷酸上，则它会与磺酰基乙基一起消除，从而在氨水脱保护过程中产生5'
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磷酸，可以作为化学磷酸化试剂(CPR)的备用材料。磷酸酯是通过二乙基磺酰基的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于二代测序的高效率磷酸化标记核酸的制备方法，其特征在于，包括以下以下步骤：步骤一、合成：S11：通过固相亚磷酸酰胺三脂法将DNA固定在固相载体上，经过脱保护、耦连、加帽、氧化四步循环反应，逐步将若干个核苷酸单体依次连接上去，最终完成DNA链的合成，得到磷酸修饰的单体；S12：通过固相亚磷酰胺三酯法将DNA固定在固相载体上，经过脱保护、耦连、加帽、氧化四步循环反应，逐步将磷酸修饰的单体连接到DNA的5'端，得到中间体1；步骤二、纯化：S21：将中间体1通过标准脱保护操作得到中间体2；S22：将中间体2经过反相HPLC纯化，进一步提纯，然后将提纯后的产物加入至体积分数为20％的醋酸中，充分震荡后静置1小时，完全脱除DMT，得到中间体3；步骤三、消除反应：S31：中间体3通过在体积分数为20％的醋酸中处理后，DNA片段上生成羟基，之后加入氨水静止15分钟，经过反应得到目标产物，即磷酸化修饰的DNA片段；步骤四、脱盐处理：将目标产物最后再通过C18柱脱盐，除去盐分，得到高纯度磷酸化的产物，即用于二代测序的高效率磷酸化标记核酸。2.根据权利要求1所述的用于二代测序的高效率磷酸化标记核酸的制备方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宗文，雍金贵，赵佩凤，
申请(专利权)人：通用生物系统安徽有限公司，
类型：发明
国别省市：