用于确定炎性胃肠道疾病可能性的方法技术

本发明专利技术涉及用于确定炎性胃肠道疾病可能性的方法。该方法包括稀释人受试者的生物样品并将其与作为调节剂的8

【技术实现步骤摘要】
用于确定炎性胃肠道疾病可能性的方法


[0001]本专利技术涉及用于从人类受试者的生物样品中确定炎性胃肠道疾病的可能性的方法。

技术介绍

[0002]已知有多种炎性胃肠道疾病(gastrointestinal tract diseases)，诸如包括克罗恩病和溃疡性结肠炎的肠易激综合征(IBS)。目前认为这些疾病与胃肠道的氧化应激有关。
[0003]IBS是一种影响消化系统的常见病症，并且会导致胃痉挛、腹胀、腹泻和便秘等症状。据估计，全球有45％的人受到IBS的影响。目前通过测量粪便中的钙卫蛋白含量进行诊断。然而，这种测量方法并不快速或非常可靠，即它会产生假阳性和假阴性。例如，在直肠频繁排空的情况下，钙卫蛋白的量可能是正常的，而人类受试者仍患有胃肠道内的炎性疾病。同样，使用抗炎药物可能导致假阳性结果，并因此应在检测前几周内停用抗炎药物。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种从人类受试者的粪便样品中检测炎性胃肠道疾病的方法。本专利技术的特别目的是提供一种用于这些疾病的经济(cost
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effective)、快速和可靠的方法。因此，本专利技术涉及一种用于确定炎性胃肠道疾病可能性的方法，包括
[0005]‑
在水性溶液中稀释人类受试者的生物样品以获得经稀释的样品；
[0006]‑
将所述经稀释的样品与作为调节剂的8
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苯胺基萘
‑1‑
磺酸接触以获得测量前样品；
[0007]‑
通过使所述测量前样品与试剂接触形成测量样品，所述试剂含过氧化物酶和选自氯化铕和氯化铽的标签；
[0008]‑
孵育所述测量样品；
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激发所述测量样品；以及
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测量所述测量样品中所述标签的时间分辨发光信号(time
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resolved luminescence signal)，并且如果所述发光信号比对照样品的发光信号高至少112％，则确定所述人类受试者的炎性肠病(inflammatory intestine disease)的可能性增加，所述对照样品来自未患有炎性肠病的人类受试者。
[0011]本专利技术进一步涉及评估炎性胃肠道疾病治疗效果的方法，包括
[0012]‑
在水性溶液中稀释人类受试者的生物样品以获得经稀释的样品；
[0013]‑
将所述经稀释的样品与作为调节剂的8
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苯胺基萘
‑1‑
磺酸接触以获得测量前样品；
[0014]‑
通过使所述测量前样品与试剂接触形成测量样品，所述试剂含过氧化物酶和选自氯化铕和氯化铽的标签；
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孵育所述测量样品；
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激发所述测量样品；以及
[0017]‑
测量所述测量样品中标签的时间分辨发光信号，并将测量样品中标签的时间分辨发光信号与同一人类受试者的先前测量样品中标签的时间分辨发光信号进行比较，以监测炎性胃肠道疾病的治疗。
[0018]本专利技术还涉及评估炎性胃肠道疾病治疗效果的方法，包括
[0019]‑
在水性溶液中稀释人类受试者的生物样品以获得经稀释的样品；
[0020]‑
将所述经稀释的样品与8
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苯胺基萘
‑1‑
磺酸接触以获得测量前样品；
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孵育所述测量样品；以及
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目视观察所述测量样品，并且如果观察到所述测量样品的颜色增强(intensification)，则确定所述人类受试者的炎性肠病的治疗无效的可能性增加。
[0023]本专利技术还涉及多个部分的试剂盒(a kit of parts)，包括
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苯胺基萘
‑1‑
磺酸的溶液；
[0025]‑
用于采集生物样品的装置(means)；和
[0026]‑
用于根据上述方法制备测量样品的装置。
[0027]本专利技术还涉及8
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苯胺基萘
‑1‑
磺酸在诊断炎性胃肠道疾病中的用途。
附图说明
[0028]图1示出了实验的结果。
[0029]图2示出了实验的进一步结果。
具体实施方式
[0030]因此，本专利技术涉及一种用于确定炎性胃肠道疾病可能性的方法，包括
[0031]‑
在水性溶液中稀释人类受试者的生物样品以获得经稀释的样品；
[0032]‑
将所述经稀释的样品与作为调节剂的8
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苯胺基萘
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磺酸接触以获得测量前样品；
[0033]‑
通过使所述测量前样品与试剂接触形成测量样品，所述试剂含过氧化物酶和选自氯化铕和氯化铽的标签；
[0034]‑
孵育所述测量样品；
[0035]‑
激发所述测量样品；以及
