瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法及应用，该检测方法包括如下步骤：采用UPLC

【技术实现步骤摘要】
瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法及应用


[0001]本专利技术涉及药物体内代谢
，尤其涉及一种瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法及应用。

技术介绍

[0002]经典名方瓜蒌薤白半夏汤出自《金匮要略》，由瓜蒌、薤白、半夏和米酒共煎制成，临床上广泛用于治疗心绞痛型冠心病、风湿性心脏病、室性心动过速、肋间神经痛、乳腺增生、慢性阻塞性肺病、创伤性气胸、老年咳喘、慢性支气管肺炎、慢性胆囊炎等。
[0003]目前对于瓜蒌薤白半夏汤的研究主要集中在化学成分的研究，而瓜蒌薤白半夏汤中发挥功效的药效物质基础还不是太清楚，而且有效成分在血液中的检测手段更是空白。
[0004]众所周知，中药有效成分在进入人体血液后才能发挥疗效，微量的有效成分如何在复杂的基质条件下进行定量检测成为难题，为了进一步深入研究瓜蒌薤白半夏剂及其有效成分在血液中的变化情况，并为瓜蒌薤白半夏剂中发挥功效的药效物质基础提供科学依据，开发一种准确、可靠的瓜蒌薤白半夏剂入血成分的定量检测方法成为目前亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]针对目前没有关于瓜蒌薤白半夏剂入血成分的定量检测方法的缺陷，本专利技术提供一种瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法及应用，该定量检测方法能够为进一步筛选经典名方瓜蒌薤白半夏剂的质量标志物和药效物质基础提供依据。
[0006]为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：
[0007]一种瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法，包括如下步骤：
[0008]采用UPLC
‑
MS/MS检测待测血浆样品中鸟苷和腺苷的含量；
[0009]其中，色谱条件：以硅胶颗粒为填料的反相色谱柱；流动相A：含0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱的程序如下：
[0010]0‑
1.5min，95％流动相A，5％流动相B；
[0011]1.5
‑
2.0min，95％
→
80％流动相A，5％
‑
20％流动相B；
[0012]2.0
‑
2.5min，80％
→
50％流动相A，20％
‑
50％流动相B；
[0013]2.5
‑
3.5min，50％
‑
95％流动相A，50％
‑
5％流动相B；
[0014]3.5
‑
5.0min，95％流动相A，5％流动相B；
[0015]上述百分比均为体积百分比。
[0016]本专利技术通过限定UPLC
‑
MS/MS方法中的分析参数，各参数之间相互配合，可同时测定瓜蒌薤白半夏剂中鸟苷和腺苷2种入血成分的含量，该瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法简单快捷、可靠、灵敏度高、专属性好、准确度好、稳定性好、检测限和定量限更低，将该方法应用于药物动力学研究，通过分析多组分在体内吸收的特征，验证其对质量标准的制定与评价具有重要意义。
[0017]其中瓜蒌薤白半夏剂包括瓜蒌薤白半夏汤、瓜蒌薤白半夏冻干粉、瓜蒌薤白半夏膏等，瓜蒌薤白半夏冻干粉和瓜蒌薤白半夏膏等剂型均由瓜蒌薤白半夏汤经常规工艺加工而成。
[0018]可选地，所述瓜蒌薤白半夏剂的制备方法如下：
[0019]取瓜蒌，薤白和半夏，加入米酒煎煮、过滤，按照常规工艺制得瓜蒌薤白半夏剂，如汤剂、膏剂或冻干粉。
[0020]优选地，瓜蒌薤白半夏汤的制备方法如下：称取瓜蒌饮片10
‑
15g，薤白饮片7
‑
12g，半夏饮片10
‑
15g，加入米酒300
‑
500mL浸透约1.5
‑
3.5h，武火煎煮至沸腾，后改文火煎煮15
‑
25min，趁热3
‑
5层纱布过滤，即得。
