一种输卵管癌靶标抗原、输卵管癌靶标抗原刺激培养的CTL细胞及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种输卵管癌靶标抗原、输卵管癌靶标抗原刺激培养的CTL细胞及其应用，属于肿瘤治疗技术领域。本发明专利技术中所述输卵管癌靶标抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示；本发明专利技术所述的输卵管癌靶标抗原是基于患者肿瘤组织的全外显子检测结果，通过预测分析、筛选获得的有效的肿瘤抗原，利用所述输卵管癌靶标抗原培养获得的CTL细胞，对肿瘤具有特异性的杀伤作用；本发明专利技术提供的输卵管癌靶标抗原可以应用于输卵管癌的治疗。用于输卵管癌的治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种输卵管癌靶标抗原、输卵管癌靶标抗原刺激培养的CTL细胞及其应用
[0001]本申请是申请日为2020年03月18日、申请号为202010190785.9、专利技术名称为《一种输卵管癌靶标抗原组合、输卵管癌靶标抗原组合刺激培养的CTL细胞及其应用》的分案申请。


[0002]本专利技术属于肿瘤治疗
，尤其涉及一种输卵管癌靶标抗原组合、输卵管癌靶标抗原组合刺激培养的CTL细胞及其应用。

技术介绍

[0003]原发性输卵管癌是一种少见的女性生殖道恶性肿瘤。其发病率占妇科恶性肿瘤的0.5％。以40～65岁居多，多发生于绝经后妇女。目前对于输卵管癌的治疗原则是以手术为主，辅助放疗、化疗的综合治疗。
[0004]随着精准治疗的推广，常规的化疗、放疗和靶向已无法满足肿瘤的个性化和多变性，因此，寻找个性化的肿瘤新抗原，培养识别个性化肿瘤新抗原的CTL，将是彻底清除肿瘤的有效方法。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种输卵管癌靶标抗原组合、输卵管癌靶标抗原组合刺激培养的CTL细胞及其应用；本专利技术提供的输卵管癌靶标抗原组合是基于患者肿瘤组织的全外显子检测结果，通过预测分析、筛选获得的有效的肿瘤抗原，利用所述输卵管癌靶标抗原组合培养获得的CTL细胞，对肿瘤具有特异性的杀伤作用；本专利技术提供的输卵管癌靶标抗原特异性针对同一种HLA类型的输卵管癌，实现个性化治疗。
[0006]本专利技术提供了一种输卵管癌靶标抗原组合，包括氨基酸序列如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9、SEQ ID No.16、SEQ ID No.23、SEQ ID No.31和SEQ ID No.45所示的抗原中的一种或几种。
[0007]本专利技术提供了所述的输卵管癌靶标抗原组合在制备治疗输卵管癌的药物中的应用。
[0008]本专利技术提供了所述的输卵管癌靶标抗原组合在制备治疗输卵管癌的CTL细胞中的应用。
[0009]本专利技术提供了一种CTL细胞，所述CTL细胞为所述的输卵管癌靶标抗原组合刺激培养的CTL细胞。
[0010]本专利技术提供了所述的CTL细胞的制备方法，包括以下步骤：
[0011]1)将CTL细胞浓度调整至2～3
×
105cells/mL；
[0012]2)将调整细胞浓度后的CTL细胞、IL
‑
2和所述的输卵管癌靶标抗原组合混合获得培养体系；
[0013]3)将所述培养体系进行培养获得输卵管癌靶标抗原组合刺激培养的CTL细胞。
[0014]优选的，IL
‑
2在培养体系中的终浓度为150～250U/mL。
[0015]优选的，所述的输卵管癌靶标抗原组合中每一种输卵管癌靶标抗原在培养体系中的终浓度为40～60ng/mL。
[0016]优选的，步骤3)中所述培养的温度为36～38℃，所述培养的时间为22～26h。
[0017]优选的，步骤1)中所述的CTL细胞是通过PBMC细胞与APC细胞共培养获得。
[0018]本专利技术提供了所述的CTL细胞在制备治疗输卵管癌药物中的应用。
[0019]本专利技术的有益效果：本专利技术提供的输卵管癌靶标抗原组合是基于患者肿瘤组织的全外显子测序结果，通过预测分析、筛选获得的有效的肿瘤抗原，利用所述输卵管癌靶标抗原组合刺激培养获得的CTL细胞，对肿瘤具有特异性的杀伤作用；对所述CTL细胞培养后，流式分析细胞表型，结果显示NKT(CD56
+
CD3
+
)比例为29.31％，CD8
