一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，采用pH区带逆流色谱对含有丹酚酸B和紫草酸的样品进行分离纯化；pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。本发明专利技术提供的方法能够同时获得丹酚酸B与紫草酸，纯度均在95％以上。均在95％以上。均在95％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法


[0001]本专利技术涉及一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]滇丹参(Salvia yunnanensis Radix)为唇形科植物云南鼠尾草(Salvia yunnanensis C.H.Wright)的干燥根，又称紫丹参，在云南、贵州地区有悠久的药用历史，始载于明代《滇南本草》中。滇丹参的活性作用与丹参(Salvia miltiorrhizaBge.)相似，其生物活性主要是对循环系统的影响，如改善微循环和血液循环功能、提升心脏冠脉血通量并修复心脏功能、降血脂、预防动脉粥样硬化，另外还有肝脏保护、治疗胃溃疡、镇痛、抗氧化、抗菌抗炎、抗肿瘤等。另有研究表明，滇丹参有显著的抑制血小板凝集的作用，且抑制效果明显优于丹参。滇丹参中的酚酸类化合物主要起到抗炎、抗氧化、抗血栓以及心血管保护的作用，以丹酚酸A～K为代表，其中丹酚酸B含量最高。然而，专利技术人研究发现，丹酚酸B与紫草酸的结构较为类似，采用普通色谱法难以同时获得高纯度的丹酚酸B与紫草酸。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，采用该方法能够同时获得丹酚酸B与紫草酸，纯度均在95％以上。
[0005]pH区带逆流色谱是一种液
‑
>液色谱技术，根据化合物的pKa和极性的差异实现成分的分离，该技术具有分离效率高、重现性好、进样量大等优点。本专利技术采用首先以各种溶剂体系(例如石油醚
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乙酸乙酯
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甲醇
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水、乙酸乙酯
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甲醇
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水、乙酸乙酯
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正丁醇
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水、乙酸乙酯
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水、氯仿
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甲醇
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水)进行尝试，但是难以实现丹酚酸B和紫草酸的分离提取，当采用叔丁基甲醚
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乙腈
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水(4:1:5,v/v)作为溶剂系统，结果发现该溶剂系统可以实现丹酚酸B与紫草酸的分离提取，但是分离提取时间较长，仅洗脱丹酚酸B就需要9h，由于分离提取时间较长，造成pH区带逆流色谱分离提取丹酚酸B和紫草酸困难。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0007]一方面，一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，采用pH区带逆流色谱对含有丹酚酸B和紫草酸的样品进行分离纯化；pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。
[0008]本专利技术经过研究发现以叔丁基甲醚
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乙腈
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水(4:1:5,v/v/v)作为溶剂系统时，样品在乙腈中的溶解度比在水和叔丁基甲醚中的溶解度都要好，而乙腈对叔丁基甲醚的亲和度更好，导致样品保留时间较长。因而本专利技术重新调整溶剂系统，经过试验发现，采用该溶剂系统能够使得丹酚酸B和紫草酸在13h即可完成分离，大大降低了丹酚酸B和紫草酸的分
离时间。
[0009]同时，经过进一步研究发现，固定相的酸浓度和流动相的碱浓度也能够降低丹酚酸B和紫草酸的分离时间，当固定相中的酸浓度4.5～5.5mM、流动相中的碱浓度为59～61mM时，丹酚酸B和紫草酸的分离时间能够缩短至9h。
[0010]另一方面，一种上述方法在提取滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的应用。
[0011]由于滇丹参中的丹酚酸B含量较高，且存在紫草酸，采用上述方法用于滇丹参的提取，能够有效将滇丹参中的丹酚酸B和紫草酸同时提取出来。
[0012]第三方面，一种滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的提取方法，步骤如下：
[0013](1)从滇丹参提取获得滇丹参总酚酸提取物；
[0014](2)采用pH区带逆流色谱滇丹参总酚酸提取物进行分离纯化获得含有丹酚酸B和紫草酸的馏分；
[0015](3)采用pH区带逆流色谱对将含有丹酚酸B和紫草酸的馏分进行分离纯化；
[0016]其中，步骤(3)中pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。
[0017]本专利技术在对滇丹参中酚酸类化合物提取时，发现采用一次pH区带逆流色谱难以对滇丹参中的丹酚酸B和紫草酸分离，因而本专利技术在一次pH区带逆流色谱分离纯化的基础上再进行一次pH区带逆流色谱分离纯化，而经过多种溶剂体系的选择发现，仅有叔丁基甲醚
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乙腈
–
水(4:1:5,v/v/v)溶剂体系能够实现对丹酚酸B和紫草酸的分离，但是分离时间极长，经过试验发现，采用叔丁基甲醚和水作为溶剂体系不仅能够完全分离丹酚酸B和紫草酸，而且分离时间大大缩短。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]1.本专利技术采用叔丁基甲醚和水作为pH区带逆流色谱的溶剂系统，不仅能够将丹酚酸B和紫草酸完全分离，而且能够使丹酚酸B和紫草酸的分离速率加快，降低丹酚酸B和紫草酸的分离时间。
[0020]2.本专利技术采用pH区带逆流色谱分离丹酚酸B和紫草酸，不仅能够滇丹参中提取出大量的丹酚酸B和紫草酸，而且获得的丹酚酸B和紫草酸的纯度较高，可达95％以上。
附图说明
[0021]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0022]图1为本专利技术实施例中滇丹参总酚酸提取物与经pH
‑
ZRCCC分离得到的纯组分的高效液相色谱(HPLC)分析图；
[0023]图2为本专利技术实施例中pH
‑
ZRCCC的分离富集图；
[0024]图3为本专利技术实施例中pH
‑
ZRCCC的分离图。
具体实施方式
[0025]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常
理解的相同含义。
[0026]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0027]丹酚酸B的化学结构为
[0028]紫草酸的化学结构为
[0029]鉴于pH区带逆流色本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效制备丹酚酸B和紫草酸的方法，其特征是，采用pH区带逆流色谱对含有丹酚酸B和紫草酸的样品进行分离纯化；pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。2.如权利要求1所述的方法，其特征是，固定相中的酸浓度4.5～5.5mM，流动相中的碱浓度为59～61mM。3.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述酸为三氟乙酸，所述碱为氨水。4.一种权利要求1～3任一所述的方法在提取滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的应用。5.一种滇丹参中丹酚酸B和紫草酸的提取方法，其特征是，步骤如下：(1)从滇丹参提取获得滇丹参总酚酸提取物；(2)采用pH区带逆流色谱滇丹参总酚酸提取物进行分离纯化获得含有丹酚酸B和紫草酸的馏分；(3)采用pH区带逆流色谱对将含有丹酚酸B和紫草酸的馏分进行分离纯化；其中，步骤(3)中pH区带逆流色谱的溶剂系统由叔丁基甲醚、水组成，叔丁基甲醚和水的体积比为1:0.9～1.1，溶剂系统的上相溶液作为固定相，溶剂系统的下相溶液作为流动相，固定相中添加酸，流动相中添加碱。6.如权利要求5所述的提取方法，其特征是，步骤(3)中，固定相中的酸浓度4.5～5.5mM，流动相中的碱浓度为59～61mM；或，步骤(3)中，固定相中的酸浓度4.5～5.5mM，流动相中的碱浓度为59～61mM；或，步骤(3)中，所述酸为三氟乙酸，所述碱为氨水。7.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：张进杰，王岱杰，孙轩，邹祖全，杨文鸽，徐大伦，崔莉，赵恒强，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：