一种游离DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种游离DNA的提取方法。所述提取方法包括：将待处理样品、裂解液和磁珠混合进行裂解处理，获得裂解后的样品，其中所述裂解液包括异硫氰酸胍、聚氧乙烯醚Brij58、NaAc

【技术实现步骤摘要】
一种游离DNA的提取方法


[0001]本专利技术属于提取分离
，具体涉及一种游离DNA的提取方法。

技术介绍

[0002]Mandel等人在1948年首次报道了血浆中游离DNA(cell free DNA，cfDNA)的存在，它是一种胞外DNA，主要是由单链或双链DNA以及单链与双链DNA的混合物组成。健康人和肿瘤患者外周血中均存在cfDNA，而肿瘤患者外周血中cfDNA的含量约为健康人的10倍以上。临床研究表明，cfDNA能有效反映患者整体的肿瘤负荷、恶性程度、转移能力以及实时的基因突变信息，与肿瘤组织的基因信息呈一定相关性。通过对血浆cfDNA测序检测肿瘤相关的基因拷贝数变化、甲基化变化、核苷酸突变变化、染色体重排变化等，可以用于临床诊断、用药指导和检测肿瘤发生情况等等。因此，提取高质量的cfDNA是对其进行精准分析的关键，提取方法的灵敏度、特异性也将直接关系到后续实验的成败。
[0003]核酸提取技术经历了从第1代化学法，到第2代吸附柱法，以及近年来发展起来的第3代磁珠法，其提取技术和效率不断地改进优化。目前核酸分离纯化需要四个重要的步骤：组织或细胞的破碎和裂解，核蛋白复合体的变性，核酸酶的灭活以及污染物的去除。如何提供一种简单、快速、高效分离cfDNA的方法是一个值得研究的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的在于提供一种，以克服现有技术的不足。
[0005]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：
[0006]本专利技术实施例提供了一种游离DNA的提取方法，其包括：
[0007](1)将待处理样品、裂解液和磁珠混合进行裂解处理，获得裂解后的样品，其中所述裂解液包括异硫氰酸胍、聚氧乙烯醚Brij58、NaAc
‑
HAc缓冲液、异丙醇及水；
[0008](2)采用洗涤液、乙醇溶液对步骤(1)所获裂解后的样品进行洗涤处理，获得洗涤后的样品，其中所述洗涤液包括异硫氰酸胍及Tris
‑
HCl缓冲液；
[0009](3)将步骤(2)所获洗涤后的样品与洗脱液混合进行洗脱处理，获得游离DNA，其中所述洗脱液包括TE缓冲液。
[0010]进一步的，所述TE缓冲液的pH值为10。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过裂解、洗涤、洗脱3个步骤即可提取游离DNA，方法更为高效便捷，同时本专利技术中的裂解液既能很好的将蛋白质破坏，又形成了高盐环境，使得游离DNA与磁珠更好地结合。
附图说明
[0012]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，
还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0013]图1是本专利技术实施例1制备的游离DNA的分子量测定的结果图。
具体实施方式
[0014]鉴于现有技术的缺陷，本案专利技术人经长期研究和大量实践，得以提出本专利技术的技术方案，下面将对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0015]本专利技术实施例的一个方面提供了一种游离DNA的提取方法，其包括：
[0016](1)将待处理样品、裂解液和磁珠混合进行裂解处理，获得裂解后的样品，其中所述裂解液包括异硫氰酸胍、聚氧乙烯醚Brij58、NaAc
‑
HAc缓冲液、异丙醇及水；
[0017](2)采用洗涤液、乙醇溶液对步骤(1)所获裂解后的样品进行洗涤处理，获得洗涤后的样品，其中所述洗涤液包括异硫氰酸胍及Tris
‑
HCl缓冲液；
[0018](3)将步骤(2)所获洗涤后的样品与洗脱液混合进行洗脱处理，获得游离DNA，其中所述洗脱液包括TE缓冲液。
[0019]在一些较为具体的实施方案中，所述样品、裂解液与磁珠的体积比为100～200∶150～250∶0.5～3。
[0020]进一步的，包含所述磁珠的溶液中磁珠的浓度为10～100mg/mL。
[0021]进一步的，所述提取方法还包括：将步骤(1)所获裂解后的样品于转速为1000～3000rpm的条件下离心处理1～2min，之后在磁场作用下进行分离处理。
