一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术提供了一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒及提取方法。所述试剂盒包括用于裂解细菌的裂解试剂组和用于提取质粒DNA的提取试剂组；所述提取试剂组由磁珠结合液、洗涤液、洗脱液组成。本发明专利技术提供的基于该试剂盒实现质粒DNA快速提取方法中，通过选用表面修饰有硅羟基或硅羧基的磁珠、0.15～0.45M的乙酸钠、1～3wt％的二硫苏糖醇和3～5M的异硫氰酸胍的混合液作为磁珠结合液复合体系，极大增强了质粒DNA和磁珠的结合能力，使得提取效率提高，提取速度加快，磁珠对DNA的吸附过程只需要1分钟，且提取出的DNA纯度高、片段完整；同时试剂均无毒性，对环境污染小，可用于替代市面上大部分同类产品。上大部分同类产品。上大部分同类产品。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]现有技术中，细菌质粒DNA的提取方法一般包括细菌裂解、DNA聚集沉淀、除杂、DNA纯化分离等步骤。传统提取方法主要包含柱式法和CTAB裂解法，这些方法操作繁琐，耗时较长，不利于大量提取，并且操作过程中可能会使用氯仿、苯酚等有机溶剂，污染较大。
[0003]磁珠法细菌质粒DNA提取试剂盒利用表面修饰后的磁珠和DNA分子的特异性吸附，采用磁性纳米分离技术，具有方便和重复性好的优点。但是现今报道的磁珠细菌质粒DNA提取法存在着磁珠对DNA的吸附不充分，导致所需提取时间长的问题。因此，有必要开发提取速度快、提取效率高的细菌质粒DNA高通量提取方法。
[0004]申请号为CN202110119628.3的专利技术专利公开了一种磁珠法提取质粒DNA的方法及提取质粒DNA的试剂盒。该试剂盒包括磁性分离介质和至少一种质粒提取试剂，其中所述磁性分离介质为粒径为50～1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于裂解细菌的裂解试剂组和用于提取质粒DNA的提取试剂组；所述提取试剂组由磁珠结合液、洗涤液、洗脱液组成；所述磁珠结合液由乙酸钠、二硫苏糖醇、异硫氰酸胍和磁珠混悬液组成；所述磁珠结合液中，乙酸钠浓度为0.15～0.45M，二硫苏糖醇含量为1～3wt％，异硫氰酸胍浓度为3～5M。2.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠结合液中，乙酸钠浓度为0.2M，二硫苏糖醇含量为1wt％，异硫氰酸胍浓度为3M。3.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠混悬液中的磁珠表面修饰有硅羟基或硅羧基。4.根据权利要求3所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠的粒径为0.5～1μm。5.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于：在所述磁珠结合液中，磁珠混悬液为磁珠与异丙醇按照质量比1：(5～20)混合配置而成；所述磁珠结合液的pH值为7.5～8.5。6.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述裂解试剂组由菌体重悬液、裂解液、中和液组成；菌体重悬液为包含10～20mM乙二胺四乙酸和25～35mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的水溶液，pH值为7.0～8.0。7.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述裂解液为包含0.2～0.4M氢氧化钠和质量分数1～3％十二烷基硫酸钠的水溶液；所述中和液为包含3～5M乙酸钾和2～4M乙酸的水溶液，pH值为4.0～6.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：王栋，钟亚平，鲁振坦，
申请(专利权)人：武汉纺织大学，
类型：发明
国别省市：