一种高纯度荧光素的纯化方法技术

本发明专利技术属于荧光素提纯技术领域，涉及一种高纯度荧光素的纯化方法。以粗品荧光素为原料，其特征在于，乙酰化反应后纯水打浆，重结晶，然后利用甲醇钠脱乙酰精制得到精品荧光素。本发明专利技术是利用制备荧光素衍生物的方法提纯荧光素的新工艺，由于荧光素二乙酸酯易于制备、易于还原，并且具有很好的结晶性，与杂质的性质差别比较大，因此利用荧光素钠制备荧光素二乙酸酯，再经皂化还原的提纯路线克服了现有技术中酸碱重复使用，以及杂质常与荧光素产生共沉淀的问题。共沉淀的问题。共沉淀的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度荧光素的纯化方法


[0001]本专利技术属于荧光素提纯
，涉及一种高纯度荧光素的纯化方法。

技术介绍

[0002]荧光素（fluorescein）又名荧光橙黄或荧光橙红，化学名称是3',6
’‑
二羟基螺[异苯并呋喃1 ( 3H) ,9
’‑
(9H)
‑ꢀ
呫吨]‑3‑
酮或9
‑
(邻羧基苯基)
‑6‑
羟基
‑
3H
‑
呫吨
‑3‑
酮，由VonBayer在1871年首次合成。荧光素有三种互变结构形式存在：内酷式结构、醌式结构、两性离子式结构，分子结构式如下：荧光素最大吸收/发射波长在492/571 nm（水中），荧光量子产率在0.92 (pH>8)。由于氧桥键的存在，两个苯环固定在一个平面上，使分子具有刚性共平面结构，在激发光作用下，能产生强烈的荧光。
[0003]高纯度荧光素钠被广泛应用于眼底造影的注射制剂或滴眼液制剂中，一般由纯化后的荧光素制得。荧光素通常由间苯二酚和苯酐缩合而得，国内常规提纯荧光素的方法一般由碱溶解后，酸析沉淀，如此循环多次而得到。由于酸析荧光素为无定形结晶，表面积大，对杂质吸附严重。同时，杂质大部分为酸性物质，不溶于酸性水溶液，所以，杂质常常和荧光素形成共沉淀。因此，常规工艺很难得到高纯度的荧光素。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对传统粗品荧光素精制过程中存在的问题提出一种新型的高纯度荧光素的纯化方法。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术是采用下述的技术方案实现的：一种高纯度荧光素的纯化方法，以苯酐、间苯二酚共热制得的粗品荧光素为原料，该工艺现已成熟，广泛应用在工业生产中，其产物粗品荧光素可直接购买得到，本专利技术不再赘述。本专利技术采用此工艺得到的粗品荧光素经过乙酰化反应后用纯水进行打浆，然后重结晶，再利用甲醇钠脱乙酰精制得到精品荧光素。
[0006]作为优选，具体步骤如下：（1）乙酰化将粗品荧光素和乙酸或乙酸乙酯混合均匀后，加入乙酸酐、缚酸剂50
‑
60℃下反应3
‑
5小时，降温至20
‑
30℃以下析晶1
‑
2h后过滤，滤饼用纯水打浆，45
‑
55℃鼓风干燥8h，得到
淡黄色双乙酰荧光素；（2）重结晶将淡黄色双乙酰荧光素加入5
‑
6倍体积的（m/V）有机溶剂加热至40
‑
45℃溶解后热滤，加入4
‑
6倍体积的（m/V）析出溶剂降温至0
‑
5℃抽滤，然后45
‑
55℃下鼓风干燥8h得到白色晶状双乙酰荧光素；（3）皂化反应将白色晶状双乙酰荧光素加入4
‑
6倍体积的（m/V）甲醇中，搅拌均匀后加入甲醇钠至混合物颜色变为橘红色，升温至55
‑
65℃，搅拌进行皂化反应2
‑
2.5h，补加乙酸继续搅拌反应3
‑
3.5h，然后降温至0
‑
5℃析晶1
‑
1.5h后抽滤，50
‑
55℃鼓风烘干8h；（4）加入4
‑
6倍体积的（m/V）乙醇中加热至65
‑
75℃打浆30
‑
40min，然后降至室温后抽滤，45
‑
55℃鼓风干燥8h得到精品荧光素。
[0007]作为优选，步骤（1）中粗品荧光素：乙酸酐：缚酸剂质量比为1:（2
‑
4）：（0.1
‑
0.3），乙酸加入量为4
‑
6L/千克粗品荧光素，缚酸剂为碳酸钠、碳酸钾、吡啶中的任意一种。
[0008]作为优选，步骤（2）中有机溶剂为二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、丙酮中的任意一种，所述析出溶剂为石油醚或乙醚。
[0009]作为优选，步骤（3）中白色晶状双乙酰荧光素：甲醇钠：乙酸质量比为1：（0.6
‑
0.7）：（0.55
‑
