SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及医学检测试剂领域，具体而言，涉及一种SARS

【技术实现步骤摘要】
SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学检测试剂领域，具体而言，涉及一种SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]2019新型冠状病毒，被世界卫生组织命名为“2019
‑
nCoV”，后被国际病毒分类委员会命名为“严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
‑
CoV
‑
2)”。SARS
‑
CoV
‑
2为圆形或椭圆形的β属新型冠状病毒，呼吸道飞沫传播和接触传播是其主要传播途径。人群普遍易感，潜伏期一般3～7天，潜伏期内存在传染性。SARS
‑
CoV
‑
2感染或疫苗免疫后引发免疫反应，包括在血液中产生结合抗体，其中中和抗体可以阻断病毒的细胞浸润和复制。对于抑制及消除新冠传播的重要途径。
[0003]SARS
‑
CoV
‑
2疫苗，灭活病毒疫苗、腺病毒疫苗、RNA疫苗、重组蛋白疫苗，人群中疫苗保护有效率在70％～95％，少部分人群在疫苗接种后，依然感染患者。疫苗二针免疫后中和抗体水平随免疫时间有下降趋势。康复患者及疫苗免疫后不能完全排除在此感染的风险。中和抗体水平检测对间检测人群免疫后抗体水平动态变化具有重要价值。
[0004]中和抗体检测采用野病毒中和菌斑减少试验(PRNT)，需要在BSL3级试验室中进行。检测通量低，过程繁杂，对操作要求高。IgG/IgM免疫层析或酶联免疫检测试剂一方面因灵敏度低不能实现体内极低含量中和抗体水平检测，另一方面，结合抗体滴度水平与中和抗体滴度并不是成比例关系，不能反应中和抗体真实的滴度。
[0005]因此，需要一种简单、快速高灵敏度中和抗体检测试剂，实现疫苗接种后中和抗体滴度检测，动态监控中和抗体水平，为人群免疫提供精准指导。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一方面涉及一种SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体检测试剂盒的制备方法，包括将ACE2胞外域所包被的固相载体、与标签蛋白偶联的RBD、与酶缀合的抗所述标签蛋白的检测抗体封装为试剂盒；
[0007]所述ACE2胞外域在pH＝6.8～7.4的条件下包被所述固相载体；
[0008]所述ACE2胞外域的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示。
[0009]所述RBD的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。
[0010]可选的，如上所述的方法，所述试剂盒还含有质控抗体、所述酶的反应底物及终止试剂、包被有检测反应无关蛋白的固相载体、阴性对照、阳性对照以及洗涤缓冲液中的一种或多种。
[0011]可选的，如上所述的方法，所述质控抗体包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:3～5所示的重链互补决定区H
‑
CDR1、H
‑
CDR2、H
‑
CDR3，以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:6～8所示的轻链互补决定区L
‑
CDR1、L
‑
CDR2、L
‑
CDR3。
[0012]可选的，如上所述的方法，所述质控抗体的重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9
所示，轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示。
[0013]可选的，如上所述的方法，所述反应无关蛋白为BSA。
[0014]可选的，如上所述的方法，所述阴性对照为5％～15％的FBS溶液。
[0015]可选的，如上所述的方法，所述阳性对照为抗所述RBD的抗体。
[0016]可选的，如上所述的方法，所述标签蛋白选自His、Fc、myc、Flag、HA、SUMO、GFP、GST、Dsb、FkpA中的任一种。
[0017]可选的，如上所述的方法，所述酶选自辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。
[0018]可选的，如上所述的方法，所述固相载体是塑料、微粒或膜载体。
[0019]根据本专利技术的第二方面，涉及如上所述方法制备得到的SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体检测试剂盒。
[0020]本专利技术的有益效果为：
[0021]本专利技术所提供的试剂盒灵敏度高，制备简单，线性范围好，检测准确。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为本专利技术一个实施例中参考值范围ROC曲线；
[0024]图2为本专利技术一个实施例中ELISA log
‑
中和试验log回归分析。
具体实施方式
[0025]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0026]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0027]本专利技术涉及一种SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体检测试剂盒的制备方法，包括将ACE2胞外域所包被的固相载体、与标签蛋白偶联的RBD、与酶缀合的抗所述标签蛋白的检测抗体封装为试剂盒；
[0028]所述ACE2胞外域在pH＝6.8～7.4的条件下包被所述固相载体；
[0029]所述ACE2胞外域的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示。
[0030]所述RBD的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。
[0031]本专利技术所涉及的组分，例如ACE2胞外域、RBD的氨基酸序列还可以与选自各自的氨基酸序列具有至少约80％同一性、至少约90％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一
性、至少约97％同一性、至少约98％同一性或至少约99％同一性的序列，优选保留各自的功能，000例如对于ACE2胞外域、RBD，其具有特异性结合形成ACE2胞外域
‑
RBD复合体的功能。
[0032]“实质上相似”氨基酸序列还可以为仅包括保守区中的保守氨基酸置换。例如给定的氨基酸序列与参比序列共有至少85％、更优选至少90本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体检测试剂盒的制备方法，包括将ACE2胞外域所包被的固相载体、与标签蛋白偶联的RBD、与酶缀合的抗所述标签蛋白的检测抗体封装为试剂盒；所述ACE2胞外域在pH＝6.8～7.4的条件下包被所述固相载体；所述ACE2胞外域的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示。所述RBD的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。2.根据权利要求1所述的方法，所述试剂盒还含有质控抗体、所述酶的反应底物及终止试剂、包被有检测反应无关蛋白的固相载体、阴性对照、阳性对照以及洗涤缓冲液中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的方法，所述质控抗体包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:3～5所示的重链互补决定区H
‑
CDR1、H
‑
CDR2、H
‑
CDR3，以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:6～8所示的轻链互补决定区L
‑
CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓明，王瑜新，夏小凯，程天龄，程鲁向，黄迎燕，陈蓉，肖俐，
申请(专利权)人：上海捷诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：