一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜制备方法及防粘连膜技术

本发明专利技术涉及一种医用材料技术领域，具体为一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜制备方法包括，S1，新鲜羊膜的获取；S2，去细胞羊膜的制备；S3，负载塞来昔布；S4，冻干处理。本发明专利技术还公开了使用此方法制造的用于防治肌膜粘连的防粘连膜，包括去细胞羊膜，所述去细胞羊膜上附着若干塞来昔布颗粒。有益效果：本发明专利技术所制备的防粘连膜，将蕴含多种生物活性物质的羊膜基质负载塞来昔布，可以有效促进肌腱内源性愈合，减少外源性愈合导致的粘连。减少外源性愈合导致的粘连。减少外源性愈合导致的粘连。

【技术实现步骤摘要】
一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜制备方法及防粘连膜


[0001]本专利技术涉及一种医用材料
，具体为一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜制备方法及防粘连膜。

技术介绍

[0002]随着工业化进程的发展，肌腱损伤发病率逐年升高。肌腱损伤患者经手术治疗后约40％可发生不同程度肌腱粘连，严重影响患指的功能康复，已经成为临床上亟待解决的难题之一。
[0003]粘连的形成机制复杂，肌腱愈合的炎症期有大量炎症因子释放，其介导的过度炎症反应是导致肌腱粘连形成的重要原因，因此，许多学者使用非甾体抗炎药抑制与粘连发生相关的炎性细胞和因子，希望通过减轻炎症反应来防治肌腱粘连。
[0004]研究人员将塞来昔布负载到以聚乳酸聚乙二醇(PELA)为材料制成的防粘连膜内部，缓慢的药物释放增加了肌腱粘连抑制效果，降低了中性粒细胞浸润，取得了良好的防止粘连形成的效果。但是术后力学测试的肌腱最大抗拉力结果显示负载塞来昔布的PELA纤维膜组明显较对照组低，说明释放的塞来昔布部分损害了肌腱愈合。因此，如何优化负载非甾体类消炎药的防粘连膜以减轻对肌腱愈合的影响需要进一步深入研究。
[0005]人羊膜的临床与基础研究迄今已有将近百年的历史，然而直到近些年才对羊膜的生物学特性有了全新的、深入的认识，发现人羊膜组织中存有众多细胞生长因子，而以上这些因子正是调控肌腱损伤修复和粘连形成的重要调控因子。但是由于新鲜羊膜不适合保存、运输，存在一定的免疫原性等问题，难以广泛应用于临床。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜制备方法及防粘连膜，解决了现有技术中存在的问题。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜的制备方法：
[0009]S1，新鲜胎盘组织，在羊膜与绒毛膜之间钝性分离，获得光滑、半透明的新鲜羊膜，用含有青霉素、链霉素的平衡盐溶液浸泡，4℃冰箱保存，待用；
[0010]S2，将新鲜人羊膜经蔗糖磷酸合成酶(SPS)溶液漂洗，之后用戊二醛交联，交联之后的羊膜置入0.5％的十二烷基硫酸钠(SDS)中震摇24h，胰蛋白酶消化4h，彻底漂洗，冷冻干燥，分装，环氧乙烷消毒，将去细胞后的羊膜进行裁减，备用；
[0011]S3，准确称取100mg塞来昔布，研磨固体颗粒，将粉末完全溶解于10mL无水乙醇中，从而配制成浓度为10mg/mL的塞来昔布母液；
[0012]S4，将配置好的塞来昔布母液溶于PBS中，与羊膜配置负载不同浓度的负载塞来昔布去细胞羊膜基质防粘连膜；
[0013]S5，将负载塞来昔布去细胞羊膜基质防粘连膜置于冷冻干燥机工作室，低温下预
冻数小时，开启冷凝室制冷，开启真空泵，真空冷冻干燥；
[0014]S6，冻干羊膜经钴60辐照灭菌。
[0015]进一步地，S2步骤所裁剪的去细胞羊膜的大小为1.0cm
×
0.5cm。
[0016]进一步地，S4步骤中所述的负载塞来昔布其细胞羊膜基质防粘连膜的负载浓度选用5％、10％或15％。
[0017]进一步地，S5步骤中冷冻干燥机内温度为
‑
10℃～
‑
56℃、湿度为20％以下。
[0018]一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜，包括去细胞羊膜，所述去细胞羊膜上附着若干塞来昔布颗粒。
