一种三七多糖阳离子衍生物的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及三七多糖阳离子衍生物的制备方法及其应用，可有效解决肿瘤基因治疗药物的问题，其解决的技术方案是，该三七多糖阳离子衍生物是经化学键在三七多糖上接枝聚乙烯亚胺或氮丙啶构成，本发明专利技术制备方法简便，原料来源广泛，成本低廉，极具开发和应用前景，制备得到的三七多糖阳离子衍生物结构稳定且具有良好的生物相容性，能够高效负载核酸类抗肿瘤药物并携带其进入细胞，从而实现在肿瘤治疗药物递送中的应用，是肿瘤基因治疗药物递送载体上的创新。的创新。

【技术实现步骤摘要】
一种三七多糖阳离子衍生物的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及医药领域，特别是一种三七多糖阳离子衍生物的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，基因治疗在临床上取得了很大进展，然而目前基因治疗仍面临着很多挑战，其中最大的挑战就是开发安全高效的基因载体。多糖不仅具有生物安全性好等特点，而且结构中包括大量活性基团（羟基、氨基和羧酸基团等），易于进行结构修饰。因此，以多糖为骨架，经阳离子聚合物修饰的纳米载体是一种安全、高效的基因载体（Advanced Drug Delivery Reviews，2013，65：1123），已被广泛应用在肿瘤基因治疗领域，且被证实能够有效提高肿瘤治疗效果（Current Pharmaceutical Design，2018，24：3303）。因此，开发基于多糖的新型基因载体对于肿瘤基因治疗具有重要意义。
[0003]三七多糖是从我国名贵中药材三七中提取分离得到的多糖成分，安全低毒且价格低廉、制备工艺简单易行。三七多糖主要由葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成（食品科学技术学报，2018，2：63），其主链主要由葡萄糖和半乳糖组成；支链由阿拉伯糖和半乳糖组成，具有免疫调节（International Journal of Biological Macromolecules，2020，161：797）、抗氧化（Nat. Prod，2008，71：241）、抗衰老（Process Biochemistry，2019，78：189）及抗炎（Modern Food Science and Technology，2019，09：74）等多种活性。研究报道，三七多糖还具有潜在的抗肿瘤活性（Onco Targets Ther，2016，9：3433）（Carbohydrate Polymers，2015，121：328），这提示了三七多糖应用于肿瘤免疫治疗的巨大潜力。此外，在三七多糖的分子结构中含有大量活性基团
‑
OH、
‑
COOH，可以通过化学改性饰实现其不同的生物学活性及功能。因此，通过对三七多糖进行阳离子化修饰，不仅可以实现基因递送的功能，并且能够保留其良好的免疫活性和潜在的抗肿瘤活性，但是至今未见到有关三七多糖阳离子衍生物的制备及其作为基因递送载体在肿瘤治疗领域的公开报道。

