一种激光共聚焦显微镜培养皿制造技术

本实用新型专利技术公开了一种激光共聚焦显微镜培养皿，包括聚苯乙烯皿、玻璃盖玻片和有机硅烷环状薄膜，其中聚苯乙烯皿的底面中央开有圆孔；玻璃盖玻片粘贴在聚苯乙烯皿底面外侧，封住所述圆孔；有机硅烷环状薄膜为环带状，位于所述圆孔外缘，通过物理吸附紧贴在玻璃盖玻片的内侧面。本实用新型专利技术与传统激光共聚焦显微镜培养皿相比，改善了激光共聚焦培养皿玻璃边缘液体虹吸问题，减少了免疫荧光样品制作过程中抗体和有机染料的使用量(减少体积损耗约50％)，液体可回收体积增加，极大程度降低了激光共聚焦样品制作的成本，提高了共聚焦小皿的有效成像面积。有效成像面积。有效成像面积。

【技术实现步骤摘要】
一种激光共聚焦显微镜培养皿


[0001]本技术涉及一种培养皿，特别是涉及一种用于激光共聚焦显微镜的培养皿。

技术介绍

[0002]在生物科学领域中，激光共聚焦显微镜是一种不可或缺的研究工具，其高分辨率、高特异性的成像特点为许多具体问题提供了有力证据。
[0003]目前激光共聚焦显微镜样品的制备主要是基于固定细胞的免疫荧光方法。传统的激光共聚焦显微镜培养皿是外圈直径4cm(塑料)，内圈直径2cm(玻璃)的圆形小皿。这种传统的激光共聚焦显微镜培养皿物理构造特殊，其底部成像玻璃和塑料皿粘合接触面之间存在90
°
夹角，由于液体表面张力，使得液体处在两者接触边缘时的张力增加，将玻璃底面上的液体虹吸到玻璃底面以外的区域。这产生了以下问题：
[0004]1、样品在制备过程中有效孵育液体体积减小，且液体形成凹液面，样品中部容易失水干燥，制备过程所需试剂增加。
[0005]2、抗体和染料价格昂贵，孵育体积加大后，制备成本大幅增加。
[0006]3、典型的传统培养皿外圈直径为40毫米，玻璃底内圈直径为20毫米，有效观察面积低，仅有25％。