[0022]在一些较为具体的实施方案中，所述裂解液的制备方法包括：将异硫氰酸胍、聚氧乙烯醚Brij58与NaAc
‑
HAc缓冲液混合，之后加入水和异丙醇，获得所述裂解液。
[0023]进一步的，所述NaAc
‑
HAc缓冲液的浓度为50～200mmol/L。
[0024]进一步的，所述NaAc
‑
HAc缓冲液的pH值为4.0～6.0。
[0025]进一步的，所述裂解液中异丙醇的体积含量为10～50％。
[0026]进一步的，所述NaAc
‑
HAc缓冲液、异丙醇与水的体积比为1～10∶1～10∶1～5。
[0027]在一些较为具体的实施方案中，所述裂解液中异硫氰酸胍的浓度为5.0～6.0mol/L。
[0028]进一步的，所述裂解液中聚氧乙烯醚Brij58的浓度为0.1～1.0mmol/L。
[0029]在一些较为具体的实施方案中，步骤(2)具体包括：
[0030]使用洗涤液对步骤(1)所获裂解后的样品进行洗涤处理，之后在磁场作用下进行分离处理；
[0031]以及，使用乙醇溶液对分离处理所获混合液进行洗涤处理，之后在磁场作用下进行分离处理，获得所述洗涤后的样品。
[0032]在一些较为具体的实施方案中，所述洗涤液中异硫氰酸胍的浓度为5.0～6.0mol/L。
[0033]进一步的，所述Tris
‑
HCl缓冲液的浓度为0.1～1mol/L。
[0034]进一步的，所述Tris
‑
HCl缓冲液的pH值为4.0～8.0。
[0035]进一步的，所述乙醇溶液中乙醇的体积含量为50～80％。
[0036]在一些较为具体的实施方案中，步骤(3)具体包括：将步骤(2)所获洗涤后的样品与洗脱液混合并震荡、离心处理，之后在磁场作用下进行分离，获得所述游离DNA。
[0037]进一步的，所述震荡处理的时间为5～10min。
[0038]在一些较为具体的实施方案中，所述TE缓冲液的pH值为10。
[0039]进一步的，所述TE缓冲液的浓度为40～80mmol/L。
[0040]进一步的，所述样品包括血浆或血清，且不限于此。
[0041]在一些更为具体的实施方案中，所述游离DNA的提取方法具体包括：
[0042]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种游离DNA的提取方法，其特征在于包括：(1)将待处理样品、裂解液和磁珠混合进行裂解处理，获得裂解后的样品，其中所述裂解液包括异硫氰酸胍、聚氧乙烯醚Brij58、NaAc
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HAc缓冲液、异丙醇及水；(2)采用洗涤液、乙醇溶液对步骤(1)所获裂解后的样品进行洗涤处理，获得洗涤后的样品，其中所述洗涤液包括异硫氰酸胍及Tris
‑
HCl缓冲液；(3)将步骤(2)所获洗涤后的样品与洗脱液混合进行洗脱处理，获得游离DNA，其中所述洗脱液包括TE缓冲液。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述样品、裂解液与磁珠的体积比为100～200∶150～250∶0.5～3：和/或，所述提取方法还包括：将步骤(1)所获裂解后的样品于转速为1000～3000rpm的条件下离心处理1～2min，之后在磁场作用下进行分离处理。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述裂解液的制备方法包括：将异硫氰酸胍、聚氧乙烯醚Brij58与NaAc
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HAc缓冲液混合，之后加入水和异丙醇，获得所述裂解液；优选的，所述NaAc
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HAc缓冲液的浓度为50～200mmol/L；优选的，所述NaAc
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HAc缓冲液的pH值为4.0～6.0；优选的，所述裂解液中异丙醇的体积含量为10～50％；优选的，所述NaAc
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【专利技术属性】
技术研发人员：郑建萍，钱四化，
申请(专利权)人：中国科学院宁波材料技术与工程研究所，
类型：发明
国别省市：