宫腔粘连的模型制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，旨在建立用宫血干细胞(MenSCs)来源的外泌体(exosomes)在体外缓解宫腔粘连的模型，为开展治疗宫腔粘连的非细胞疗法研究提供基础。原代分离人子宫内膜间质细胞(ESCs)，用一定浓度TGF

【技术实现步骤摘要】
宫腔粘连的模型


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，旨在建立用宫血干细胞(MenSCs)来源的外泌体(exosomes)在体外缓解宫腔粘连的模型。

技术介绍

[0002]宫腔粘连(intrauterine adhesion，IUA)是宫腔镜手术发展引起的一个重要的潜在生育并发症。宫腔镜检查期间基底层子宫内膜损伤会导致反复流产、异常子宫出血、闭经、不孕等。此外，宫腔粘连还可引起子宫内膜腔部分或全部闭塞，导致子宫充血和严重的骨盆疼痛。对于宫腔粘连患者来说，最有效的治疗方式是促进子宫内膜的再生和修复，只有这样才能从根本意义上改善其生殖和生理功能。因此除了预防再粘连，如何有效地促进子宫内膜的修复是提高IUA疗效的重中之重。
[0003]多种来源的干细胞被证明可以通过旁分泌作用发挥促进组织修复和缓解纤维化的作用，而外泌体是旁分泌中的高度活跃成分。
[0004]但是目前缺乏有效的宫腔粘连模型，以检测或验证待测外泌体是否对于治疗IUA有效。

技术实现思路

[0005]为了获得有效的宫腔粘连模型，本专利技术的专利技术人经过大量、坚持不懈的筛选，发现TGF
‑
β处理后的子宫内膜间质细胞(ESCs)可以作为宫腔粘连模型，进而为加快治疗IUA的药物或外泌体提供了有力保障。
[0006]本专利技术的一个方面提供了一种子宫内膜间质细胞，其是通过TGF
‑
β处理过的。
[0007]本专利技术的另一方面提供了一种构建宫腔粘连模型的方法，其包括用TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞。
[0008]本专利技术还提供了一种用于构建宫腔粘连模型的试剂盒，其包括子宫内膜间质细胞和TGF
‑
β。
[0009]本专利技术还提供了TGF
‑
β在制备用于构建宫腔粘连模型的试剂盒中的用途。
[0010]具体而言，本专利技术涉及的子宫内膜间质细胞分离自子宫内膜组织或由干细胞诱导分化而来。
[0011]在本专利技术的一个实施方式中，用TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞至少2个小时，例如可以为4、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48小时。
[0012]在本专利技术的一个实施方式中使用10
‑
50ng/ml TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞，优选地，使用20ng/ml TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞。
[0013]可以显而易见理解的是，TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞的时间可以随着TGF
‑
β浓度的变化而变化。例如，TGF
‑
β浓度较高的情况下，处理时间可以相应缩短；反之，TGF
‑
β浓度较低的情况下，处理时间可以相应延长。
[0014]示例性地，本专利技术提供了一种构建宫腔粘连模型的方法，其包括如下步骤：
[0015]在培养基中培养子宫内膜间质细胞；
[0016]向培养基中添加TGF
‑
β；
[0017]继续培养并分离子宫内膜间质细胞。
[0018]任选地，本专利技术的构建宫腔粘连模型的方法还包括从人体子宫内膜组织获得子宫内膜间质细胞的步骤或从干细胞诱导分化并获得子宫内膜间质细胞的步骤。
[0019]任选地，在向培养基中添加TGF
‑
β后，无菌条件下在
‑
2℃至
‑
4℃下静置一段时间后恢复至培养温度。示例性地，在
‑
2℃至
‑
4℃下静置0.5
‑
1.0小时，然后在0.5
‑
1.0小时内逐渐升温至培养温度，例如37℃。
[0020]在本专利技术的一个实施方式中，试剂盒中所包括的子宫内膜间质细胞和TGF
‑
β是分开存放的。
[0021]进一步地，本专利技术的试剂盒还包括用于构建子宫内膜间质细胞培养基的组分。
[0022]优选地，本专利技术的试剂盒还包括试剂盒说明书，以明示如何操作并获得宫腔粘连细胞模型。
[0023]本专利技术的宫腔粘连细胞模型尤其适用于检测或预测待测外泌体是否对宫腔粘连治疗有效。
[0024]本专利技术还提供了一种预测外泌体是否对宫腔粘连治疗有效的方法，其包括使外泌体作用于本专利技术的细胞模型的步骤。
[0025]本文已采用的术语和表述用作描述性而不是限制性术语，并且在此种术语和表述的使用中不预期排除所示和所述特征或其部分的任何等价物，但应认识到各种修饰在请求保护的本专利技术的范围内是可能的。因此，应当理解尽管本专利技术已通过优选实施方案和任选特征具体公开，但本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修饰和变化，并且此类修饰和变化被视为在如由附加权利要求定义的本专利技术的范围内。
[0026]为更清楚地说明本专利技术，现结合如下实施例进行详细说明，但这些实施例仅仅是对本专利技术的示例性描述，并不能解释为对本申请的限制。
附图说明
[0027]图1：子宫内膜间质细胞的鉴定。
[0028]图2：MenSCs光镜下细胞形态观察。
[0029]图3：MenSCs生长曲线。
[0030]图4：MenSCs表面标志物的鉴定。
[0031]图5：MenSCs成骨、成脂、成软骨结果。
[0032]图6：外泌体的鉴定。
[0033]图7：TGF
‑
β诱导的ESCs与外泌体共培养后qPCR检测结果。
[0034]图8：MenSCs来源的外泌体可被ESCs摄取。
[0035]图9：Transwell体系中ESCs的迁移。
[0036]图10：MenSCs来源的外泌体促进划痕愈合。
具体实施方式
[0037]本专利技术结合附图和实施例作进一步的说明。
[0038]实施例1：
[0039]下面结合附图和具体实施例对本专利技术的内容做进一步的说明。下述实施例仅为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让本
的人员了解本专利技术的内容，并不能以此限制本专利技术的保护范围，凡根据本专利技术技术方案所作的等效变化，都应覆盖在本法的保护范围之内。
[0040]材料与试剂
[0041]组织收集：
[0042]1.MenSCs来源
[0043]根据研究需要，招募20
‑
40岁的健康育龄期女性志愿者，与有意向捐赠宫血干细胞的志愿者沟通，明确意愿，按要求签订科研捐赠协议。告知流程、标准和知情同意书的内容，涉及到的所有文件都经浙江大学伦理委员会审查并获得批准。所获得宫血样本仅用于提取MenSCs，不作他用，P3
‑
P8代次用于后续实验。
[0044]2.ESCs来源
[0045]招募绝经前因子宫肌瘤或子宫下垂等各种妇科良性适应症行腹腔镜观察或腹腔镜下子宫切除本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.提供了一种构建宫腔粘连模型的方法，其包括受用TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述子宫内膜间质细胞分离自子宫内膜组织或由干细胞诱导分化而来。3.根据权利要求1所述的方法，其中在培养子宫内膜间质细胞的培养基中处理子宫内膜间质细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其中使用10
‑
50ng/ml TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞，优选地，使用20ng/ml TGF
‑
β处理子宫内膜间质细胞。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其包括如下步骤：在培养基中培养子...

【专利技术属性】
技术研发人员：张真真，许震宇，项春生，
申请(专利权)人：浙江普慧医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：