技术实现思路

[0007]本技术要解决的技术问题是去除普通激光共聚焦显微镜培养皿底面边缘液体虹吸的问题，提供一种新型的激光共聚焦显微镜培养皿。
[0008]本技术的激光共聚焦显微镜培养皿，主要采用在底部玻璃边缘制备疏水材料环的技术构思，有效减少孵育液体与培养皿边缘的接触，避免边缘液体虹吸效应，从而减少免疫荧光样品在制备过程中的液体体积损耗，增加液体可回收体积，减少免疫荧光样品在制备过程中的总体成本损耗。
[0009]本技术采用的技术方案为：一种激光共聚焦显微镜培养皿，其特征在于，包括聚苯乙烯皿、玻璃盖玻片和有机硅烷环状薄膜，其中聚苯乙烯皿的底面中央开有圆孔；玻璃盖玻片粘贴在聚苯乙烯皿底面外侧，封住所述圆孔；有机硅烷环状薄膜为环带状，位于所述圆孔外缘，通过物理吸附紧贴在玻璃盖玻片的内侧面。
[0010]上述激光共聚焦显微镜培养皿中，所述玻璃盖玻片优选为硼硅玻璃盖玻片、蓝宝石玻璃盖玻片。
[0011]上述激光共聚焦显微镜培养皿中，所述有机硅烷环状薄膜优选为聚二甲基硅氧烷(PDMS)环状薄膜、聚乙烯(PE)环状薄膜、聚苯醚(PPO)环状薄膜。
[0012]上述激光共聚焦显微镜培养皿中，所述聚苯乙烯皿的底面直径优选为38～40毫米，中央圆孔直径优选为10～20毫米；所述玻璃盖玻片一般为方形，边长为22～24毫米，厚度为0.13～0.16毫米；所述有机硅烷环状薄膜的环带宽为1～2毫米，厚度为0.4～0.5毫米。
[0013]所述激光共聚焦显微镜培养皿可以通过下述方法制备：首先将硼硅玻璃盖玻片通
过粘合剂物理粘贴在中央开孔的聚苯乙烯皿底面外侧，待干燥贴紧后，将液态聚二甲基硅氧烷与固化剂混合后灌注进已装备环氧树脂模具的硼硅玻璃盖玻片内侧，所述环氧树脂模具为圆柱体，与硼硅玻璃盖玻片同圆心放置，液态聚二甲基硅氧烷与玻璃圆状边缘内侧紧密贴合且与此圆状边缘同圆心定位。固化后的聚二甲基硅氧烷环状薄膜与盖玻片内侧面形成强的物理吸附关系，两者表面粘附平整且紧密。于培养皿中央加入孵育液体后，由聚二甲基硅氧烷环状薄膜环绕，聚二甲基硅氧烷环状薄膜表面暴露的甲基基团和水分子相互排斥，使得液体形成凸液面，从而不再被虹吸出外部。
[0014]本技术的一个实施例中，所述聚苯乙烯皿的外直径为40毫米，中央圆孔的孔径为20毫米；硼硅玻璃盖玻片为方形，边长24毫米，厚度0.13毫米
‑
0.16毫米；聚二甲基硅氧烷(PDMS)形成的环状薄膜的外圆半径为10毫米，环状薄膜的内圆半径为8毫米，带宽2毫米，厚度固定为1毫米。此环状薄膜的制作依赖于一个环氧树脂的圆柱体实心模具，其作用是占据且压紧培养皿底面的玻璃中间圆形部分，暴露出环状边缘，以便添加聚二甲基硅氧烷(PDMS)和固化剂，随后加热固化形成环状薄膜。环氧树脂的圆柱体实心模具底面半径为8毫米，高2厘米，外表面光滑平整，与玻璃表面无缝隙贴合。
[0015]本技术与传统激光共聚焦显微镜培养皿相比，改善了激光共聚焦培养皿玻璃边缘液体虹吸问题，减少了免疫荧光样品制作过程中抗体和有机染料的使用量(减少体积损耗约50％)，液体可回收体积增加，极大程度降低了激光共聚焦样品制作的成本，提高了共聚焦小皿的有效成像面积。
附图说明
[0016]图1是本技术实施例的激光共聚焦显微镜培养皿的结构示意图，其中1
‑
聚苯乙烯皿，2
‑
硼硅玻璃盖玻片，3
‑
聚二甲基硅氧烷(PDMS)环状薄膜。
具体实施方式
[0017]下面结合附图，通过实施例详细介绍本技术的激光共聚焦显微镜培养皿，但不以任何方式限制本技术的范围。
[0018]如图1所示，本技术的培养皿适用于显微镜成像，其包括聚苯乙烯皿1、硼硅玻璃盖玻片2和聚二甲基硅氧烷(PDMS)环状薄膜3，其中聚苯乙烯皿1的底面直径为40毫米，底面中央开有直径20毫米的圆孔；硼硅玻璃盖玻片2为方形，边长为36毫米，粘贴在聚苯乙烯皿底面外侧，封住所述圆孔；聚二甲基硅氧烷环状薄膜2的环带宽为2毫米，厚度为1毫米，聚二甲基硅氧烷(PDMS)环状薄膜3通过物理吸附在硼硅玻璃盖玻片2的顶面，位于所述圆孔的圆外缘。
[0019]上述培养皿在制备时，首先将硼硅玻璃盖玻2片通过粘合剂物理粘贴在中央开孔的聚苯乙烯皿1底面外侧，待干燥贴紧后，然后将液态聚二甲基硅氧烷(PDMS)固化成环状薄膜。其中聚二甲基硅氧烷环状薄膜3的固化方法为：将聚二甲基硅氧烷(184Silicone Elastomer Base,SYLGARD
TM
)和固化剂(184Silicone Elastomer Curing Agent,SYLGARD
TM
)混合制成准备材料，将圆柱体环氧树脂模具压紧于培养皿玻璃中央，使得环状边缘暴露出来，在暴露出来的环状区域加入上述准备材料，加热固化。
[0020]按照传统方法，在制作共聚焦显微镜样品时，将200微升抗体稀释液滴加在本实用
新型的培养皿中，液体与聚二甲基硅氧烷(PDMS)环状薄膜3边缘能形成有效疏水相互作用，形成凸液面，能有效维持液体不虹吸扩散，高效完成共聚焦显微镜样品的制备。
[0021]与之对比的是，在普通激光共聚焦显微镜培养皿中加入400微升抗体稀释液，明显产生虹吸现象，液体扩散到培养皿外，培养皿中央液体呈凹液面，容易挥发失水，使样品失效。应用本技术后，抗体稀释液的使用体积节省了约50％，进而减少了抗体的浪费。
[0022]本技术结构简单、制作方法容易、使用方便，各科研、企业只需极少的投入便可优化现有工具，提高工作效率，节约重要实验材料。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种激光共聚焦显微镜培养皿，其特征在于，包括聚苯乙烯皿、玻璃盖玻片和有机硅烷环状薄膜，其中聚苯乙烯皿的底面中央开有圆孔；玻璃盖玻片粘贴在聚苯乙烯皿底面外侧，封住所述圆孔；有机硅烷环状薄膜为环带状，位于所述圆孔外缘，通过物理吸附紧贴在玻璃盖玻片的内侧面。2.如权利要求1所述的激光共聚焦显微镜培养皿，其特征在于，所述玻璃盖玻片为硼硅玻璃盖玻片或蓝宝石玻璃盖玻片。3.如权利要求1所述的激光共...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒿慧文，牛佳浩，殷冬宝，孙育杰，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：新型
国别省市：