一种靶向表达Claudin18.2细胞的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向表达Claudin 18.2(CLDN 18.2)的细胞的嵌合抗原受体。具体地公开了一种氨基酸序列如SEQ ID NO.:14所示的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含：靶向Claudin 18.2的单链抗体、铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域。本发明专利技术的靶向Claudin 18.2的嵌合抗原受体，能够有效并且特异性地靶向表达Claudin 18.2表面抗原的恶性细胞(例如肿瘤细胞)，从而为治疗一些表达Claudin18.2表面抗原的肿瘤提供更高效并且副作用和不良反应更少的方法。应更少的方法。应更少的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向表达Claudin18.2细胞的嵌合抗原受体及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞免疫治疗领域，具体涉及一种靶向表达CLDN 18.2的细胞 的嵌合抗原受体及其应用。

技术介绍

[0002]细胞免疫治疗是一种正在兴起的肿瘤治疗方法，其通过分子生物学技术构 建嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)的表达载体，并将该表达载体 导入到从人体分离的免疫细胞中，使其细胞表面表达CAR后进行扩增培养，将 其回输至人体。表达CAR的免疫细胞能够特异性识别并结合靶细胞，通过释放 特异的免疫因子对其进行杀伤。第一代CAR
‑
T虽然能够介导对肿瘤细胞的杀伤 作用，但是不转导增殖信号和诱导细胞因子产生，并且体内持续作用时间不长， 只能引起短暂的T细胞增殖，因此，抗肿瘤效果甚微；第二代CAR
‑
T通过增加 共刺激分子(例如4
‑
1BB或CD28)的胞内结构域以延长其体内存活时间，促进其 迅速扩增能力，通过构建scFv/4
‑
1BB(或CD28)/CD3
‑
z的CAR
‑
T可以裂解靶细胞， 传递活化信号，产生大量的IFN
‑
γ、IL
‑
2等细胞因子；第二代CAR
‑
T较第一代具 有更好的增强T细胞活化、扩增、抗肿瘤以及促进转基因表达的能力。
[0003]CAR
‑
T在杀伤肿瘤方面具有的主要优势是：第一，由于其抗原识别结合域 能够识别肿瘤抗原，因此针对肿瘤的特异性很高；第二，由于其胞内信号传导 域可以迅速同时开启CAR
‑
T的杀伤和扩增的下游信号，因此肿瘤杀伤效率高， CART细胞能够在体内持续扩增；第三，由于CAR
‑
T不需要通过TCR和MHC分 子相结合的方式开启肿瘤杀伤，因此具有非MHC限制性，可以直接识别肿瘤表 面抗原，因此肿瘤的识别效率高特异性强，同时能够杀伤MHC下调的肿瘤细胞。 基于CAR
‑
T的这些优势，CAR
‑
T在B细胞急性白血病和非霍奇金氏淋巴瘤等血 液肿瘤的治疗上已取得了显著的疗效，已获得了FDA的审批，并且在实体肿瘤 的治疗中已经显示了初步的疗效。
[0004]胃肠道和胰腺肿瘤对于人类生命是很大的威胁，虽然手术治疗、放化疗、 介入治疗等治疗手段对于该类肿瘤有一定疗效，但患者生存率仍无显著改善。 目前，备受关注的CAR
‑
T细胞治疗技术有望成为治疗的突破口。
[0005]由于癌胚抗原Claudin 18.2(CLDN18.2)在正常组织表达的高度特异性及在 多种癌症中被激活表达，因此针对上皮性肿瘤，CLDN18.2成为极具潜力的靶点， CLDN 18.2是一种广谱性肿瘤标志物，可在多种肿瘤中表达。
[0006]因此，本领域亟待开发一种新的有效治疗多种表达CLDN18.2的肿瘤的免疫 治疗方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种靶向表达Claudin 18.2的细胞的嵌合抗原受体 及其在肿瘤治疗中的应用。
[0008]本专利技术的第一方面，提供了一种靶向表达Claudin 18.2的细胞的嵌合抗原 受体，
所述嵌合抗原受体氨基酸序列如SEQ ID NO.:14所示，并且其包含：靶 向CLDN 18.2的单链抗体、铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域，其中所 述的靶向CLDN 18.2的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1所示。
[0009]在另一优选例中，所述的CAR具有如式I所示的结构：
[0010]L
‑
scFv
‑
H
‑
TM
‑
C
‑
CD3ζ
ꢀꢀꢀ
(式I)
[0011]其中，
[0012]L为无或信号肽序列；
[0013]scFv为靶向CLDN 18.2的单链抗体可变区序列；
[0014]H为无或铰链区；
[0015]TM为跨膜结构域；
[0016]C为共刺激信号分子；
[0017]CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；
[0018]各
“‑”
独立地表示连接上述各元件的连接肽或肽键。
[0019]在另一优选例中，所述单链抗体包含如SEQ ID NO.:17所示的抗体重链可变区 和如SEQ ID NO.:18所示的抗体轻链可变区。
[0020]在另一优选例中，所述抗体重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
[0021]如SEQ ID NO.:19所示的CDR1；
[0022]如SEQ ID NO.:20所示的CDR2；
[0023]如SEQ ID NO.:21所示的CDR3。
[0024]在另一优选例中，所述抗体轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
[0025]如SEQ ID NO.:22所示的CDR1
’
；
[0026]如SEQ ID NO.:23所示的CDR2
’
；
[0027]如SEQ ID NO.:24所示的CDR3
’
。
[0028]在另一优选例中，所述的H为选自下组蛋白的铰链区：CD8、CD28、CD137、 或其组合。
[0029]在另一优选例中，所述铰链区为CD8 Hinge，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所 示。
[0030]在另一优选例中，所述的TM为选自下组的蛋白的跨膜区：CD28、CD3 epsilon、 CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、 CD86、CD134、CD137、CD154、或其组合。
[0031]在另一优选例中，所述的跨膜结构域为CD8 TM，其氨基酸序列如SEQ IDNO.:5所示。
[0032]在另一优选例中，所述的C为选自下组的蛋白的共刺激信号分子：OX40、CD2、 CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD134、4
‑
1BB(CD137)、PD1、Dap10、 CDS、ICAM
‑
1、LFA
‑
1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、NKG2D、GITR、TLR2、 或其组合。
[0033]在另一优选例中，所述的细胞内信号结构域由4
‑
1BB和CD3ζ组成，其氨 基酸序列如SEQ ID NO.:6所示。
[0034]在另一优选例中，所述的细胞内信号结构域由CD28和CD3ζ组成或由 4
‑
1BB、CD28和CD3ζ组成。
[0035]在另一优选例中，CD28的氨基酸序列如SEQ ID NO.:8所示。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向表达Claudin 18.2的细胞的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.:14所示，并且所述嵌合抗原受体包含：靶向Claudin 18.2的单链抗体、铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域，其中所述的靶向Claudin 18.2的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1所示。2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述单链抗体包含如SEQ ID NO.:17所示的抗体重链可变区和如SEQ ID NO.:18所示的抗体轻链可变区。3.如权利要求2所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗体重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：如SEQ ID NO.:19所示的CDR1；如SEQ ID NO.:20所示的CDR2；和如SEQ ID NO.:21所示的CDR3。4.如权利要求2所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗体轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：如SEQ ID NO.:22所示的CDR1
’
；如SEQ ID NO.:23所示的CDR2
’
；和如SEQ ID NO.:24所示的CDR3
’
。5.一种编码如权利要求1所述的嵌...

【专利技术属性】
技术研发人员：董坚，孙亚如，杨圣，李文荣，聂紫，
申请(专利权)人：上海莱馥医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：