一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法技术

本发明专利技术涉及植物抗性检测领域，特别是涉及一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法。本发明专利技术提供了一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法，包括以下步骤：将甘蔗细菌性病害的病原菌液接种到离体的甘蔗叶片后，对接种所得甘蔗叶片进行培养和抗性鉴定，根据经所述培养后甘蔗叶片上条纹病斑长度，判断甘蔗对细菌的抗性和发病等级；发病等级和抗性水平划分标准如下：病斑长度≤5.0cm，发病等级为1级，高抗；5.0cm＜病斑长度≤10.0cm，发病等级为2级，抗病；10.0cm＜病斑长度＜15.0cm，发病等级为3级，感病；病斑长度≥15.0cm，发病等级为4级，高感。本发明专利技术所述方法具有操作简单、不受季节和外界环境的限制、接种鉴定稳定、效率高和周期短的优势。效率高和周期短的优势。效率高和周期短的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法


[0001]本专利技术涉及植物抗性检测领域，特别是涉及一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法。

技术介绍

[0002]甘蔗白条病是由白条黄单胞杆菌(Xanthomonas albilineans)引起的，对甘蔗具有毁灭性的细菌性病害，是甘蔗三大细菌性病害之一。白条黄单胞杆菌在2007年被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》，是我国甘蔗种质进口检疫的主要对象之一。
[0003]白条黄单胞杆菌侵染甘蔗植株后，导致甘蔗生长缓慢，严重时造成植株坏死，给甘蔗生产带来严重的损失。近年来，该病害在我国广西、广东、云南、海南等蔗区已有报道。甘蔗白条病发病症状：可见叶片表面出现与主脉平行的白色至黄色褪绿铅笔线条纹，条纹颜色随时间的增长常常变成微红，边缘变宽，条纹中带有许多红色小点。
[0004]甘蔗白条病是一种传染性较强的细菌性种传病害，主要通过带病种苗的运输进行远距离传播、刀具等收获工具进行传播、气流和雨水进行传播，故开放式活体接种易造成该病的扩散。该病害通常在较长的潜伏期内不表现症状或症状表现不明显，一旦遇到适合的环境，便突然爆发，特别是当种植甘蔗品种为不抗病品种时，大面积爆发感染会造成严重产量损失。这种潜伏性和突发性特点，给甘蔗白条病的防治和检疫带来很大困难。为降低白条病对甘蔗生产的危害，选育并推广应用抗病品种是甘蔗白条病绿色防控最经济、有效的措施。
[0005]甘蔗白条病传统的接种鉴定方法主要有剪叶法和截头法，剪叶法的主要特征是：在甘蔗苗期用消过毒的手术刀沾取白条黄单胞杆菌菌悬液，剪掉植株叶片叶尖1/3部位，每接种1株后，手术刀要重新沾取菌液；剪叶法的主要特征是：甘蔗+1叶的叶耳处斩断头部，用移液枪取100μL制备好的菌悬液涂抹切口位置；采用剪叶法与截头法开展甘蔗品种白条病抗性鉴定与评价，虽然操作简单，但受到甘蔗生长季节限制和外界环境变化的影响较大，接种鉴定不稳定、效率低且周期较长。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法。本专利技术所述方法操作简单、不受季节和外界环境的限制，具有接种鉴定稳定、效率高和周期短的优势。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法，包括以下步骤：
[0009]将甘蔗细菌性病害的病原菌液接种到离体的甘蔗叶片后，对接种所得甘蔗叶片进行培养和抗性鉴定，根据经所述培养后甘蔗叶片上条纹病斑的长度，判断甘蔗对细菌的抗性和发病等级；
[0010]发病等级和抗性水平划分标准如下：
[0011]病斑长度≤5.0cm，发病等级为1级，高抗；
[0012]5.0cm<病斑长度≤10.0cm，发病等级为2级，抗病；
[0013]10.0cm<病斑长度<15.0cm，发病等级为3级，感病；
[0014]病斑长度≥15.0cm，发病等级为4级，高感。
[0015]优选的，所述接种的时间为24h，温度为28℃；所述培养的温度为28℃，时间优选为10d。
[0016]优选的，所述病原菌液的制备方法，包括以下步骤：
[0017](1)将甘蔗细菌性病害的病原菌置于XAL液体培养基中活化培养，得活化菌液；
[0018](2)将活化菌液置于XAS固体培养基中培养，得甘蔗细菌性病害的病原菌单菌落；
[0019](3)挑取病原菌单菌落，接种到XAS固体培养基中培养，得纯化细菌；
[0020](4)将纯化细菌的单菌落置于XAL液体培养基中培养，用XAL液体培养基将其稀释，得所述病原菌液。