0.6）。
[0010]与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：本专利技术是利用制备荧光素衍生物的方法提纯荧光素的新工艺，由于荧光素二乙酸酯易于制备、易于还原，并且具有很好的结晶性，与杂质的性质差别比较大，因此利用荧光素钠制备荧光素二乙酸酯，再经皂化还原的提纯路线克服了现有技术中酸碱重复使用，以及杂质常与荧光素产生共沉淀的问题。
附图说明
[0011]图1为取样点板分析情况。
[0012]图2
‑
图4为实施例1
‑
3制得的精品荧光素液相色谱检测图。
[0013]图5
‑
图7为实施例1
‑
3制得的精品荧光素气相色谱检测图。
具体实施方式
[0014]为了能够更清楚地理解本专利技术的上述目的、特征和优点，下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0015]在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是，本专利技术还可以采用不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本专利技术并不限于下面公开说明书的具体实施例的限制。
[0016]下述各实施例中得到的产品采用高效液相色谱仪进行检测，检测条件如下。
[0017]仪器：高效液相色谱仪；色谱柱：以Accucore
™ꢀ
Vanquish
™ꢀ
C18+ 超高效液相色谱柱（1.5
ꢀµ
m），规格150
×
2.1mm，1.5μm；
检测波长：245nm；流速：1.0ml/min；柱温：37℃；流动相：以磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾0.32g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.5）为流动相A；乙腈为流动相B。
[0018]梯度洗脱程序如表1所示。
[0019]表1 梯度洗脱程序溶剂：流动相A
‑
乙腈（30：70）。
[0020]数据处理采用自身对照法。
[0021]下述各实施例中得到的产品采用气相色谱仪检测溶剂残留，检测条件如下。
[0022]40℃维持8min，再以8℃/min的速度升至120℃，维持10min；以氮气为载气，流速为2.0mL/min。以水为溶剂时顶空瓶温度70
‑
85℃，顶空时间30
‑
60min，进样口温度200℃，如采用FID检测器，温度为250℃。取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。由于气相色谱为荧光素溶剂残留常用的检测手段，未特殊说明之处，色谱检测条件与常规条件一致。
[0023]实施例1以苯酐与间苯二酚共热制得粗品荧光素作为原料，原料纯度不限，工业上得到的常规粗品荧光素即可。取粗品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度荧光素的纯化方法，以粗品荧光素为原料，其特征在于，乙酰化反应后纯水打浆，重结晶，然后利用甲醇钠脱乙酰精制得到精品荧光素。2.根据权利要求1所述高纯度荧光素的纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）乙酰化将粗品荧光素和乙酸或乙酸乙酯混合均匀后，加入乙酸酐、缚酸剂50
‑
60℃下反应3
‑
5小时，降温至20
‑
30℃析晶1
‑
2h后过滤，滤饼用纯水打浆，45
‑
55℃鼓风干燥8h，得到淡黄色双乙酰荧光素；（2）重结晶将淡黄色双乙酰荧光素加入5
‑
6倍体积的（m/V）有机溶剂加热至40
‑
45℃溶解后热滤，加入4
‑
6倍体积的（m/V）析出溶剂降温至0
‑
5℃抽滤，然后45
‑
55℃下鼓风干燥7
‑
8h得到白色晶状双乙酰荧光素；（3）皂化反应将白色晶状双乙酰荧光素加入甲醇，甲醇用量为4
‑
6L/kg双乙酰荧光素，搅拌均匀后加入甲醇钠至混合物颜色变为橘红色，升温至55
‑
65℃，搅拌进行皂化反应2
‑
2.5h，补加乙酸继续搅拌反应3
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兆元，高云兵，甄爱华，刘建洋，苗元旭，
申请(专利权)人：山东绅联药业有限公司，
类型：发明
国别省市：