一种辅酶Q10的高表达重组菌株的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种辅酶Q10的高表达重组菌株的构建方法及应用，包括以下步骤，S1：以类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides2,4,1)为出发菌，提取其基因组DNA为目的基因；S2：将所述目的基因进行PCR同源扩增；S3：获得的PCR扩增产物经引物整合至载体pKLAC2中得外源目的基因；S4：以乳酸克鲁维酵母菌(Kluyveromyces lactis GG799)为宿主菌，将所述外源目的基因组整合至所述乳酸克鲁维酵母菌的染色体LAC4位点上得到高表达重组菌株。本发明专利技术效果：一是本发明专利技术以PCR介导的同源置换，整合片段不需通过酶切，只需通过一对含有同源整合位点的引物，以含有目的基因的载体位模板，通过PCR就可简单的高拷贝扩增目的基因组；二是获得的高表达重组菌株在高产量的同时具有高遗传稳定性。达重组菌株在高产量的同时具有高遗传稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种辅酶Q10的高表达重组菌株的构建方法及应用


[0001]本专利技术涉及基因工程的
，尤其涉及一种辅酶Q10的高表达重组菌株、高表达重组菌株的构建方法以及高表达重组菌株的应用。

技术介绍

[0002]辅酶Q10是生物细胞呼吸链中的重要递氢体，是一种良好的生化药物，近年来已广泛应用于各类心脏病、糖尿病、癌症、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治疗；此外，在治疗坏血病、十二指肠溃疡、坏死性牙周炎以及促进胰腺功能和分泌等方面也有显著效果。最近研究者发现CoQ10具有抗衰老作用，从而将其应用扩展到化妆品和保健品领域，使其在国内外的需求进一步扩大。
[0003]辅酶Q10的制备方法主要有三种，即动植物组织提取法、化学合成法和微生物发酵法。动植物组织提取法中动植物辅酶Q10含量低，而且各种化学成份复杂，并受原料和来源限制，因此产品成本高，价格昂贵，规模化生产受到了一定限制。化学合成法技术上比较成熟，主要是以来源较丰富的茄尼醇为原料合成的，但其产物为顺反异构体的混合物，生物活性低，合成生物活性高的辅酶Q10尚未达到工业化生产的程度。微生物发酵法合成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种构建辅酶Q10高表达重组菌株的方法，其特征在于：包括以下步骤，S1：以类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides2,4,1)为出发菌，提取其基因组DNA为目的基因；S2：将所述目的基因进行PCR同源扩增；S3：获得的PCR扩增产物经引物整合至载体pKLAC2中得外源目的基因；S4：以乳酸克鲁维酵母菌(Kluyveromyces lactis GG799)为宿主菌，将所述外源目的基因组整合至所述乳酸克鲁维酵母菌的染色体LAC4位点上得到高表达重组菌株。2.如权利要求1所述的构建辅酶Q10高表达重组菌株的方法，其特征在于：所述步骤S2中PCR同源扩增中包括一对含有同源整合位点的引物。3.如权利要求1或2所述的构建辅酶Q10高表达重组菌株的方法，其特征在于：所述步骤S3中类球红细菌经PCR扩增、純化、鉴定后，在引物诱下整合到载体pKLAC2中。4.如权利要求3所述的构建辅酶Q10高表达重组菌株的方法，其特征在于：所述步骤S3中pKLAC2载体中含强LAC4启动子和作为筛选标记的乙酰胺酶基因amds。5.如权利要求1～2或4任一所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：周本元，周逸如，
申请(专利权)人：周本元，
类型：发明
国别省市：