[0021]优选的，所述XAL液体培养基包括以下浓度的组分：10g/L的蔗糖、5g/L的细菌级蛋白胨、5g/L的酵母提取物、0.5g/L的磷酸二氢钾、0.25g/L的七水合硫酸镁、0.05g/L的亚硫酸钠、5g/L的溴化钾、0.01g/L的苯菌灵、25mg/L头孢氨苄、30mg/L的新生霉素、50mg/L的春日霉素和100mg/L的放线菌酮。
[0022]优选的，所述XAS固体培养基包括以下浓度的组分：10g/L的蔗糖、5g/L的细菌级蛋白胨、5g/L的酵母提取物、0.5g/L的磷酸二氢钾、0.25g/L的七水合硫酸镁、0.05g/L的亚硫酸钠、5g/L的溴化钾、0.01g/L的苯菌灵、15g/L的琼脂粉、25mg/L头孢氨苄、30mg/L的新生霉素、50mg/L的春日霉素和100mg/L的放线菌酮。
[0023]优选的，步骤(1)所述活化培养的温度为28～32℃，转速为200rpm，时间为18～24h。
[0024]优选的，步骤(2)和步骤(3)所述培养的温度均为28℃～32，时间均为4～5d。
[0025]优选的，步骤(4)所述培养的温度为28～32℃，转速为200rpm，时间为36～48h。
[0026]优选的，所述病原菌液的浓度为1
×
108cfu/mL。
[0027]优选的，所述甘蔗叶片的长度为20cm。
[0028]有益效果：本专利技术提供了一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法，包括以下步骤：将甘蔗细菌性病害的病原菌液接种到离体的甘蔗叶片后，对接种所得甘蔗叶片进行培养和抗性鉴定，根据经所述培养后甘蔗叶片上条纹病斑长度，判断甘蔗对细菌的抗性和发病等级；其中发病等级和抗性水平划分标准如下：病斑长度≤5.0cm，1级，高抗；5.0cm<病斑长度≤10.0cm，2级，抗病；10.0cm<病斑长度<15.0cm，3级，感病；病斑长度≥15.0cm，4级，高感。本专利技术所述方法利用甘蔗离体叶片可以快速、准确鉴定材料的抗病性，具有操作简单，可控性好，效率高等特点，能够保证病菌接种和侵染的持续性、发病环境的一致性和可控性，病原菌侵染1d就有症状，是一种简便、高效的接种鉴定方法。而且该方法在可控环境条件下进行，保证病原菌接种及侵染条件的持续性、稳定性和统一性，减少环境条件所导致的误差，较传统方法准确性高；接种鉴定结果稳定，重复性好；方法简便，周期短(侵染1d就有病症)，接种效率高，可对单株进行重复鉴定，适合对材料进行规模化接种鉴定。本专利技术对8个甘蔗品种进行多次接种鉴定，表现稳定。
[0029]综合对比，本专利技术所述方法较传统方法具有鉴定周期短，操作简便，重复性好等优
点，可节省大量人财物力，实现规模化快速鉴定的目的，对甘蔗细菌性病害抗性鉴定和抗病育种，尤其是白条病抗性鉴定和抗病育种研究工作具有重要意义。
附图说明
[0030]图1为叶片分级(1～4级)标准示意图；
[0031]图2为图1中的1级标准示意图；
[0032]图3为图1中的2级标准示意图；
[0033]图4为图1中的3级标准示意图；
[0034]图5为图1中的4级标准示意图。
具体实施方式
[0035]如无本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甘蔗细菌性病害抗性的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：将甘蔗细菌性病害的病原菌液接种到离体的甘蔗叶片后，对接种所得甘蔗叶片进行培养和抗性鉴定，根据经所述培养后甘蔗叶片上条纹病斑的长度，判断甘蔗对细菌的抗性和发病等级；发病等级和抗性水平划分标准如下：病斑长度≤5.0cm，发病等级为1级，高抗；5.0cm＜病斑长度≤10.0cm，发病等级为2级，抗病；10.0cm＜病斑长度＜15.0cm，发病等级为3级，感病；病斑长度≥15.0cm，发病等级为4级，高感。2.根据权利要求1所述鉴定方法，其特征在于，所述接种的时间为24h，温度为28℃；所述培养的温度为28℃，时间优选为10d。3.根据权利要求1所述鉴定方法，其特征在于，所述病原菌液的制备方法，包括以下步骤：(1)将甘蔗细菌性病害的病原菌置于XAL液体培养基中活化培养，得活化菌液；(2)将活化菌液置于XAS固体培养基中培养，得甘蔗细菌性病害的病原菌单菌落；(3)挑取病原菌单菌落，接种到XAS固体培养基中培养，得纯化细菌；(4)将纯化细菌的单菌落置于XAL液体培养基中培养，用XAL液体培养基将其稀释，得所述病原菌液。4.根据权利要求3所述鉴定方法，其特征在于，所述XAL液体培养基包括以下浓度的组分：10g/L的蔗糖、5g/L的细菌级蛋白胨、5g/L的酵母提取物、0.5g/L的磷酸二氢钾、0....

【专利技术属性】
技术研发人员：孔春艳，陆鑫，毛钧，刘新龙，林秀琴，田春艳，李纯佳，徐超华，李旭娟，刘洪博，
申请(专利权)人：云南省农业科学院甘蔗研究所，
类型：发明
国别省市：