一种头孢羟氨苄原料药及其制剂中聚合物杂质的检测方法技术

本发明专利技术提供一种头孢羟氨苄原料药或其制剂中聚合物杂质的检测方法，基于反相高效液相色谱法，包括色谱条件的建立和聚合物杂质定位对照溶液的制备；其中，所述色谱条件为：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：以pH4.8～5.2的0.02mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱；流速：0.9～1.1ml/min；柱温：28～32℃；检测波长：220nm。本发明专利技术提供的头孢羟氨苄原料药或其制剂中聚合物杂质的检测方法，能够同时检测出多种聚合物杂质，各聚合物杂质分离度好，且本方法能够排除头孢羟氨苄原料药或其制剂中小分子杂质的干扰。羟氨苄原料药或其制剂中小分子杂质的干扰。

【技术实现步骤摘要】
一种头孢羟氨苄原料药及其制剂中聚合物杂质的检测方法


[0001]本专利技术属于分析化学和药物质量控制领域，具体涉及一种检测头孢羟氨苄原料药及其制剂中聚合物杂质的方法。

技术介绍

[0002]抗生素中的高分子杂质容易诱发过敏反应，威胁患者用药安全，因此需要严格控制其含量。高分子杂质主要包括外源性的高分子杂质和内源性的聚合物杂质。其中外源性的高分子杂质是由发酵工艺引入的残留蛋白、核酸、多糖与抗生素结合而生成的；内源性的聚合物杂质是抗生素分子之间通过共价键的形式结合形成的一系列不同分子量、不同立体结构的杂质，主要包括二聚体、三聚体、多聚体以及它们的异构体等。β
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内酰胺类抗生素分子中通常含有游离的氨基和结构不稳定的四元内酰胺环，容易发生氨基进攻四元内酰胺环的酰胺键，产生聚合物杂质。随着抗生素生产工艺的优化，过程控制日益严格，外源性的杂质现在已基本得到有效控制，但是内源性的聚合物杂质可能在药品原料与制剂生产、运输、存储过程中持续产生，目前已成为影响抗生素药品用药安全的风险要素之一。
[0003]自2005年版以来，为保证抗生素药品的用药安全性，中国药典对越来越多品种抗生素进行了聚合物杂质控制。近年来，色谱分离技术的迅速发展也为聚合物杂质的质控提供了更多的技术选择。目前已报道的方法主要包括葡聚糖凝胶G10色谱法(Sephadex G10)、高效凝胶色谱法(HPSEC)、反相高效液相色谱法(RP
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HPLC)以及毛细管电泳法(HPCE)、液质联用、柱切换技术、离子交换法等。技术手段的发展催生了聚合物质控理念的提升，逐渐由控制聚合物杂质总量向精准控制指针式聚合物杂质(即特定的代表性聚合物杂质单体)发展。
[0004]目前，中国药典(2020年版)中已收载采用反相色谱法分析头孢唑肟聚合物杂质，利用高效凝胶色谱法检测头孢地嗪、头孢米诺等头孢菌素类抗生素药物中的聚合物杂质，以及运用G10凝胶色谱法对多种头孢类品种检测聚合物杂质。但迄今还没有法定的头孢羟氨苄聚合物的检测方法。
[0005]臧洪梅、王雪分别报道采用Sephadex G
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10法检查头孢羟氨苄中的聚合物杂质(1.臧洪梅.头孢羟氨苄高分子聚合物检查方法的建立与验证[J].中国抗生素杂志,2010,035(006):450
‑
452。2.王雪.浅析头孢羟氨苄高分子聚合物检查方法[J].科学与财富,2016,8(5)。)。王成刚则通过高效分子排阻色谱(HPSEC)测定了头孢羟氨苄胶囊中聚合物杂质的含量(王成刚,等.高效分子排阻色谱法测定头孢羟氨苄胶囊中的高分子杂质[J].中国药学杂志,2011,46(13):1027
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1029.)。但是专利技术人在研究中发现，由于聚合物分子量大，无论是在Sephadex G
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10还是在HPSEC中，这些聚合物杂质都属于弱保留值杂质，在主峰前出峰，且容易受到小分子杂质的干扰，导致方法专属性较差。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种头孢羟氨苄原料药及其制剂中聚合物
杂质的检测方法。本专利技术提供的检测方法能够对头孢羟氨苄中的聚合物杂质进行有效分离，方法专属性好，实现对头孢羟氨苄原料及其制剂中聚合物杂质进行指针性精准控制。
[0007]为了实现上述技术效果，本专利技术采用了如下的技术方案：
[0008]一种头孢羟氨苄原料药或其制剂中聚合物杂质的检测方法，所述检测方法基于反相高效液相色谱法，包括色谱条件的建立和聚合物杂质定位对照溶液的制备；其中，所述色谱条件为：
[0009]固定相：十八烷基硅烷键合硅胶，
[0010]流动相：以pH4.8～5.2的0.02mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，按照表1所示程序进行梯度洗脱：
[0011]表1本专利技术的梯度洗脱程序
[0012][0013]流速：0.9～1.1ml/min，
[0014]柱温：28～32℃，
[0015]检测波长：220nm；
[0016]所述聚合物杂质定位对照溶液的制备，包括头孢羟氨苄聚合物杂质定位储备样品的制备和聚合物杂质定位对照溶液的制备，操作步骤为：
[0017]称取头孢羟氨苄原料40mg，置于西林瓶中，加入氯仿5ml，再加入三乙胺4滴，摇匀，溶解成浓度为8mg/mL的溶液，在30