+
T细胞的比例为50.93％。
附图说明
[0020]图1为输卵管癌靶标抗原1～26号筛选结果；
[0021]图2为输卵管癌靶标抗原27～50号筛选结果
[0022]图3为输卵管癌靶标抗原组合9号和16号刺激培养的CTL对负载抗原多肽的靶细胞和只负载HLA的靶细胞的杀伤效率对比；
[0023]图4为输卵管癌靶标抗原组合31号和45号刺激培养的CTL对负载抗原多肽的靶细胞和只负载HLA的靶细胞的杀伤效率对比；
[0024]图5为输卵管癌靶标抗原组合7号、8号和23号刺激培养的CTL对负载抗原多肽的靶细胞和只负载HLA的靶细胞的杀伤效率对比；
[0025]图6为输卵管癌靶标抗原组合刺激培养的CTL流式分析细胞表型结果。
具体实施方式
[0026]本专利技术提供了一种输卵管癌靶标抗原组合，包括氨基酸序列如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9、SEQ ID No.16、SEQ ID No.23、SEQ ID No.31和SEQ ID No.45所示的抗原中的一种或几种；具体如下所示：
[0027]多肽编号 HLA AlleleMT Epitope Seq7NDUFS1HLA
‑
B*15:01RLSVAGNCRMY(SEQ ID No.7)8C17orf97HLA
‑
B*15:01RYQCLALKGF(SEQ ID No.8)9RAP2CHLA
‑
A*26:01YHKEIEVD(SEQ ID No.9)16PARP10HLA
‑
A*26:01TVYGTGVYF(SEQ ID No.16)23C17orf97HLA
‑
B*15:01QCLALKGF(SEQ ID No.23)31GPNMBHLA
‑
A*02:01VDVEEMCLLTV(SEQ ID No.31)45TRGC2HLA
‑
A*02:01LLGRTAFC(SEQ ID No.45)
[0028]在本专利技术中，所述输卵管癌靶标抗原组合优选的通过对患者肿瘤组织进行全外显子测序，通过分析测序结果、筛选获得的有效的肿瘤抗原。本专利技术对所述外显子测序的方法没有特殊限定，采用本领域常规的外显子测序方法即可。本专利技术在获得所述外显子测序的结果后，优选的采用肿瘤新抗原分析技术对外显子测序结果进行分析，在本专利技术中，所述分
析优选的采用ImmunoMining肿瘤个体化新抗原分析预测软件进行，所述软件著作权的登记号:2019SR0130720。
[0029]本专利技术提供了所述的输卵管癌靶标抗原组合在制备治疗输卵管癌的药物中的应用。在本专利技术中，所述输卵管癌靶标抗原组合通过刺激培养CTL细胞实现对输卵管癌的治疗。
[0030]本专利技术还提供了所述的输卵管癌靶标抗原组合在制备治疗输卵管癌的CTL细胞中的应用。在本专利技术中，利用所述输卵管癌靶标抗原组合刺激培养CTL细胞，使获得的CTL细胞对于负载所述输卵管癌靶标抗原组合的细胞具有特异性的杀伤作用。
[0031]本专利技术提供了一种CTL细胞，所述CTL细胞为所述的输卵管癌靶标抗原组合刺激培养的CTL细胞。
[0032]本专利技术还提供了所述的CTL细胞的制备方法，包括以下步骤：1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种输卵管癌靶标抗原，其特征在于，所述输卵管癌靶标抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。2.权利要求1所述的输卵管癌靶标抗原在制备治疗输卵管癌的药物中的应用。3.权利要求1中所述的输卵管癌靶标抗原在制备输卵管癌CTL细胞中的应用。4.一种CTL细胞，其特征在于，所述CTL细胞为权利要求1中所述的输卵管癌靶标抗原刺激培养的CTL细胞。5.权利要求4所述的CTL细胞的制备方法，包括以下步骤：1)将CTL细胞浓度调整至2～3
×
105cells/mL；2)将调整细胞浓度后的CTL细胞、IL
‑
2和权利要求1中所述的输卵管癌靶标抗原混合获得培养体系；3)将所述培养体系进行培养获得...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦顺昌，张嵘，王海燕，
申请(专利权)人：北京鼎成肽源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：