一种基于CRISPR-Cas13a靶向副溶血性弧菌的crRNA序列和质粒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR‑Cas13a靶向副溶血性弧菌的crRNA序列和质粒及其应用。本发明专利技术设计了靶向T2RHS‑Nuc基因的crRNA，并建立一种四环素诱导表达Cas13a蛋白的质粒，该质粒在大肠杆菌辅助下导入副溶血性弧菌并靶向目标基因，在识别目标基因的mRNA后会产生靶向切割活性，从而激活Cas13a的附属切割活性，在菌体内部随机切割菌株的转录本，当该转录本是副溶血性弧菌生长所必需时，会导致副溶血性弧菌的特异性死亡。本发明专利技术提供的crRNA和Cas13a蛋白表达载体及其杀菌方法不会诱导副溶血性弧菌产生耐药性，是传统使用杀菌剂进行副溶血性弧菌病源控制的良好替代方法，具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种基于crispr-cas13a系统靶向抑制和杀死副溶血性弧菌的crrna和crispr-cas13a蛋白表达质粒以及借助大肠杆菌s17-1介导的质粒转化及其应用。

技术介绍

1、副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)，是一种革兰氏阴性杆菌，作为海洋环境中典型的嗜盐性致病菌，是全球沿海地区食源性疾病的主要病原体之一。该菌通过污染贝类、鱼类等海产品进入食物链，其携带的热稳定直接溶血素(tdh)和tdh相关溶血素(trh)等毒力因子，可导致人体肠道黏膜损伤及炎症反应，临床上以急性发病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。该菌具有极强的环境适应能力，同时嗜盐畏酸，可在含盐量2.5％-3.5％的培养基上生长，但若盐浓度低于0.5％则不生长，在普通食醋中处理1-3min，即可死亡。最适培养温度为30℃-37℃，ph值为8.0-8.5，当ph6以下则不能生长，对高温抵抗力小，50℃处理20min，65℃处理5min或80℃处理1min即可被杀死。传统防控措施若未彻底灭活该菌，其在冷链运输、加工储存等环节可能二次增殖本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种特异性靶向副溶血性弧菌的crRNA，其特征在于，所述crRNA靶向识别副溶血性弧菌的T2RHS-Nuc基因，包括crRNA1或crRNA2，所述crRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述crRNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的特异性靶向副溶血性弧菌的crRNA，其特征在于，所述T2RHS-Nuc基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一种副溶血性弧菌的杀菌质粒，其特征在于，含有权利要求1所述的特异性靶向副溶血性弧菌的crRNA、编码LsCas13a蛋白的核苷酸序列和四环素诱导表达元件。...

【技术特征摘要】

1.一种特异性靶向副溶血性弧菌的crrna，其特征在于，所述crrna靶向识别副溶血性弧菌的t2rhs-nuc基因，包括crrna1或crrna2，所述crrna1的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述crrna2的核苷酸序列如seq id no.2所示。

2.根据权利要求1所述的特异性靶向副溶血性弧菌的crrna，其特征在于，所述t2rhs-nuc基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。

3.一种副溶血性弧菌的杀菌质粒，其特征在于，含有权利要求1所述的特异性靶向副溶血性弧菌的crrna、编码lscas13a蛋白的核苷酸序列和四环素诱导表达元件。

4.根据权利要求3所述的杀菌质粒，其特征在于，所述lscas13a蛋白的核苷酸序列如seq id no.4所示；所述四环素诱导表达元件的...

【专利技术属性】
技术研发人员：周刚，王颖思，张桂芳，周少璐，彭如群，刘惠忠，谢小保，施庆珊，
申请(专利权)人：广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：