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测量所述测量样品中所述标签的时间分辨发光信号，并且如果所述发光信号比对照样品的发光信号高至少112％，则确定所述人类受试者的炎性肠病的可能性增加，所述对照样品来自未患有炎性肠病的人类受试者。
[0037]本专利技术提供了一种用于筛选炎性胃肠道疾病的经济但可靠且快速的方法，如下文实验部分所述。本方法的样品制备耗时约20分钟，而检测本身耗时约10分钟。受这些疾病影响的人数正在增加，并且除了在医疗保健中进行实际筛查之外，目前的方法也可用于流行病学研究。本方法还为患有炎性胃肠道疾病的人提供了在家监测药物治疗效果的装置。
[0038]本专利技术特别适合于筛选儿童和年轻人(年龄介于0至25岁)，因为这些疾病通常已经在儿童期表现出来。
[0039]在本方法中，如果发光信号比来自未患有炎性肠病的人类受试者的对照样品的发
光信号高至少112％，则确定人类受试者的炎性肠病的增加的可能性。因此，发光信号可以比对照样品高至少112、115、120、125、140、150、180、200或250％，或者甚至比这更高。
[0040]认为本专利技术测量胃肠道的氧化应激，即生物样品中的超氧化物、次氯酸、过氧亚硝酸盐和次氯酸盐。这些化合物是在一种叫做氧化爆发的反应中形成的(Respiratory burst in human neutrophils,Dahlgren et al.,Journal of Immunological Methods,Vol 232,17.12.1999,p.3
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14)。
[0041]在本专利技术中使用的称为调节剂的化合物8
‑
苯胺基萘
‑1‑
磺酸对这些氧化合物非常敏感，并且反过来改变所使用的标签。因此，过氧化物酶通过过氧化氢催化作为调节剂的8
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苯胺基萘
‑1‑
磺酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于确定炎性胃肠道疾病可能性的方法，包括
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在水性溶液中稀释人类受试者的生物样品以获得经稀释的样品；
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将所述经稀释的样品与作为调节剂的8
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苯胺基萘
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磺酸接触以获得测量前样品；
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通过使所述测量前样品与试剂接触形成测量样品，所述试剂含过氧化物酶和选自氯化铕和氯化铽的标签；
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孵育所述测量样品；
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激发所述测量样品；以及
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测量所述测量样品中所述标签的时间分辨发光信号，并且如果所述发光信号比对照样品的发光信号高至少112％，则确定所述人类受试者的炎性肠病的可能性增加，所述对照样品来自未患有炎性肠病的人类受试者。2.根据权利要求1所述的方法，其中，在200
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800μs延迟时间之后，测量所述时间分辨发光信号200
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800μs的时间。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述过氧化物酶选自由辣根过氧化物酶、抗坏血酸过氧化物酶、氯化物过氧化物酶、细胞色素C过氧化物酶、卤过氧化物酶、乳过氧化物酶、髓过氧化物酶及它们的混合物组成的组。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在孵育之前向所述测量样品中加入溶剂，所述溶剂选自二甲基亚砜、N,N
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二甲基甲酰胺、二异丙醚及它们的混合物。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述标签以4μL量的标签混合物使用，所述标签混合物含二甲基亚砜中的氯化铕0.717μM、三辛基氧化膦0.430μM和次氮基三乙酸0.430μM(NTA)，并且过氧化物酶以每mg 2.5个单位稀释在1ml生理盐溶液中的4μl的量使用。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述标签是含有氯化铕、次氮基三乙酸和三辛基氧化膦的氯化铕标签。7.用于评估炎性胃肠道疾病的治疗效果的方法，包括
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在水性溶液中稀释人类受试者的生物样品以获得经稀释的样品；
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将所述经稀释的样品与作为调节剂的8
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苯胺基萘
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【专利技术属性】
技术研发人员：詹妮，
申请(专利权)人：阿克森斯健康公司，
类型：发明
国别省市：