一种马铁菊头蝠来源抗菌肽RF-CATH2及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种马铁菊头蝠来源抗菌肽RF

【技术实现步骤摘要】
一种马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
‑
CATH2及其应用


[0001]本专利技术涉及一种马铁菊头蝠来源抗菌肽及其应用，更具体的说，涉及一种来源于马铁菊头蝠的天然抗菌肽RF
‑
CATH2及其应用，属于生物医学


技术介绍

[0002]传统抗生素在治疗细菌性感染疾病方面取得了显著效果，但是近年来，随着传统抗生素在医学和养殖业等领域的滥用，微生物对传统抗生素产生了越来越强的耐受性，同时也出现了一些耐药性极强的超级细菌，微生物耐药问题已成为严重威胁人类健康的难题。一直以来微生物耐药性的应对手段是使用对耐药微生物尚未使用过的新的或者替代性的抗微生物制剂，而这种新的抗生素使用一段时间后，微生物会进一步对这种新的抗生素产生耐药性，因此这就需要持续开发新的抗微生物制剂。开发出一种新型抗菌机制药物是解决微生物耐受性问题的一个新方向。
[0003]抗菌肽是一种小分子多肽，对细菌、真菌、病毒和原虫等均具有杀灭作用。抗菌肽具有分子量小、结构简单、杀菌活性强等特点。大多数抗菌肽的杀菌机制是通过作用于细菌细胞膜上的磷脂双分子层，破坏细胞膜完整性并在细胞膜上形成跨膜通道，造成细胞内容物溶出而导致细胞死亡。这种独特的杀菌机制一般不易引起微生物耐药性。而且抗菌肽对哺乳动物正常细胞和组织一般没有毒害性，不存在残留问题，因此抗菌肽有望成为一种新型的高效的抗菌药物，具有广阔的开发应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的是为解决传统抗生素的不足之处，提供了一种来源于马铁菊头蝠的天然抗菌肽RF
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CATH2，另外提供了该抗菌肽的氨基酸序列以及其在抗菌方面的应用。马铁菊头蝠抗菌肽RF
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CATH2具有广谱高效的抗菌作用，对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌具有极强的抗菌活性，杀菌作用迅速，且具有分子量小、合成简单、溶血活性低的特点，可应用于医药、化妆品、食品保鲜和养殖业领域。
[0005]为实现本专利技术的目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]本专利技术中天然抗菌肽RF
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CATH2来自于翼手目动物马铁菊头蝠，抗菌肽RF
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CATH2由34个氨基酸组成，分子量为3872.67Da，等电点为11.76。氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示Lys Leu Gly Arg Trp Leu Gly Lys Leu Ile Gln Lys Gly Gly Gln Lys Ile Gly Gln Gly Leu Glu Asn Ile Gly Arg Arg Ile Lys Gly Phe Phe Phe Lys，所有氨基酸均为L
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型。
[0007]本专利技术也提供了抗菌肽RF
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CATH2的化学制备方法：
[0008]根据获得天然抗菌肽RF
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CATH2成熟肽的氨基酸序列，用自动多肽合成仪(433A,Applied Biosystems)合其全序列，通过HPLC反相柱层析脱盐纯化；用高效液相色谱HPLC方法鉴定其纯度，分子量测定采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI
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TOF)，等电聚焦电泳测定等电点，用自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构。
[0009]另外，本专利技术提供了马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2在制备抗菌药物中的应用，将马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2作为唯一有效成分或者有效成分之一。
[0010]马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2在制备抑制细菌生长药物中的应用，将马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2作为唯一有效成分或者有效成分之一。
[0011]所述的马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2在制备防腐剂的应用。
[0012]所述的马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2在制备动物饲料添加剂的应用。
[0013]述的马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2在制备化妆品添加剂的应用。
[0014]本专利技术的优点是提供了一种来源于马铁菊头蝠的天然抗菌肽RF
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CATH2以及其在抗菌方面的应用。抗菌肽RF
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CATH2具有广谱高效的抗菌作用，杀菌作用迅速，且具有分子量小、合成简单、溶血活性低的特点，可应用于医药、化妆品、食品保鲜和养殖业领域。
附图说明
[0015]图1RF
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CATH2的溶血活性。
具体实施方式
[0016]实施例1：
[0017]马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2的发现
[0018]1)马铁菊头蝠肺部组织总RNA提取：
[0019]①
取100mg马铁菊头蝠肺部组织，放入研钵中加入液氮研磨成粉末，转移到EP管中，加入1ml总RNA提取缓冲液(Trizol，美国Life公司产品)，充分混匀，而后于4℃，12000rpm离心10min。
[0020]②
离心取上清，加入0.2ml氯仿溶液，剧烈混匀，室温放置10分钟，而后以4℃，12000rpm离心10分钟，弃除沉淀。
[0021]③
上清加入等体积的异丙醇，室温放置10分钟，以4℃，12000rpm离心10分钟，收集沉淀用75％(V/V)乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即为武夷湍蛙皮肤总RNA。
[0022]2)马铁菊头蝠肺部组织cDNA二链合成：采用CLONTECH公司In
‑
Fusion SMARTerTM Directional cDNA Library Construction Kit合成。
[0023](1)cDNA第一链合成(mRNA反转录)：
[0024]①
RNase
‑
free的PCR管中加入1μl马铁菊头蝠肺部组织总RNA、1μl 3
’
端一链合成引物(3
’
In
‑
Fusion SMARTer CDS Primer)和2.5μl RNase
‑
free水使总体积达到4.5μl，混匀后短暂离心(2000rpm，30s)，离心后于72℃保温3分钟；保温后再将离心管在42℃孵育2分钟。
[0025]②
在上述离心管中加入以下试剂(均为CLONTECH公司In
‑
Fusion SMARTerTM Directional cDNA Library Construction Kit建库试剂盒中配备)，2.0μl 5
×
第一链缓冲液、0.25μl 100mM DTT、1.0μl 10mM dNTP Mix、1.0μl SMARTer V Oligonucleotide、0.25μl RNase Inhibitor和1.0μl SMARTS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2，其特征在于，所述抗菌肽来源于马铁菊头蝠，由34个氨基酸组成，分子量为3872.67Da，等电点为11.76，其氨基酸序列表如SEQ ID NO:1所示：Lys Leu Gly Arg Trp Leu Gly Lys LeuIle Gln Lys Gly Gly Gln LysIle Gly Gln Gly Leu Glu AsnIle Gly Arg ArgIle Lys Gly Phe Phe Phe Lys，所有氨基酸均为L
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型。2.一种如权利要求1所述的马铁菊头蝠来源抗菌肽RF
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CATH2在制备抗菌药物中的应用，其特征在于：马铁菊头蝠...

【专利技术属性】
技术研发人员：周江，罗暄巾，王义鹏，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：