±
2℃避光条件下静置约36h，挥干溶剂，在60
±
2℃条件下真空干燥30min，加水5ml溶解后冷冻干燥成固体粉末，得到所述头孢羟氨苄聚合物杂质定位储备样品，密封避光保存；
[0018]精密称取适量所述头孢羟氨苄聚合物杂质定位储备样品，加流动相A溶解并定量稀释制成浓度为5mg/ml的溶液，得到所述聚合物杂质定位对照溶液。
[0019]优选地，所述色谱条件中，色谱柱为Phenomenex Gemini或类似的色谱柱，规格4.6mm
×
250mm，粒径0.5μm。
[0020]优选地，所述pH4.8～5.2的0.02mol/L磷酸二氢钾溶液通过如下方法制备：
[0021]取磷酸二氢钾2.72g，加水800ml使溶解，用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至4.8～5.2，用水稀释至1000ml，混匀，即得。
[0022]优选地，所述0.02mol/L磷酸二氢钾溶液的pH为5.0。
[0023]优选地，流速为1.0ml/min。
[0024]优选地，柱温为30℃。
[0025]优选地，上述头孢羟氨苄原料药或其制剂中聚合物杂质的检测方法还包括供试品溶液的制备：
[0026]精密称取头孢羟氨苄原料药，加流动相A溶解并定量稀释成每1ml中含头孢羟氨苄5mg的溶液，即得；或
[0027]取头孢羟氨苄片剂10片，研磨成细粉，精密称取细粉适量，加流动相A溶解并定量稀释成每1ml中含头孢羟氨苄5mg的溶液，滤过，取续滤液，即得；或
[0028]取头孢羟氨苄胶囊内容物适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释成每1ml中含头孢羟氨苄5mg的溶液，滤过，取续滤液，即得；或
[0029]取头孢羟氨苄颗粒剂5包，混合均匀，研磨成细粉，精密精密称取细粉适量，加流动相A溶解并定量稀释成每1ml中含头孢羟氨苄5mg的溶液，滤过，取续滤液，即得；或
[0030]取注射用头孢羟氨苄内容物适量，加流动相A溶解并定量稀释成每1ml中含头孢羟氨苄5mg的溶液，即得。
[0031]优选地，上述头孢羟氨苄原料药或其制剂中聚合物杂质的检测方法，还包括对照溶液的制备：
[0032]精密量取所述供试品溶液适量，用流动相A定量稀释制成每1ml中含头孢羟氨苄50μg的溶液，即得。
[0033]优选地，上述头孢羟氨苄原料药或其制剂中聚合物杂质的检测方法，还包括测定，具体操作为：
[0034]取所述聚合物杂质定位对照溶液20μl，注入液相色谱仪，在所述色本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种头孢羟氨苄原料药或其制剂中聚合物杂质的检测方法，所述检测方法基于反相高效液相色谱法，包括色谱条件的建立和聚合物杂质定位对照溶液的制备；其中，所述色谱条件为：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：以pH4.8～5.2的0.02mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：流速：0.9～1.1ml/min，柱温：28～32℃，检测波长：220nm；所述聚合物杂质定位对照溶液的制备，包括头孢羟氨苄聚合物杂质定位储备样品的制备和聚合物杂质定位对照溶液的制备，操作步骤为：称取头孢羟氨苄原料40mg，置于西林瓶中，加入氯仿5ml，再加入三乙胺4滴，摇匀，溶解成浓度为8mg/mL的溶液，在30
±
2℃避光条件下静置约36h，挥干溶剂，在60
±
2℃条件下真空干燥30min，加水5ml溶解后冷冻干燥成固体粉末，得到所述头孢羟氨苄聚合物杂质定位储备样品，密封避光保存；精密称取适量所述头孢羟氨苄聚合物杂质定位储备样品，加流动相A溶解并定量稀释制成浓度为5mg/ml的溶液，得到所述聚合物杂质定位对照溶液。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件中，色谱柱为Phenomenex Gemini或类似的色谱柱，规格4.6mm
×
250mm，粒径0.5μm。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述pH4.8～5.2的0.02mol/L磷酸二氢钾溶液通过如下方法制备：取磷酸二氢钾2.72g，加水800ml使溶解，用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至4.8～5.2，用水稀释至1000ml，混匀，即得；优选地，所述0.02mol/L磷酸二氢钾溶液的pH为5.0。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流速为1.0ml/min。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述柱温为30℃。6.根据权利要求1至5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括供试品溶液的制备，具体操作为：精密称取头孢羟氨苄原料药，加流动相A溶解并定量稀释成每1ml中含头孢羟氨苄5mg
的溶液，即得；或取头孢羟氨苄片剂10片，研磨成细粉，精密称取细粉适量，加流动相A溶解并定量稀释成每1ml中含头孢羟氨苄5mg的溶液，滤过，取续滤液，即得；或取头...

【专利技术属性】
技术研发人员：李进，尹利辉，符雅楠，冯芳，姚尚辰，许明哲，王琰，邹文博，韩莹，张培培，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：