一种间充质干细胞外泌体的制备方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学技术领域，提供了一种间充质干细胞外泌体的制备方法：获得培养间充质干细胞的培养基，然后经过孔径为30kDa的切向流过滤系统进行浓缩，获得浓缩液；将浓缩液以差速离心进行纯化获得间充质干细胞外泌体。本发明专利技术还提供了一种上述方法获得的外泌体及其制剂。所述制剂可以为冻干粉或含有药学上可接受成分的液体制剂。该外泌体或制剂可应用于多种疾病的治疗，如组织损伤、神经变性疾病、组织纤维化、糖尿病等。本发明专利技术将中空纤维切向流过滤法和差速离心法相结合，在保证外泌体产量的同时，提高了外泌体的纯度。提高了外泌体的纯度。提高了外泌体的纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞外泌体的制备方法


[0001]本专利技术属于细胞生物学领域，涉及一种间充质干细胞外泌体的浓缩和纯化方法。

技术介绍

[0002]细胞外囊泡(extracellular vesicles，TVs)是由细胞分泌的具有磷脂双分子层结构的囊泡，能够通过其携带的生物大分子调节受体细胞的生物学特性，参与细胞的生理学和病理生理学过程。细胞外囊泡根据其发生途径不同可以分为外泌体、核外颗粒体、凋亡小体和癌小体。外泌体(exosome,EXO)是一类直径30
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150nm的微小囊泡，可存在于细胞培养上清液、血浆、血清、唾液、尿液、羊水和恶性腹水以及其它生物体液中。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，其主要通过细胞内吞作用形成，质膜内陷，将一些细胞外成分和细胞膜蛋白包裹在一起，形成早期内涵体(ESEs)。ESEs可以与其他细胞器发生物质交换，或者不同ESEs之间融合形成晚期内涵体(LSEs)，进一步形成细胞内多膜体(MVB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）获得培养间充质干细胞的培养基，然后经过孔径为30kDa的切向流过滤系统进行浓缩，获得浓缩液；（2）将浓缩液以差速离心进行纯化获得间充质干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述间充质干细胞来源不限，包括但不限于脐血、脐带、胚胎、骨髓、脂肪。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述培养基为无血清培养基；优选的，培养基为添加5% UltraGRO
TM
细胞营养添加剂的达优
®
MSC
‑
BM基础培养基。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述上清液为培养第3代和/或第4代间充质干细胞获得。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩倍数为20倍
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100倍；所述切向流过滤系统的参数设置为：流量Feed为400
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600mL/min，Pf为12
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14Psi。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述差速离心的方法如下：（i）将浓缩液1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧慧，谭毅，孔群芳，
申请(专利权)人：银丰生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：