魏氏柠檬酸杆菌ansB基因敲除突变株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了魏氏柠檬酸杆菌ansB基因敲除突变株及其应用。它是敲除了ansB基因的魏氏柠檬酸杆菌，所述的ansB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术所得到的敲除魏氏柠檬酸杆菌ansB基因的工程菌，在25

【技术实现步骤摘要】
魏氏柠檬酸杆菌ansB基因敲除突变株及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体涉及魏氏柠檬酸杆菌ansB基因敲除突变株及其应用。

技术介绍

[0002]柠檬酸杆菌属的细菌，营化能有机营养，能利用柠檬酸盐作为唯一碳源生长，因此得名。该属的细菌都是革兰氏阴性菌，通常周生鞭毛，兼性厌氧，有呼吸和发酵两种类型的代谢方式，发酵葡萄糖产酸产气。该属的细菌常发现于人和动物的粪便，可能是正常肠道栖居菌，也见于土壤、水、污水和食物中，但也时常作为条件性致病菌分离自临床样品。近年来，该属的细菌被广泛的应用于重金属离子吸附和污水处理等污染环境治理等领域，而该属的典型代表魏氏柠檬酸杆菌，具备柠檬酸杆菌属的典型特点，并且，由于该种属细菌全基因组的测定完成以及基于基因工程手段技术的进步，从基因水平对魏氏柠檬酸杆菌进行必要的干预和改造，使其具备更加优良的表型，如通过敲除其中的ompA基因使其具备更好的生物被膜形成能力和对杀菌剂的抗药性（专利：一种提高魏氏柠檬酸杆菌生物被膜形成的方法），已经成为一种切实可行的手段。
[0003]ansB基因是一种编码Ⅱ类谷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.魏氏柠檬酸杆菌（Citrobacter werkmanii）ΔansB，其保藏编号为：GDMCC No.61849。2.一种提高魏氏柠檬酸杆菌生物被膜形成能力的方法，其特征在于，是敲除魏氏柠檬酸杆菌的ansB基因，提高魏氏柠檬酸杆菌生物被膜形成能力，所述的魏氏柠檬酸杆菌是魏氏柠檬酸杆菌GDFMZ BF
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8，其保藏编号为：GDMCC No.61858。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，PCR扩增ansB基因的上下游同源片段，将其与质粒pYG4连接构建敲除载体pYG4
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ansB，然后转化大肠杆菌S17
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1；将携带有敲除载体pYG4
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ansB的大肠杆菌S17
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1与魏氏柠檬酸杆菌接合转移，获得敲除ansB基因的魏氏柠檬酸杆菌ansB基因敲除突变株。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，具体步骤为：（1）引物序列：ansB
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up
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F：aaaagtgccacctgcagatctTTCGATATTTGGTGGGACTAAGTAGCansB
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up
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R：gccacctgcatcgaGTTATTTCTCCAGTTACTTGAATTTGCansB
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down
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F：aataacTCGATGCAGGTGGCTGCGansB
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down
‑
R：agtcatatgccgcggagatctCGGTCTGGGGCTACGTAGCansB
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QJ
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F：CGCTGGAAAACGATCGTAAAAC；ansB
‑
QJ
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢小保，周刚，施庆珊，王颖思，彭红，李素娟，
申请(专利权)人：广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：