前列腺癌的风险评估装置制造方法及图纸

一种前列腺癌的风险评估装置，包括收集装置；核酸提取装置；扩增装置及数据获取及分析装置，其中数据获取及分析装置用于定量检测样品RNA溶液中的PCA3基因、ERG基因以及SPDEF基因的表达量，计算出PCA3基因和ERG基因相对SPDEF基因的表达量，其中，通过记录PCA3、ERG及SPDEF的Ct值，计算得到PCA3基因和ERG基因的ΔCT，利用相对表达量的计算公式ΔΔCT＝2^ΔCt(PCA3)+2^ΔCt(ERG)，计算出PCA3基因和ERG基因的相对表达量之和，再利用公式(16.92

【技术实现步骤摘要】
前列腺癌的风险评估装置


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，尤其涉及一种前列腺癌的风险评估装置。

技术介绍

[0002]在全球范围内，前列腺癌在男性中是发病率仅次于肺癌的恶性肿瘤。近些年伴随着人口老龄化、饮食及生活方式的改变、诊疗技术的提升及健康观念的增强，前列腺癌的发病率及诊出率出现了较为显著的上升。早期诊断对于前列腺癌是极其重要的一环，但一直以来都缺乏相关的诊断工具来区分高级别和低级别的前列腺癌。前列腺特异抗原(PSA)筛查是目前确定男性是否应进行前列腺活检的最常用测试，但其无论是假阳性率还是假阴性率都很高，因而并无法准确预测侵袭性疾病的存在。然而大多数PSA水平升高的男性会立即进行组织活检，即使其实很多人患有的只是低级别前列腺癌或者根本没有患前列腺癌。过度治疗常带来例如感染，败血症甚至死亡等并发症，而不必要的侵入式治疗也会有副作用，如阳痿和尿失禁等，同时患者的心理负担也会大大增加。而前列腺穿刺阴性结果亦不能完全排除前列腺癌的可能，而进行前列腺活检的男性中也只有25％患有高级别前列腺癌。
[0003]因此，需要一种基于非侵入性手段的液体活检测试，能够准确地预测前列腺癌的侵袭性，避免对低风险或良性患者进行不必要的活检。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提出一种前列腺癌的风险评估装置。
[0005]本专利技术提供的一种前列腺癌的风险评估装置，包括收集装置、核酸获取装置、扩增装置以及数据获取及分析装置。
[0006]收集装置用于收集测试者的外泌体溶液。
[0007]核酸获取装置用于提取所述外泌体溶液的RNA，得到样品RNA溶液。
[0008]扩增装置用于定量检测所述样品RNA溶液中所述目标区域，所述目标区域包括PCA3基因、ERG基因以及SPDEF基因。
[0009]数据获取及分析装置用于获取PCA3基因、ERG基因以及SPDEF基因的表达量，并计算出PCA3基因和ERG基因相对SPDEF基因的表达量。
[0010]其中，所述数据获取及分析装置通过记录PCA3基因、ERG基因及SPDEF基因的Ct值，将PCA3基因和ERG基因的表达水平归一化至SPDEF基因，分别计算得到PCA3基因和ERG基因的ΔCT值，利用相对表达量的计算公式ΔΔCT＝2^ΔCt(PCA3)+2^ΔCt(ERG)，计算出PCA3基因和ERG基因的相对表达量之和，再利用公式：(16.92
‑
ΔΔCt)*1.83，计算出一分数，该分数能反映发生前列腺癌的风险级别。
[0011]本申请实施方式中，所述扩增装置包括qRT
‑
PCR扩增体系。
[0012]本申请实施方式中，所述核酸提取装置提取所述外泌体溶液中的所述样品RNA溶液的方法包括：
[0013]向所述外泌体溶液中加入600～800μl Trizol溶液，18
‑
25℃下孵育匀浆3～5min
后，加入100～220μl氯仿，晃动混匀10～20s，在2～6℃、10000～12000rpm离心10～15min，取上层澄清溶液，将上层澄清溶液进行RNA纯化，得到样品RNA溶液。
[0014]本申请实施方式中，所述扩增装置对所述样品RNA溶液的扩增方法包括：
[0015]将样品RNA溶液加入qRT
‑
PCR扩增体系中，先在30℃～50℃条件下，扩增10min～30min，再在90℃～95℃条件下，扩增2min～10min。
[0016]进一步在90℃～95℃条件下，扩增10s～30s，最后在55℃～65℃条件下，扩增30s～60s，此步骤循环30次～50次，得到PCR产物。
[0017]其中，在55℃～65℃扩增的步骤采集荧光信号。
[0018]本申请实施方式中，所述qRT
‑
PCR扩增体系包括引物混合液、PCR缓冲液、PCR反应液和酶混液。
[0019]本申请实施方式中，按浓度计算，所述引物混合液包括：100nM～500nM的ERG F、100nM～500nM ERG R、100nM～500nM的ERG Pb、100nM～500nM的SPDEF F、100nM～500nM的SPDEF R、100nM～500nM的SPDEF R、100nM～500nM的SPDEF Pb、100nM～500nM的PCA3 F、100nM～500nM的PCA3 R、100nM～500nM的PCA3 Pb、0.1～10ROX和余量的水。