[0021]更优选地，瓜蒌薤白半夏汤的制备方法如下：称取瓜蒌饮片12.0g，薤白饮片9.0g，半夏饮片12.0g，加入米酒400mL浸透约2小时，武火煎煮至沸腾，后改文火煎煮20min，趁热用4层纱布过滤，即得。
[0022]可选地，所述反相色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3柱。
[0023]可选地，所述色谱条件中还包括：柱温30
‑
40℃，进样量为1.5
‑
2.5μL，流速为0.2
‑
0.4mL/min。
[0024]优选地，所述色谱条件的柱温为35℃，进样量为2.0μL，流速为0.3mL/min。
[0025]可选地，质谱条件：离子源为ESI源，毛细管电压为3.2kv，去溶剂气为氮气；去溶剂气的温度为500℃，去溶剂气的流速为600L/h，锥孔气流速为50L/h。通过限定质谱条件，可进一步提高该定量检测方法的准确度及稳定性。
[0026]可选地，所述待测血浆样品的制备方法包括如下步骤：取血浆样品置于EP管中，加入内标溶液，涡旋混合，再加入乙腈涡旋混合，离心取上清液，即为待测血浆样品。
[0027]可选地，所述待测血浆样品的制备方法还包括取血，然后置于肝素化离心管中，4000
‑
4500r/min离心8
‑
12min，得到血浆的步骤。
[0028]优选地，所述血浆的制备方法如下：取血，然后置于肝素化离心管中，4500r/min离心10min，得到血浆。
[0029]可选地，所述内标溶液中的内标物为玉米素。
[0030]可选地，所述内标溶液中玉米素的浓度为3
‑
8μg/mL。
[0031]可选地，所述内标溶液的配置方法如下：
[0032]称取玉米素5.00mg于10mL容量瓶，加甲醇溶液定容至刻度，得0.5mg/mL内标储备液，经稀释，制得所述内标溶液。
[0033]本专利技术还提供了上述的瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法在瓜蒌薤白半夏剂在质量控制研究中的应用。
[0034]所述质量控制研究包括但是不限于体内药代动力学研究。
[0035]与现有技术相比，本专利技术通过对色谱条件、质谱条件、内标物质的选择及样品前处理条件进行合理的设置，提高了检测灵敏度，缩短了分析时间；实现了对鸟苷和腺苷两种极性比较相近的物质的同时定量分析；可用于瓜蒌薤白半夏剂口服给药后的鸟苷和腺苷的药动学研究；为瓜蒌薤白半夏剂中其它组分的同时定量分析提供技术参考。
附图说明
[0036]图1为实施例2中专属性实验的色谱图；
[0037]图2为实施例3中大鼠体内药代动力学研究中不同方式给药后腺苷、鸟苷的平均血药浓度－时间曲线。
[0038]附图说明：
[0039]附图1中，A为大鼠空白血浆的色谱图，B为含有混合对照品溶液和内标物的大鼠血浆的色谱图，C为大鼠灌胃给药后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：采用UPLC
‑
MS/MS检测待测血浆样品中鸟苷和腺苷的含量；其中，色谱条件：以硅胶颗粒为填料的反相色谱柱；流动相A：含0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；洗脱程序如下：0
‑
1.5min，95％流动相A，5％流动相B；1.5
‑
2.0min，95％
→
80％流动相A，5％
‑
20％流动相B；2.0
‑
2.5min，80％
→
50％流动相A，20％
‑
50％流动相B；2.5
‑
3.5min，50％
‑
95％流动相A，50％
‑
5％流动相B；3.5
‑
5.0min，95％流动相A，5％流动相B；上述百分比为体积百分比。2.根据权利要求1所述的瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法，其特征在于，所述反相色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3柱。3.根据权利要求1所述的瓜蒌薤白半夏剂中2种入血成分的同时定量检测方法，其特征在于，所述色谱条件中还包括：柱温30
‑
40℃，进样量为1.5
‑
2.5μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：向铮，求杰英，刘眴蒂，李丹，侯金才，
申请(专利权)人：京津冀联创药物研究北京有限公司，
类型：发明
国别省市：