一种基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法。包括步骤如下：(1)表面活性剂溶液的配制；(2)乙酰胆碱酯酶标准溶液和乙酰胆碱酯酶抑制剂标准溶液的配制；(3)乙酰胆碱酯酶标准曲线的测定；(4)乙酰胆碱酯酶抑制剂标准曲线的测定；(5)待测样品乙酰胆碱酯酶或乙酰胆碱酯酶抑制剂的测定。本发明专利技术基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法，操作过程简单，成本低，检测准确、灵敏度高、乙酰胆碱酯酶定量检测限为0.1mU/mL，乙酰胆碱酯酶抑制剂的定量检测限为1nM。抑制剂的定量检测限为1nM。

【技术实现步骤摘要】
一种基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法


[0001]本专利技术提供了一种基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法，属于检测分析


技术介绍

[0002]乙酰胆碱酯酶(AChE)作为初级胆碱酯酶，在神经系统中负责生物信号传输，主要存在于突触后神经肌肉接头处，尤其是在肌肉和神经中。它可以通过将神经递质乙酰胆碱(ACh)水解成乙酸和胆碱来特异性调节乙酰胆碱水平，从而导致神经元传递的终止和突触之间的信号传导。重要的是，阿尔茨海默病(AD)即所谓的老年痴呆症，其病因主要是由于皮层内的ACh浓度过低。临床上主要是利用乙酰胆碱酯酶抑制剂来治疗AD，因此需要能检测乙酰胆碱酯酶活性抑制率的技术手段。
[0003]传统检测乙酰胆碱酶活性的方法有比色法、荧光法和电化学法等。然而这些方法通常需要标记分子，合成纳米颗粒，昂贵的仪器等复杂的程序。因此，开发简单、方便且低成本的方法对AChE进行实时且无标记的检测非常重要。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法，步骤如下：(1)表面活性剂溶液的配制：将表面活性剂溶解于Tris
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HCl缓冲液中，超声25～35min混合均匀，得到浓度为0.01～1mM的表面活性剂溶液；(2)乙酰胆碱酯酶标准溶液和乙酰胆碱酯酶抑制剂标准溶液的配制：将乙酰胆碱酯酶标准品和乙酰胆碱酯酶抑制剂标准品分别溶解于Tris
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HCl缓冲液中，制得不同浓度的乙酰胆碱酯酶标准溶液和乙酰胆碱酯酶抑制剂标准溶液；(3)乙酰胆碱酯酶标准曲线的测定：分别向步骤(2)制得的不同浓度的乙酰胆碱酯酶标准溶液中加入步骤(1)配制的表面活性剂溶液，在20～60℃下孵育25～55min，得到混合溶液a；然后用悬滴法向混合溶液a中缓慢注射油相，当油相全部悬滴时，开始记录悬滴时间直至油相掉落，根据悬滴时间和对应的乙酰胆碱酯酶标准溶液浓度的对数值，绘制标准曲线a；(4)乙酰胆碱酯酶抑制剂标准曲线的测定：分别向步骤(2)制得的不同浓度的乙酰胆碱酯酶抑制剂标准溶液中加入步骤(2)配制的乙酰胆碱酯酶标准溶液，在20～60℃下孵育25～55min，孵育完成后继续加入步骤(1)配制的表面活性剂溶液，在20～60℃下孵育25～55min，得到混合溶液b；然后用悬滴法向混合溶液b中缓慢注射油相，当油相全部悬滴时，开始记录悬滴时间直至油相掉落，根据悬滴时间和对应的乙酰胆碱酯酶抑制剂标准溶液浓度的对数值，绘制标准曲线b；(5)待测样品乙酰胆碱酯酶的测定：将待测乙酰胆碱酯酶溶解于Tris
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HCl缓冲液中，得到待测样品乙酰胆碱酯酶溶液，按照步骤(3)所述的方法测定体系的悬滴时间，通过测定的悬滴时间对照标准曲线a计算得到待测样品中乙酰胆碱酯酶的含量；待测样品乙酰胆碱酯酶抑制剂的测定：将待测样品乙酰胆碱酯酶抑制剂溶解于Tris
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HCl缓冲液中，按照步骤(4)所述的方法测定体系的悬滴时间，通过测定的悬滴时间对照标准曲线b计算得到待测样品中乙酰胆碱酯酶抑制剂的含量。2.如权利要求1所述的基于悬滴法检测乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十四烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠、十二烷基三甲基溴化钠、十四烷基三甲基溴化钠...

【专利技术属性】
技术研发人员：于丽，李本友，刘杰，陆绍青，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：