富铬富锌醋酸杆菌及其制备方法和应用技术

富铬富锌醋酸杆菌及其制备方法和应用，第一步，复苏巴氏醋酸杆菌并液体增菌培养，使菌液浓度为OD

【技术实现步骤摘要】
富铬富锌醋酸杆菌及其制备方法和应用
[0001]

[0002]本专利技术属于医药领域，具体涉及一种富铬富锌醋酸杆菌及其制备方法和应用。
[0003]
技术介绍

[0004]糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一种慢性糖代谢障碍的疾病，2017年世界糖尿病患病人口约为4.25亿(20～79岁)，预计到2045年，糖尿病患病人数将增长至6.29亿。糖尿病及其并发症所造成的病痛和疾病负担是困扰全球人民的重大健康问题和社会经济问题。而我国的糖尿病患病人口高居世界第一，且有逐年递增的趋势。糖尿病患者常可发生一些严重并发症，如糖尿病肾病、糖尿病眼病、心血管系统病变等，严重危害人类的生命与健康。II型糖尿病( type 2 diabetes mellitus，T2DM) 占全部糖尿病患者的90%～95%，故T2DM在糖尿病流行病学研究中处于重要位置。多年来众多学者对糖尿病病因和防治方法做了大量的研究，但糖尿病病因还未完全明确，发病机理复杂，机制仍未完全阐明，尚无有效根治药物。目前糖尿病的综合防治措施主要有控制饮食、加强锻炼、药物治疗；用于治疗的药物主要是化学药物，生物药物非常少。有报道是红茶菌是酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的共生物，利用其代谢物与红茶制备的保健饮品能降血糖、降血压、降血脂等，对“三高”患者有一定的辅助疗效，其中降糖活性成分主要为茶多酚和D
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葡萄糖二酸
‑
1,4
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内酯（DSL），这2种成分均不是细菌的代谢产物，细菌代谢物降糖的作用未能充分体现，比如醋酸杆菌尚有NADH
‑
辅酶和葡萄糖醛酸脱氢酶等，它们在醋酸杆菌通过糖酵解等分解葡萄糖的途径中有重要作用，而红茶菌却未能充分利用好这些代谢酶的作用提高降糖的效果，只能作为一种辅助治疗的保健饮品。因此，如何才能利用好醋酸杆菌对葡萄糖的代谢能力，提高NADH
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辅酶和葡萄糖醛酸脱氢酶等代谢酶的含量发挥良好的降糖作用，这是醋酸杆菌成为降血糖药物首先要解决的关键问题。
[0005]
技术实现思路

