低聚半乳糖醛酸多糖、复合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了低聚半乳糖醛酸多糖、复合物及其制备方法和应用。本发明专利技术提供了一种低聚半乳糖醛酸多糖的制备方法，包括以下步骤：第一步，预处理，得到稳定水溶性果胶凝胶体；以及第二步，碱水解

【技术实现步骤摘要】
低聚半乳糖醛酸多糖、复合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及多糖领域，尤其涉及低聚半乳糖醛酸多糖、复合物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]低聚半乳糖醛酸多糖（Homogalacturonan，HG）是从以苹果果渣、葵花盘、柑橘皮、柠檬皮等为原料生产的“改性果胶”（Modified citrus pectin，MCP）中提取的，果胶多糖经水解降酯后，分子量更小、无支链的纤维，其化学成分均一，易溶解，口服易吸收。
[0003]小分子柑橘果胶（LCP）是美国圣特莱公司继以橘皮为原料的“改性果胶”之后的第二代产品，是一种混合物，化学成分不稳定，其分子量跨度在10kDa
‑
20kDa，酯化度在10%至25%不等。小分子柑橘果胶LCP是各种多糖的混合物，含有鼠李半乳糖醛酸聚糖 I（Rhamngalacturonan I，RGI）、鼠李半乳糖醛酸聚糖II（Rhamngalacturonan II，RGII）、半乳糖醛酸聚糖（Homogalacturonan，HG）和木糖半乳糖醛酸聚糖（Xylogalacturonan，XG），阿拉伯聚糖、阿拉伯半乳聚糖I和阿拉伯半乳聚糖II等其他糖链。
[0004]现有文献已经报道了，半乳凝素（Galectin
‑
3）能直接介导血液中的肿瘤细胞间聚集，肿瘤细胞与基质间的识别和黏附。已经证实多种高转移性肿瘤细胞均能高水平表达Galectin
‑
3，并在原发肿瘤和转移瘤病灶中均能检测到Galectin
‑
3的高表达，其表达增加与肿瘤的生长、转移呈正相关，可以作为某些肿瘤恶性病变的鉴别诊断标志。因此，通常认为可以通过封闭或阻断Galectin
‑
3介导的黏附聚集作用达到治疗和控制癌症转移的目的。
[0005]MCP是Galectin
‑
3的一个高亲和力配体，对体内Galectin
‑
3配体有竞争性抑制作用。Platt等（Platt D et al.,Modulation of the lung colonization of B16
‑
F1 melanoma cells by citrus pectin[J]. JNCI Cancer Spectrum, 1992,84(6):438）通过体外细胞凝集实验和细胞黏附试验证实，MCP可通过封闭细胞表面的Galectin
‑
3而抑制细胞间的相互识别和黏附功能。当MCP达到一定浓度时，肿瘤细胞表面Galectin
‑
3几乎被MCP结合封闭，从而可阻断细胞间的相互识别和聚集。一些动物实验证实MCP能有效抑制肿瘤的生长转移。
[0006]在本专利技术被公布之前，尚未有任何专利公开或报道过本专利申请中提及的低聚半乳糖醛酸多糖，对介导氧化应激、慢性炎症的炎症因子Galectin
‑
3和免疫细胞MDSC，具有体外拮抗MDSC增殖的功能，体内抑制MDSC在脾脏聚集，减轻全身性慢性炎症的作用。
[0007]本专利技术的目的是提供低聚半乳糖醛酸多糖作为药品、食品或保健品的用途：消除Galectin
‑
3相关的MDSC细胞分化、聚集，和MDSC调控的下游T细胞、中性粒细胞比例改变和功能改变，以及由此引发的全身性氧化应激、慢性炎症、自由基损伤和早老性疾病。其化学结构式如下：
本专利技术专利技术人发现，化合物HG能通过拮抗MDSC细胞表面的配体Galectin
‑
3而发挥对MDSC细胞的体外增殖拮抗、抑制体内MDSC聚集脾脏的作用，实现对MDSC引起的氧化应激、慢性炎症、自由基损伤和早老性疾病的控制。这种化合物本身，其单独使用对机体无明显毒副作用。低聚半乳糖醛酸多糖作为益生元，具有滋养肠道益生菌，辅助调节糖、脂代谢调节作用。现有文献检索中未见低聚半乳糖醛酸多糖及其衍生物的报道。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种具有抗炎作用的低聚半乳糖醛酸多糖及其制备方法和应用，以解决上述问题。
[0009]为实现以上目的，本专利技术提供了一种低聚半乳糖醛酸多糖的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：（1）碱裂解
‑
微波法前处理；（2）酶法/酵母发酵法降解；（3）使用超滤膜进行精细提取，所述超滤膜孔径为1
