一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学技术，具体涉及小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法。技术方案的具体步骤：（1）向雌性小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG；（2）用颈椎脱臼法处死小鼠，分离小鼠卵巢，PBS清洗，显微镜下去除其周围脂肪被膜；（3）在混合操作液中用注射器针头刺破卵泡使颗粒细胞和卵母细胞释放出来，筛网过滤，滤液离心弃上清；（4）混合完全培养基重悬细胞沉淀接种，操作液为DME/F

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法


[0001]本研究属于细胞生物学技术，具体涉及一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法。

技术介绍

[0002]卵泡主要由卵母细胞、颗粒细胞和卵泡膜细胞构成，颗粒细胞是卵巢中的一种体细胞，其在卵泡中的发育早于其他细胞，当其形态和数量达到一定水平，卵母细胞才开始发育，所以颗粒细胞是启动卵泡发育的关键因素。同时颗粒细胞表达各种促性腺激素受体进一步调节卵泡的生长和成熟，亦是卵泡闭锁的发起者。因此，颗粒细胞可作为研究女性及雌性动物生殖内分泌变化、生理功能调控及评估体外药效药理的良好细胞模型。目前有关体外分离对小鼠卵巢颗粒细胞的体外培养研究较少，且效果不稳定，本专利技术旨在提供一种简便廉效的小鼠卵巢颗粒细胞的分离培养方法。

技术实现思路

[0003]专利技术解决的技术问题：本专利技术公开了一种小鼠卵巢颗粒细胞的分离及培养方法，包括步骤如下：注射PMSG后将小鼠断颈椎处死，取出卵巢，用PBS冲去血污；显微镜下去除其周围脂肪和被膜；在混合操作液中用注射器针头刺破卵泡使颗粒细胞和卵母细胞释放出来，收集后离心，用混合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，具体步骤为：（1）向雌性小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG；（2）用颈椎脱臼法处死小鼠，分离小鼠卵巢，PBS清洗，显微镜下去除其周围脂肪和被膜；（3）在混合操作液中用注射器针头刺破卵泡使颗粒细胞和卵母细胞释放出来，筛网过滤，滤液离心弃上清；（4）混合完全培养基重悬细胞沉淀接种，其特征在于，操作液为DME/F
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12 1:1+3%胎牛血清+2%青链霉素混合液+2%支原体清除剂。2.如权利要求1所述的一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为小鼠采用3周龄，体重10
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13g，未成熟的雌性小鼠。3.如权利要求2所述的一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法，其特征为PMSG的注射量为5
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈玥，陈思，赵伟博，卢燕，王佩娟，叶宇齐，
申请(专利权)人：江苏省中医药研究院，
类型：发明
国别省市：