[0019]进一步地，所述去细胞羊膜的尺寸为1.0cm
×
0.5cm。
[0020]本专利技术与现有技术相比具备以下有益效果：本专利技术所制备的防粘连膜，将蕴含多种生物活性物质的羊膜基质负载塞来昔布，可以有效促进肌腱内源性愈合，减少外源性愈合导致的粘连；本专利技术通过酶处理后的脱细胞羊膜，为半透膜，有效去除了羊膜中的细胞成分，保留了基底膜层、致密层的纤维网状结构以及多种生物活性物质，丰富的胶原纤维増强了羊膜的抗拉力，三维多孔结构为负载塞来昔布提供了足够的三维空间结构；本专利技术所制备的防粘连膜的去细胞羊膜蕴含多种生物活性物质可以有效促进肌腱内源性愈合，其上负载的塞来昔布可以减轻炎症反应阻碍外源性愈合导致的粘连。
附图说明
[0021]图1为防粘连膜的结构示意图
[0022]图2为防粘连膜的外观示意图
[0023]图3为新鲜羊膜去细胞前后的光镜图
[0024]图4为新鲜羊膜去细胞前后的扫描电镜图
[0025]图5为塞来昔布的药物缓释试验的统计图
[0026]图6为新鲜羊膜去细胞后残余DNA含量测定的统计图
[0027]图7为动物患处修复后的标本的扫描电镜图
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]实施例1
[0030]一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜的制备方法，
[0031]S1，新鲜羊膜的获取：新鲜胎盘组织，在羊膜与绒毛膜之间钝性分离，获得光滑、半透明的新鲜羊膜，用含有青霉素、链霉素的平衡盐溶液浸泡，4℃冰箱保存，待用；
[0032]S2，去细胞羊膜的制备：将新鲜人羊膜经蔗糖磷酸合成酶(SPS)溶液漂洗后用戊二醛交联，交联之后的羊膜置入0.5％十二烷基硫酸钠(SDS)震摇24h，胰蛋白酶消化4h，彻底漂洗，冷冻干燥，分装，环氧乙烷消毒，裁减成1.0cm
×
0.5cm大小备用；
[0033]S3，负载塞来昔布：准确称取100mg塞来昔布，研磨固体颗粒，将粉末完全溶解于
DNAstandard(100μg/ml)进行50倍稀释，制备成2μg/ml。按下表配制以测定DNA标准曲线：
[0046][0047]3.96孔板中加入100μl的标准DNA溶液或待测样品，并且加入100μl PicoGreen工作液，避光室温放置5分钟。上机测定，记录各孔浓度荧光值。根据标准曲线，计算出样本所含DNA含量。
[0048]4.统计分析：采用SPSS 24.0统计软件处理，数据均以表示，两样本均数比较，采用t检验，P<0.05为差异有显著性意义。
[0049]5.结果：正常羊膜DNA为351.5
±
9.23ug/ml，去细胞羊膜冻干后DNA为15.66
±
0.82ug/ml，采用两独立样本t检验，P<0.0001，有显著性差异。跟正常羊膜组比，去除了95.6％DNA含量。
[0050]实施例5
[0051]动物实验：
[0052]取四只成年新西兰白兔，经耳缘静脉注射戊巴比妥钠(30mg/kg)，俯卧位固定，无菌条件下，后足第3趾跖趾关节至近侧趾间关节之间作1.5cm切口，切除腱鞘，显露趾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于防治肌膜粘连的防粘连膜的制备方法，其特征在于：S1，新鲜胎盘组织，在羊膜与绒毛膜之间钝性分离，获得光滑、半透明的新鲜羊膜，用含有青霉素、链霉素的平衡盐溶液浸泡，4℃冰箱保存，待用；S2，将新鲜人羊膜经蔗糖磷酸合成酶(SPS)溶液漂洗，之后用戊二醛交联，交联之后的羊膜置入0.5％的十二烷基硫酸钠(SDS)中震摇24h，胰蛋白酶消化4h，彻底漂洗，冷冻干燥，分装，环氧乙烷消毒，将去细胞后的羊膜进行裁减，备用；S3，准确称取100mg塞来昔布，研磨固体颗粒，将粉末完全溶解于10mL无水乙醇中，从而配制成浓度为10mg/mL的塞来昔布母液；S4，将配置好的塞来昔布母液溶于PBS中，与羊膜配置负载不同浓度的负载塞来昔布去细胞羊膜基质防粘连膜；S5，将负载塞来昔布去细胞羊膜基质防粘连膜置于冷冻干燥机工作室，低温下预冻数小时，开启冷凝室制冷，开启真空泵，真空冷冻干燥；S6，冻干羊膜经钴60辐照灭菌。...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春杰，张月明，白江博，于昆仑，田德虎，
申请(专利权)人：唐山市工人医院，
类型：发明
国别省市：