一种基于生物素-亲和素体系的检测试纸及试剂卡制造技术

本实用新型专利技术涉及检测诊断领域，具体涉及一种基于生物素

【技术实现步骤摘要】
一种基于生物素
‑
亲和素体系的检测试纸及试剂卡


[0001]本技术涉及检测诊断领域，具体涉及一种基于生物素
‑
亲和素体系的检测试纸及试剂卡。

技术介绍

[0002]侧向层析技术是20世纪90年代在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术，具有快速、简便的优点。传统工艺通常以硝酸纤维素膜为载体，将特异性的抗原或抗体固定在NC膜上，胶体金或微球标记的特异性抗原或抗体放在玻纤中干燥，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用侧向移动，与结合垫上的胶体金或微球标记的试剂发生特异的免疫反应，再移动到NC膜上，被固定在 NC膜表面的抗原或抗体捕获，聚集在检测带上，通过测定标记物(胶体金或乳胶颗粒)的信号换算相对浓度，但是单纯的抗原抗体结合效率较低。
[0003]生物素
‑
亲和素是一种生物放大体系，现有技术常将生物素标记的抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白固定在样品垫或结合垫上进行放大，但样品垫或结合垫本身的不均一性会对检测的精密度产生影响。
[0004]随着层析技术的发展，现有尝试将原本放在玻纤部分的标记胶体金或微球标记的特异性抗原或抗体放在NC膜上，利用NC膜的释放均一性，提升了检测结果的精密度。但是由于 NC膜本身特性，大部分的标记抗体或抗原在短时间释放且快速通过检测线上的抗体或抗原，因此对于抗原抗体的结合效率就有非常高的要求。

技术实现思路

[0005]本技术提供一种基于生物素
‑
>亲和素体系的检测试纸及试剂卡，以解决现有技术中存在的精密度低和抗原抗体结合效率低的问题。
[0006]为了实现上述目的，本技术采用如下技术手段：
[0007]本技术一方面提供一种基于生物素
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亲和素体系的检测试纸，包括背衬卡、硝酸纤维素膜(NC膜)、样本垫和吸水垫，所述NC膜位于背衬卡上方、一端与样本垫相接、另一端与吸水垫相接；其中NC膜上含有生物素标记线、胶体金或微球标记线、链酶亲和素检测线和质控线。
[0008]优选地，所述生物素标记线、胶体金或微球标记线、链酶亲和素检测线和质控线依次平行排列在NC膜上，所述生物素标记线与所述样本垫相邻，所述质控线与所述吸水垫相邻。
[0009]本技术另一方面提供一种基于生物素
‑
亲和素体系的检测试剂卡，包括上、下PVC 卡壳和检测试纸，所述检测试纸包括NC膜、样本垫和吸水垫，所述NC膜位于背衬卡上方、一端与样本垫相接、另一端与吸水垫相接；其中NC膜上含有生物素标记线、胶体金或微球标记线、链酶亲和素检测线和质控线。
[0010]优选地，所述上PVC卡壳设有观察窗、加样孔和二维码，所述下PVC卡壳设有试纸放
置区，用于固定试纸不发生移动。
[0011]所述基于生物素
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亲和素体系的检测试纸的制备方法，包括如下步骤：
[0012](1)划线过程：将各划线物质分别划到NC膜上，其中所述划线物质包括：生物素标记物、胶体金或微球标记物、链霉亲和素和质控物；
[0013](2)将样本垫、NC膜和吸水垫依次相互搭接粘贴与背衬板上组装起来。
[0014]优选地，所述步骤(1)中的划线过程，还包括划膜液，所述划膜液与所述划线物质混合后划到NC膜上。
[0015]优选地，与所述生物标记物混合后划到NC膜上的划膜液包括10
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100mM缓冲液、 0.5
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10mg/ml蛋白、0.5
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5％保护剂、0.01
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0.1％防腐剂，所述缓冲液选自MES缓冲液、MOPS 缓冲液、MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液；所述蛋白选自牛血清白蛋白、酪蛋白钠、鱼明胶、氨基酸或肽类物质中的一种或多种；所述保护剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇或PEG中的一种或多种；所述防腐剂为叠氮钠或Proclin 300。生物素标记物与划膜液A混合后进行划线，可以使划线后固定在NC膜上的生物标记物，更好的释放出来。
[0016]优选地，与所述胶体金或微球标记物混合后划到NC膜上的划膜液包括：10
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100mM缓冲液、0.05
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18％表面活性剂、0.5
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10mg/ml蛋白、0.5
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5％保护剂、0.01
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0.1％防腐剂；所述缓冲液选自MES缓冲液、MOPS缓冲液、MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液；所述表面活性剂选自吐温、曲拉通、B66或Brij中的一种或多种；所述蛋白选自牛血清白蛋白、酪蛋白钠、鱼明胶、氨基酸或肽类物质中的一种或多种；所述保护剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇或PEG的一种或多种；所述防腐剂为叠氮钠或Proclin 300。胶体金或微球标记物与划膜液B混合后进行划线，可以使划线后固定在NC膜上的胶体金或微球标记物，更好的释放出来。
[0017]优选地，与所述链霉亲和素混合后划到NC膜上的划膜液包括：10
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100mM缓冲液、0.5
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5％保护剂、固定剂、0.01
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0.1％防腐剂，所述缓冲液选自MES缓冲液、MOPS缓冲液、MOPSO 缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液；所述固定剂为甲醇；防腐剂为叠氮钠或Proclin 300。链霉亲和素与划膜液C混合后进行划线，可以使划线后固定在NC膜上的链霉亲和素，更好的固定。
[0018]本技术所有“％”均表示“g/100mL”。
[0019]本技术的有益效果在于：
[0020](1)本技术将生物素标记物、胶体金或微球标记物及链霉亲和素均固定在NC膜上，不需要添加结合垫，解决了因为结合垫本身不均一带来的精密度不好的问题；
[0021](2)本技术分别划线，所有标记物是单独分开的，可以防止混合后产生反应，导致检测结果不准确的问题；
[0022](3)且本技术对NC膜上各条线之间的距离并无要求，减少了人为操作的难度；
[0023](4)本技术将生物素标记物、胶体金或微球标记物及链酶亲和素均包被于NC膜上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用侧向移动，先于生物素标记抗体或抗原反应，再与胶体金或微球标记抗体或抗原反应，形成生物素标记抗体或抗原
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抗原或抗体
ꢀ‑
胶体金或微球标记抗体或抗原复合物，被固定在NC膜检测线上的链酶亲和素捕获，利用样本层析距离延长了抗原抗体的反应时间，同时链酶亲和素与生物素反应效率是抗原抗体结合效率的数倍，大大提高了试剂的灵敏度。
附图说明
[0024]图1；基于生物素
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亲和素体系的检测试纸示意图；
[0025]图2；非生物素
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亲和素体系本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于生物素
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亲和素体系的检测试纸，其特征在于，包括背衬卡、NC膜、样本垫和吸水垫，所述NC膜位于背衬卡上方、一端与样本垫相接、另一端与吸水垫相接；其中NC膜上含有生物素标记线、胶体金或微球标记线、链酶亲和素检测线和质控线。2.如权利要求1所述的检测试纸，其特征在于所述生物素标记线、胶体金或微球标记线、链酶亲和素检测线和质控线依次平行排列在NC膜上，所述生物素标记线与所述样本垫相邻，所述质控线与所述吸水垫相邻。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：吴瑜佳，周小卫，张浦东，
申请(专利权)人：重庆中元汇吉生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：