用于控制蛋白质功能的融合构建体制造技术

本文描述了包含与感兴趣的多肽融合的变体蛋白酶(例如，HCV NS3蛋白酶)和同源蛋白酶切割位点的工程化融合蛋白。所述同源蛋白酶切割位点的可切割性赋予所述感兴趣的多肽的一种或多种功能的可控性。另外公开了产生工程化融合蛋白的方法及其治疗用途。融合蛋白的方法及其治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于控制蛋白质功能的融合构建体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年1月25日提交的美国临时申请第62/797,043号的权益和优先权，出于所有目的通过引用将其完整并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有已经以电子方式以ASCII格式提交并且通过引用完整并入本文的序列表。创建于2020年1月17日的所述ASCII副本被命名为STB
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015WO_SL.txt，并且大小为83,131个字节。


[0005]本公开总体上涉及蛋白质工程化和控制蛋白质功能方法的领域。具体而言，本公开涉及工程化融合蛋白，其包含与感兴趣的多肽融合的变体蛋白酶(例如，HCV NS3蛋白酶)和同源蛋白酶切割位点，所述同源蛋白酶切割位点的切割可以被蛋白酶抑制剂抑制，使得感兴趣的多肽的一种或多种功能是可控的。

技术介绍

[0006]用于快速切断真核生物中特定蛋白质的产生和/或功能的技术作为研究工具和用于基因或细胞疗法应用具有广泛用途，但尚未开发出简单且有效的方法。
>[0007]由于现本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】ID NO:1的位置1080的位置的Thr至Ala取代和位于对应于SEQ ID NO:1的位置1077的位置的Val至Ala取代。10.如权利要求5所述的融合蛋白，其中所述一个或多个氨基酸取代包括位于对应于SEQ ID NO:1的位置1080的位置的Thr至Ala取代和位于对应于SEQ ID NO:1的位置1081的位置的Val至Ala取代。11.如权利要求1
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10中任一项所述的融合蛋白，其进一步包含HCV NS4A辅共因子。12.如权利要求1
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11中任一项所述的融合蛋白，其进一步包含降解决定子，其中所述降解决定子与所述感兴趣的多肽可操作连接。13.如权利要求12所述的融合蛋白，其中所述降解决定子选自下组，该组的组成为：HCV NS4降解决定子、PEST(人IκBα的残基277
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307的两个拷贝)(SEQ ID NO:46)、GRR(人p105的残基352
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408)(SEQ ID NO:47)、DRR(酵母Cdc34的残基210
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295)(SEQ ID NO:48)、SNS(SP2和NB的串联重复序列(甲型流感或乙型流感的SP2
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NB
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SP2)(SEQ ID NO:49)、RPB(酵母RPB的残基1688
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1702的四个拷贝)(SEQ ID NO:50)、SPmix(SP1和SP2的串联重复序列(甲型流感病毒M2蛋白的SP2
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SP1
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SP2
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SP1
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SP2)(SEQ ID NO:51)、NS2(甲型流感病毒NS蛋白的残基79
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93的三个拷贝)(SEQ ID NO:52)、ODC(鸟氨酸脱羧酶的残基106
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142)(SEQ ID NO:53)、Nek2A、小鼠ODC(残基422
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461)、小鼠ODC_DA(包括D433A和D434A点突变的mODC的残基422
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461)(SEQ ID NO:54)、APC/C降解决定子、COP1 E3连接酶结合降解决定子基序、CRL4
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Cdt2结合PIP降解决定子、肌动丝蛋白结合降解决定子、KEAP1结合降解决定子、KLHL2和KLHL3结合降解决定子、MDM2结合基序、N
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降解决定子、缺氧信号传导中的羟脯氨酸修饰、植物激素依赖性SCF
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LRR结合降解决定子、SCF泛素连接酶结合磷酸化降解决定子、植物激素依赖性SCF
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LRR结合降解决定子、DSGxxS(SEQ ID NO:55)磷酸化依赖性降解决定子、Siah结合基序、SPOP SBC对接基序和PCNA结合PIP盒。14.如权利要求1
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13中任一项所述的融合蛋白，其中所述变体HCV NS3蛋白酶包含一个或多个另外的突变。15.如权利要求14所述的融合蛋白，其中所述一个或多个另外的突变调节变体HCV NS3蛋白酶的酶活性。16.如权利要求14或权利要求15所述的融合蛋白，其中所述一个或多个另外的突变是一个或多个另外的氨基酸取代。17.如权利要求16所述的融合蛋白，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代位于对应于SEQ ID NO:1的位置1074、SEQ ID NO:1的位置1078和/或SEQ ID NO:1的位置1079的一个或多个位置。18.如权利要求17所述的融合蛋白，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代选自下组，该组的组成为：位于对应于SEQ ID NO:1的位置1074的位置的Ile至Ala取代、位于对应于SEQ ID NO:1的位置1079的位置的Trp至Ala取代和它们的任何组合。19.如权利要求18所述的融合蛋白，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代降低变体HCV NS3蛋白酶的酶活性。20.如权利要求17所述的融合蛋白，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代包括位于对应于SEQ ID NO:1的位置1078的位置的Cys至Ala取代。21.如权利要求20所述的融合蛋白，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代增强变体
HCV NS3蛋白酶的酶活性。22.如权利要求1
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21中任一项所述的融合蛋白，其中所述同源蛋白酶切割位点包含选自由表1中列出的任何氨基酸序列组成的组的氨基酸序列。23.如权利要求1
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21中任一项所述的融合蛋白，其中所述同源蛋白酶切割位点包含选自下组的氨基酸序列，该组的组成为：CMSADLEVVTSTWVLVGGVL(SEQ ID NO:4)、YQEFDEMEECSQHLPYIEQG(SEQ ID NO:5)、WISSECTTPCSGSWLRDIWD(SEQ ID NO:6)和GADTEDVVCCSMSYSWTGAL(SEQ ID NO:7)。24.如权利要求1
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21中任一项所述的融合蛋白，其中所述同源蛋白酶切割位点包含选自下组的氨基酸序列，该组的组成为：ADLEVVTSTWL(SEQ ID NO:8)、DEMEECSQHL(SEQ ID NO:9)、ECTTPCSGSWL(SEQ ID NO:10)和EDVVPCSMG(SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：森迪生物科学公司，
类型：发明
国别省市：