[0006]解决的技术问题：为了解决治疗T2DM生物药品奇缺的问题，提高醋酸杆菌降血糖的效果，本专利技术提供一种富铬富锌醋酸杆菌及其制备方法和应用，制备得的富铬富锌醋酸杆菌NADH
‑
辅酶和葡萄糖醛酸脱氢酶及胞内铬、锌等微量元素明显提升，对胰岛细胞有一定的修复作用，促进胰岛素的分泌，降血糖效果良好，可作为治疗T2DM的候选药物。
[0007]技术方案：一种富铬富锌巴氏醋酸杆菌的制备方法，包括如下步骤：第一步，复苏巴氏醋酸杆菌并液体增菌培养，使菌液浓度为OD
600
0.9~1.5；第二步，培养用富铬富锌的巴氏醋酸杆菌液体培养基培养，其中三氯化铬、氯化锌的浓度均为64~128μg/mL，菌液初始浓度为1
×
104CFU/mL，250转/分，摇培培养48小时；第三步，重复第二步的培养1~3次；第四步，收集菌液，离心弃上清，PBS洗涤沉淀，沉淀物即为富铬富锌的巴氏醋酸杆菌。
[0008]优选的，上述用于富铬富锌巴氏醋酸杆菌培养的培养基中三氯化铬、氯化锌的浓度均为64μg/mL。
[0009]优选的，上述富铬富锌巴氏醋酸杆菌重复培养次数为1次。
[0010]上述制备方法制得富铬富锌巴氏醋酸杆菌。
[0011]上述富铬富锌巴氏醋酸杆菌在制备治疗糖尿病药物中的应用。
[0012]治疗糖尿病药物，有效成分为上述富铬富锌巴氏醋酸杆菌。
[0013]有益效果：本专利技术成功制备富铬富锌巴氏醋酸杆菌，产率比较高；其次，本专利技术富铬富锌巴氏醋酸杆菌制备方法简单、成本低；第三，本专利技术制备的富铬富锌巴氏醋酸杆菌可用于治疗T2DM，降糖效果明显、毒副作用小、对胰岛细胞有修复作用，可以缓解治疗T2DM生物药品奇缺的问题。
[0014]附图说明
[0015]图1为富铬富锌巴氏醋酸杆菌NADH
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辅酶、葡萄糖醛酸脱氢酶、铬和锌含量；图2为富铬富锌巴氏醋酸杆菌对糖尿病小鼠的降糖作用；图3为富铬富锌巴氏醋酸杆菌促胰岛组织、细胞的修复作用；图4为富铬富锌巴氏醋酸杆菌对糖尿病小鼠的体重的恢复作用；图5为富铬富锌巴氏醋酸杆菌促胰岛MIN6细胞生长作用；图6为富铬富锌巴氏醋酸杆菌促胰岛MIN6细胞分泌胰岛素作用；图7为富铬富锌巴氏醋酸杆菌对葡萄糖的分解能力；图8为富铬富锌巴氏醋酸杆菌安全性检测。
[0016]具体实施方式
[0017]实施例 1第一步，复苏巴氏醋酸杆菌并液体增菌培养，使菌液浓度为OD
600
0.9~1.5，约为3
×
108~5
×
108CFU/mL；第二步，富铬富锌培养，用富铬富锌的巴氏醋酸杆菌液体培养基（三氯化铬、氯化锌的浓度均为64μg/mL），菌液初始浓度为1
×
104CFU/mL，250转/分，摇培培养48小时；第三步，重复第二步的培养，1次；第四步，收集菌液，离心弃上清，PBS洗涤沉淀，沉淀物即为富铬富锌的巴氏醋酸杆菌。
[0018]实施例 2第一步，复苏巴氏醋酸杆菌并液体增菌培养，使菌液浓度为OD
600
0.9~1.5，约为3
×
108~5
×
108CFU/mL；第二步，富铬富锌培养，用富铬富锌的巴氏醋酸杆菌液体培养基（三氯化铬、氯化锌的浓度均为64μg/mL），菌液初始浓度为1
×
104CFU/mL，250转/分，摇培培养48小时；第三步，重复第二步的培养，2次；第四步，收集菌液，离心弃上清，PBS洗涤沉淀，沉淀物即为富铬富锌的巴氏醋酸杆菌。
[0019]实施例 3
第一步，复苏巴氏醋酸杆菌并液体增菌培养，使菌液浓度为OD
600
0.9~1.5，约为3
×
108~5
×
108CFU/mL；第二步，富铬富锌培养，用富铬富锌的巴氏醋酸杆菌液体培养基（三氯化铬、氯化锌的浓度均为128μg/mL），菌液初始浓度为1
×
104CFU/mL，250转/分，摇培培养48小时；第三步，重复第二步的培养，1次；第四步，收集菌液，离心弃上清，PBS洗涤沉淀，沉淀物即为富铬富锌的巴氏醋酸杆菌。
[0020]实施例 4富铬富锌巴氏醋酸杆菌辅酶和金属含量检测、活性、安全性等评价1.材料1.1 样品富铬富锌巴氏醋酸杆菌用实施例1制备。
[0021]1.2 菌株、细胞巴氏醋酸杆菌: 购自广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM1.67；MIN6细胞：武汉大学细胞保藏中心。
[0022]1.3 培养基和主要试剂：葡萄糖，广东光华科技股份有限公司，批号：20200403；酵母膏，北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20200422；碳酸钙、上海泰坦科技股份有限公司，批号：P1260108；琼脂，北京索莱宝科技有限公司，批号：310C022；无水乙醇，上海麦克林本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种富铬富锌巴氏醋酸杆菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，复苏巴氏醋酸杆菌并液体增菌培养，使菌液浓度为OD
600
0.9~1.5；第二步，培养用富铬富锌的巴氏醋酸杆菌液体培养基培养，其中三氯化铬、氯化锌的浓度均为64~128μg/mL，菌液初始浓度为1
×
104CFU/mL，250转/分，摇培培养48小时；第三步，重复第二步的培养1~3次；第四步，收集菌液，离心弃上清，PBS洗涤沉淀，沉淀物即为富铬富锌的巴氏醋酸杆菌。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄衍强，黄永毅，黄亮，黄干荣，戴园园，李如佳，覃春，
申请(专利权)人：右江民族医学院，
类型：发明
国别省市：