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10nm，保持低压力差0.05
‑
0.5MPa持续高流通萃取，截留分子量在103‑
104；（4）低温干燥，得到纯化的低聚半乳糖醛酸多糖。
[0010]本专利技术提供了一种低聚半乳糖醛酸多糖复合物，以重量份数计，包含：低聚半乳糖醛酸多糖610
‑
710重量份、黄芪25
‑
35重量份、炒山楂5
‑
25重量份、红枣5
‑
25重量份和陈皮6
‑
20重量份；所述低聚半乳糖醛酸多糖的分子量为3kDa至7kDa，酯化度为5%
‑
15%。
[0011]在一个优选的实施方案中，所述低聚半乳糖醛酸多糖复合物，以重量份数计，包含：低聚半乳糖醛酸多糖620
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640重量份、黄芪20
‑
30重量份、炒山楂5
‑
15重量份、红枣5
‑
15重量份和陈皮6
‑
15重量份；所述低聚半乳糖醛酸多糖的分子量为3kDa至7kDa，酯化度为5%
‑
15%。
[0012]在一个优选的实施方案中，本专利技术提供了一种低聚半乳糖醛酸多糖复合物，以重量份数计，包括：低聚半乳糖醛酸多糖625重量份、黄芪25重量份、炒山楂10重量份、红枣10重量份和陈皮8重量份。
[0013]所述低聚半乳糖醛酸多糖中的半乳糖醛酸能够影响HG的电荷、酸碱性、溶解度、黏度等性质，而且会影响其在体内吸收和分布等药学性质。酯化度越高，溶解度越低，当酯化度降低时，有利于提高低聚半乳糖醛酸多糖的生物利用度。
[0014]本专利技术还提供了另外的低聚半乳糖醛酸多糖的制备方法，包括以下步骤：第一步，对橙子果皮预处理，得到稳定水溶性果胶凝胶体；以及第二步，碱水解
‑
微波法处理，在控制
pH在12.0
‑
13.0，微波加热至80
‑
100℃条件下，向所述稳定水溶性果胶凝胶体中加入氢氧化钠，形成断键水溶性果胶凝胶体；第三步，脱甲氧基处理，对所述断键水溶性果胶凝胶体进行去甲氧基化处理，得到粗品脱甲氧基水溶性果胶凝胶体；第四步，超滤膜精制，使用超滤膜进行精细提取，所述超滤膜孔径为1
‑
10nm，保持低压力差0.05
‑
0.5MPa持续高流通萃取，截留分子量在103‑
104。
[0015]在一个优选的实施方案中，在第三步中，所述脱甲氧基处理具体为：冷冻干燥浓缩，调整粗果胶浓度为10
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种低聚半乳糖醛酸多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，对橙子果皮预处理，得到稳定水溶性果胶凝胶体；以及第二步，碱水解
‑
微波法处理，在控制pH在12.0
‑
13.0，微波加热至80
‑
100℃条件下，向所述稳定水溶性果胶凝胶体中加入氢氧化钠，形成断键水溶性果胶凝胶体；第三步，脱甲氧基处理，对所述断键水溶性果胶凝胶体进行去甲氧基化处理，得到粗品脱甲氧基水溶性果胶凝胶体；第四步，超滤膜精制，使用超滤膜进行精细提取，所述超滤膜孔径为1
‑
10nm，保持低压力差0.05
‑
0.5MPa持续高流通萃取，截留分子量在103‑
104。2.根据权利要求1所述的低聚半乳糖醛酸多糖的制备方法，其特征在于，在第三步中，所述脱甲氧基处理具体为：冷冻干燥浓缩，调整粗果胶浓度为10
‑
20g/L，加入NaOH，维持pH在9
‑
10，于4
°
C反应8
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48h进行去甲酯化，最后用10%冰醋酸，调整酸度，终止反应；第三步之后，对所述粗品脱甲氧基水溶性果胶凝胶体进行粗提处理，经过粗提处理后，低聚半乳糖醛酸多糖含量超过70%则进行酶解法降解处理；不超过70%的则进行酵母发酵法处理；第四步之后，还包括减压旋转蒸发浓缩，低温干燥处理。3.根据权利要求2所述的低聚半乳糖醛酸多糖的制备方法，其特征在于，所述酶解法降解处理：先使用等电点法脱蛋白，醋酸缓冲液调整pH值为4.5，调整果胶终浓度为2
‑
5 wt %；加入固态化果胶酶：裂解酶（PL，酶活度32U／g），特异性内切聚半乳糖醛酸（Endo
‑
polygalacturonases，endo
‑
PG，E.C.3.2.1.15，4212U／g），果胶酯酶（PE，E.C.3.1.1.11，66.7U／g）和原果胶酶，pH控制在3.0
‑
6.0，45℃（最高不超过60℃）维持60
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：沈彦伟，俞露，
申请(专利权)人：天津银杉科技有限公司，
类型：发明
国别省市：