[0020]本申请实施方式中，所述PCR缓冲液包括浓度为50mM～800mM PH值为7.5～9.0的Tris
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HCl溶液、浓度为50mM～800mM的KCl、浓度为50mM～500mM的硫酸铵和余量水。
[0021]本申请实施方式中，所述PCR反应液包括1～10PCR缓冲液、1mM～6mM的MgCl2、重量百分比为0.5％～5％的甘油、0.1～1PC300和余量的水。
[0022]本申请实施方式中，所述酶混液包括浓度为1U～10U的Taq
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HS、浓度为1U～50U的RTase、Taq Buffer、0.1mM～1mM dNTPs、0.1～10PC300和余量的水。
[0023]本申请实施方式中，所述收集装置还用于对所述外泌体溶液进行前处理，所述前处理包括提纯所述外泌体溶液。
[0024]相较于现有技术，本专利技术的有益效果在于：通过直接从人体尿液中提取外泌体，尿液不需要DRE预收集或特殊处理；通过测定外泌体中三种优选靶标PCA3基因、ERG基因以及SPDEF基因的含量，计算出PCA3基因和ERG基因的相对表达量，无需侵入性手段，避免对患有阴性和/或惰性前列腺癌的男性进行初步活检，无创液态活检，只需收集尿液样本，有很高依从性；使用普通的荧光定量PCR仪器，就可完成检测，不需另外购置设备；多重一步法检测，简单快速，且闭管式操作很好的避免污染。
具体实施方式
[0025]下面将结合具体实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施方式仅是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。在本专利技术的说明书中所使用的技术手段的名称只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。
[0027]在不冲突的情况下，下述的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0028]本专利技术提供一种前列腺癌的风险评估装置，包括收集装置、核酸获取装置、扩增装
置和数据获取及分析装置。
[0029]所述收集装置用于收集测试者的外泌体溶液。
[0030]本实施方式中，收集5～50mL以上测试者的尿液，利用超滤法提取出其中的外泌体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种前列腺癌的风险评估装置，其特征在于，包括：收集装置，用于收集测试者的外泌体溶液；核酸获取装置，用于提取所述外泌体溶液的RNA，得到样品RNA溶液；扩增装置，用于定量检测所述样品RNA溶液中所述目标区域，所述目标区域包括PCA3基因、ERG基因以及SPDEF基因；数据获取及分析装置，用于获取PCA3基因、ERG基因以及SPDEF基因的表达量，并计算出PCA3基因和ERG基因相对SPDEF基因的表达量，其中，所述数据获取及分析装置通过记录PCA3基因、ERG基因及SPDEF基因的Ct值，将PCA3基因和ERG基因的表达水平归一化至SPDEF基因，分别计算得到PCA3基因和ERG基因的ΔCT值，利用相对表达量的计算公式ΔΔCT＝2^ΔCt(PCA3)+2^ΔCt(ERG)，计算出PCA3基因和ERG基因的相对表达量之和，再利用公式：(16.92
‑
ΔΔCt)*1.83，计算出一分数，该分数能反映发生前列腺癌的风险级别。2.根据权利要求1所述的前列腺癌的风险评估装置，其特征在于，所述扩增装置包括qRT
‑
PCR扩增体系。3.根据权利要求2所述的前列腺癌的风险评估装置，其特征在于，所述核酸提取装置提取所述外泌体溶液中的所述样品RNA溶液的方法包括：向所述外泌体溶液中加入600～800μl Trizol溶液，18
‑
25℃下孵育匀浆3～5min后，加入100～220μl氯仿，晃动混匀10～20s，在2～6℃、10000～12000rpm离心10～15min，取上层澄清溶液，将上层澄清溶液进行RNA纯化，得到样品RNA溶液。4.根据权利要求2所述的前列腺癌的风险评估装置，其特征在于，所述扩增装置对所述样品RNA溶液的扩增方法包括：将样品RNA溶液加入qRT
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PCR扩增体系中，先在30℃～50℃条件下，扩增10min～30min，再在90℃～95℃条件下，扩增2min～10min；进一步在90℃～9...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈欲超，
申请(专利权)人：深圳汇芯生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：