检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法制造技术

本发明专利技术属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法。本发明专利技术方法是将待测样品和HRP酶标记物置于微孔板内培育后进行固液相分离，使酶标记物结合部分和游离部分分离，向酶标记物结合部分加入显色底物，发生酶催化显色反应，再通过紫外吸收光谱测定样品中癌胚抗原含量。本发明专利技术方法具有检测灵敏度高、选择性好、操作简单等优点。操作简单等优点。操作简单等优点。

【技术实现步骤摘要】
检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法


[0001]本专利技术属于生物医学检测
，具体涉及一种检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法。

技术介绍

[0002]癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)是一种具有人类胚胎抗原特异决定簇的癌胚抗原，是重要的肿瘤相关抗原，早期胎儿中由内胚层衍生而来，由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝细胞所合成。1965年，Gold和Freedman首先从胎儿及结肠癌组织中发现，故将其称为癌胚抗原。CEA的编码基因位于19号染色体，是一种分子量为22KD的多糖蛋白复合物，45％为蛋白质。
[0003]CEA属于非器官特异性肿瘤相关抗原，主要存在于直、结肠癌组织及胎儿肠粘膜内，分泌CEA的肿瘤大多位于空腔脏器，如胃肠道、呼吸道、泌尿道等。正常情况下，CEA经胃肠道代谢，而由肿瘤细胞分泌产生的CEA进入局部体液及血液和淋巴循环中，因此在上述癌症的血清及胸、腹水、消化液内可出现CEA异常增高。
[0004]CEA是一种广谱肿瘤标志物，常与其他肿瘤标志物结合检测。血清癌胚抗原(CEA)的正常值为0～5μg/L。血清癌胚抗原是个广谱性的肿瘤标志物，在多种肿瘤中都可以表达肿瘤患者的癌胚抗原中等水平浓度为5.5～30μg/L。在临床上，当CEA大于60μg/L时，可见于结肠癌、直肠癌、胃癌和肺癌。原发性结肠直肠癌在早期未转移时，CEA阳性率为45％～80％左右，已转移的患者其CEA的浓度和阳性检出率均升高。CEA的测定可作为观察疗效的依据之一。CEA值升高，表明有病变残存或进展。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者，其血清CEA量会明显升高，大多显示为肿瘤浸润，其中约70％为转移性癌。
[0005]目前，国内癌胚抗原CEA临床检测主要以国外进口试剂和免疫组化试剂为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。具有自主知识产权的国产癌胚抗原CEA免疫化学发光检测试剂盒目前还较少，检测灵敏度较低、线性窄、特异性较差。
[0006]免疫分析作为生物分析的重要方法依赖于抗原抗体的特异性结合。发展至今，有多种技术被应用于免疫分析，比如：电化学技术、表面增强拉曼技术、荧光技术、电化学发光技术等。其中酶联免疫吸附法(ELISA)应用较为广泛。酶联免疫吸附法(ELISA)是利用抗原抗体特异性结合，其检测原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。现有技术中，酶联免疫吸附法具有回收率高、操作简单等优点，但是检测灵敏度有待进一步提高。

技术实现思路

[0007]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法，具有检测灵敏度高、选择性好、操作简单等优点。
[0008]本专利技术的检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法，按照以下步骤进行：
[0009](1)将待测样品和HRP酶标记物置于微孔板内培育；
[0010](2)固液相分离，使酶标记物结合部分和游离部分分离；
[0011](3)向酶标记物结合部分加入显色底物，发生酶催化显色反应，所述显色底物包括过氧化氢溶液、含有氯金酸和纳米金颗粒的MES缓冲溶液；
[0012](4)通过紫外吸收光谱测定样品中癌胚抗原含量。
[0013]其中，所述的显色底物中过氧化氢溶液浓度为40
‑
80μmol/L。
[0014]进一步地，显色底物中过氧化氢溶液浓度为60μmol/L。
[0015]所述的MES缓冲溶液中氯金酸的浓度为100μmmol/L。
[0016]所述的MES缓冲溶液中纳米金颗粒的加量为每10mL缓冲液加100μL。
[0017]所述的酶催化显色反应的反应时间为15
‑
30min。
[0018]进一步地，酶催化显色反应的反应时间为20min。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的特点和有益效果是：
[0020]本专利技术的提供的检测血清中癌症抗原量的等离子体共振酶联免疫分析法，显色底物包括过氧化氢溶液、含有氯金酸和纳米金颗粒的MES缓冲溶液，H2O2在MES溶液中能够将氯金酸还原成单质金并附着在金纳米颗粒表面导致其进一步生长，从而导致金纳米颗粒溶液颜色变深，吸光度增加，而在HRP酶存在下，H2O2被消耗，会抑制金纳米颗粒生长，以此根据吸光度值检测目标物的含量。
[0021]本专利技术的检测方法，检测范围最低可达到0.1ng/mL，检测灵敏度高。
附图说明
[0022]图1是加入不同显色底物的检测结果示意图；
[0023]图2是本专利技术的检测血清中癌症抗原量的等离子体共振酶联免疫分析法的原理示意图；
[0024]图3是金纳米颗粒种子和其在过氧化氢、氯金酸存在的MES溶液生长电镜图及不使用MES缓冲液时过氧化氢氯金酸直接反应生长枝状颗粒的电镜图；
[0025]图4是不同浓度的过氧化氢溶液对检测结果的影响；
[0026]图5是不同浓度的氯金酸对检测结果的影响；
[0027]图6是不同反应时间对检测结果的影响；
[0028]图7是本专利技术的工作曲线图；
[0029]图8是选择性实验测定效果图。
具体实施方式
[0030]为了使本
的人员更好地理解本专利技术实施例中的技术方案，并使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一
步的说明。
[0031]在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应该被视为在本文中具体公开。
[0032]本专利技术实施例所用实验仪器和实验试剂如下：
[0033]表1：实验仪器
[0034][0035]表2：实验试剂
[0036][0037][0038]实施例1
[0039]本实施例的检测血清中癌胚抗原量的等离子体共振酶联免疫分析法，包括如下步骤：
[0040](1)将样品和HRP酶标记物置于微孔板内培育；
[0041]具体的，从冰箱中取出试剂盒，室温平衡20min，从铝箔袋中取出要用的微孔板，剩余的微孔板放入密封袋放回冰箱中；向微孔板本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法，其特征在于按照以下步骤进行：(1)将待测样品和HRP酶标记物置于微孔板内培育；(2)固液相分离，使酶标记物结合部分和游离部分分离；(3)向酶标记物结合部分加入显色底物，发生酶催化显色反应，所述显色底物包括过氧化氢溶液、含有氯金酸和纳米金颗粒的MES缓冲溶液；(4)通过紫外吸收光谱测定样品中癌胚抗原含量。2.如权利要求1所述的一种检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法，其特征在于所述的显色底物中过氧化氢溶液浓度为40
‑
80μmol/L。3.如权利要求2所述的一种检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法，其特征在于显色底物中过氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：许东，李乐，邓圣旺，陈轶，
申请(专利权)人：湖南智享未来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：