技术实现思路

[0004]针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种三七多糖阳离子衍生物的制备方法及其应用，可有效解决肿瘤基因治疗药物的问题。
[0005]本专利技术解决的技术方案是，该三七多糖阳离子衍生物是经化学键在三七多糖上接枝聚乙烯亚胺或氮丙啶构成，三七多糖分子量为2.0
×
104‑
3.0
×
106Da，聚乙烯亚胺分子量为600
‑
2500Da。
[0006]该三七多糖阳离子衍生物的制备方法，具体包括以下步骤：1）活化三七多糖：将50
‑
250mg三七多糖溶解于10
‑
25mL去离子水或二甲基亚砜中，室温（23℃
±
2℃），氮气保护条件下与70
‑
350mg活化试剂A避光反应4
‑
48h，将反应液于去离子水中透析2
‑
3d，得活化的三七多糖反应液；所述的活化试剂A为N,N'
‑
羰基二咪唑、高碘酸钾、乙二胺、含有3
‑
5%乙二胺的二磷酸盐缓冲液、三乙胺中一种或两种以上；
或在50℃条件下，将50
‑
250mg三七多糖溶解于10
‑
25mL去离子水或二甲基亚砜中，然后加入100
‑
600mg活化试剂B反应4
‑
24h，得活化的三七多糖反应液；所述的活化试剂B为琥珀酸酐、马来酸酐、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、4
‑
二甲氨基吡啶、1
‑
乙基（3
‑
二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐中的一种或两种以上；2）三七多糖阳离子衍生物：将上述活化后的三七多糖反应液溶于15
‑
30mL超纯水中，再加入含有100
‑
500mg聚乙烯亚胺的2
‑
10mL二甲基亚砜溶液，然后在氮气保护下避光反应12
‑
48h，于去离子水中透析2
‑
3d，冷冻干燥，得聚乙烯亚胺修饰的三七多糖，即三七多糖阳离子衍生物；或向上述活化三七多糖溶液中加入含有0.5
‑
1mL氮丙啶或含有100
‑
500mg聚乙烯亚胺的5
‑
10mL摩尔浓度为1mol/L的HCl溶液，50℃条件下搅拌反应1
‑
3d，于去离子水中透析2
‑
3d，冷冻干燥，得三七多糖阳离子衍生物。
[0007]所述的三七多糖阳离子衍生物在制备肿瘤基因治疗药物递送载体中的应用。
[0008]所述的肿瘤基因治疗药物为装载有治疗基因的质粒、装载有治疗基因的病毒载体DNA、反义寡核苷酸、小干扰RNA中的一种或几种。
[0009]本专利技术制备方法简便，原料来源广泛，成本低廉，极具开发和应用前景，制备得到的三七多糖阳离子衍生物结构稳定且具有良好的生物相容性，能够高效负载核酸类抗肿瘤药物并携带其进入细胞，从而实现在肿瘤治疗药物递送中的应用，是肿瘤基因治疗药物递送载体上的创新。
具体实施方式
[0010]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0011]实施例1本专利技术在具体实施中，该三七多糖阳离子衍生物制备方法具体包括以下步骤：1）活化三七多糖：将50mg三七多糖溶解于10mL二甲基亚砜中，加入70mg N,N'
‑
羰基二咪唑和30μL三乙胺，室温，氮气保护条件下避光反应4h，将反应液于去离子水中透析2d，得活化的三七多糖反应液；2）三七多糖阳离子衍生物：将上述活化后的三七多糖反应液溶于15mL超纯水中，再加入含有100mg聚乙烯亚胺的2mL二甲基亚砜溶液，然后在氮气保护下避光反应24h，于去离子水中透析3d，冷冻干燥，得聚乙烯亚胺修饰的三七多糖，即三七多糖阳离子衍生物。
[0012]实施例2本专利技术在具体实施中，该三七多糖阳离子衍生物制备方法具体包括以下步骤：1）活化三七多糖：将100mg三七多糖溶解于15mL去离子水中，搅拌条件下加入80mg高碘酸钾，室温，氮气保护条件下避光反应24h，再缓慢滴加100μL含有3
‑
5%乙二胺的二磷酸盐缓冲液，氮气保护下避光反应24h，将反应液透析3d，得活化的三七多糖反应液；2）三七多糖阳离子衍生物：向上述活化三七多糖溶液中加入含有0.5mL氮丙啶的5mL摩尔浓度为1mol/L的HCl
溶液，50℃条件下混合搅拌2d，于去离子水中透析3d，冷冻干燥，得三七多糖阳离子衍生物。
[0013本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三七多糖阳离子衍生物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1）活化三七多糖：将50
‑
250mg三七多糖溶解于10
‑
25mL去离子水或二甲基亚砜中，室温，氮气保护条件下与70
‑
350mg活化试剂A避光反应4
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48h，将反应液于去离子水中透析2
‑
3d，得活化的三七多糖反应液；所述的活化试剂A为N,N'
‑
羰基二咪唑、高碘酸钾、乙二胺、含有3
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5%乙二胺的二磷酸盐缓冲液、三乙胺中一种或两种以上；或在50℃条件下，将50
‑
250mg三七多糖溶解于10
‑
25mL去离子水或二甲基亚砜中，然后加入100
‑
600mg 活化试剂B反应4
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24h，得活化的三七多糖反应液；所述的活化试剂B为琥珀酸酐、马来酸酐、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、4
‑
二甲氨基吡啶、1
‑
乙基（3
‑
二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐中的一种或两种以上；2）三七多糖阳离子衍生物：将上述活化后的三七多糖反应液溶于15
‑
30mL超纯水中，再加入含有100
‑
500mg聚乙烯亚胺的2
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10mL二甲基亚砜溶液，然后在氮气保护下避光反应12
‑
48h，于去离子水中透析2
‑
3d，冷冻干燥，得聚乙烯亚胺修饰的三七多糖，即三七多糖阳离子衍生物；或向上述活化三七多糖溶液中加入含有0.5
‑
1mL氮丙啶或含有100
‑
500mg聚乙烯亚胺的5
‑
10mL摩尔浓度为1mol/L的HCl溶液，50℃条件下搅拌反应1
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3d，于去离子水中透析2
‑
3d，冷冻干燥，得三七多糖阳离子衍生物。2.根据权利要求1所述的三七多糖阳离子衍生物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1）活化三七多糖：将50mg三七多糖溶解于10mL二甲基亚砜中，加入70mg N,N'
‑
羰基二咪唑和30μL三乙胺，室温，氮气保护条件下避光反应4h，将反应液于去离子水中透析2d，得活化的三七多糖反应液；2）三七多糖阳离子衍生物：将上述活化后的三七多糖反应液溶于15mL超纯水中，再加入含有100mg聚乙烯亚胺的2mL二甲基亚砜溶液，然后在氮气保护下避光反应24h，于去离子水中透析3d，冷冻干燥，得聚乙烯亚胺修饰的三七多糖，即三七多糖阳离子衍生物。3.根据权利要求1所述的三七多糖阳离子衍生物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1）活化三七多糖：将100mg三七多糖溶解于15mL去离子水中，搅拌条件下加入80mg高碘酸钾，室温，氮气保护条件下避光反应24h，再缓慢滴加100μL含有3
‑
5%乙二胺的二磷酸盐缓冲液，氮气保护下避光反应24h，将反应液透析3d，得活化的三七多糖反应液；2）三七多糖阳离子衍生物：向上述活化三七多糖溶液中加入含有0.5mL氮丙啶的5mL摩尔浓度为1mol/L的HC...

【专利技术属性】
技术研发人员：任雪玲，马梦雅，郭汝悦，刘小宾，张雪玲，张红岭，张振中，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：