活化部分凝血活酶时间测定试剂卡及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种活化部分凝血活酶时间测定试剂卡，所述试剂卡包括第一反应区和第二反应区，所述第一反应区和第二反应区分别为将第一反应试剂和第二反应试剂分别均匀涂布于基材表面，干燥后得到；通过采用鞣花酸和白陶土这两种激活剂分别与适宜浓度的羟丙基甲基纤维素、无机盐配制形成两种反应试剂，并涂布在基材表面干燥后制备而成一种用于检测APTT的干式试剂卡，其对肝素敏感性高，检测结果更准确，从而可有效应用于临床肝素治疗评价中，并避免了市售常规冻干粉或液体试剂，由于剂型原因，对保存条件要求高的情况，使用更方便，稳定性强，更利于试剂在实际临床检测中的广泛应用，为实际APTT的检测提供便利。为实际APTT的检测提供便利。

【技术实现步骤摘要】
活化部分凝血活酶时间测定试剂卡及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别是涉及一种活化部分凝血活酶时间测定试剂卡及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]人体凝血途径分为内源性凝血途径和外源性途径，而活化部分凝血酶活时间(APTT)是用于检测人体内源性途径是否正常的一个重要指标，如果部分内源性凝血因子缺乏，就会导致APTT延长。APTT是临床最常用的反应内源性凝血系统凝血活性的敏感筛选试验，其主要的测定原理是：在37℃条件下，以激活剂激活
Ⅻ
，以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板第三因子，在Ca
2+
参与下，观察血浆凝固所需的时间，即为活化部分凝血活酶时间。在内源性凝血因子缺陷和相关抑制物的检测、肝素治疗的监测、DIC的早期诊断及临床检查中有着广泛的用途。不同试剂中激活剂及磷脂种类的不同会导致其对肝素、狼疮抗凝因子等缺乏症的敏感性不同，国内商品试剂凡未标明其对肝素敏感者其结果可信均存在肝素敏感性不良的情况，换言之，普通的APTT试剂盒，可能对用肝素治疗的人群，测试结果不准确，影响判断。
[0003]目前国内APTT试剂大多数为冻干粉制剂，保存条件高，敏感性比较差，测试结果与大型生化分析仪差异比较大。目前国内用的大多为进口产品，价格昂贵。APTT试剂的组分不同会导致肝素对其产生的效果不同，很多小型仪器不可以反应出对肝素浓度的变化。正常全血在没有添加肝素时的APTT正常范围是0
‑
40S之间，肝素在临床上使用的血液浓度在0.2
‑
0.8U/ML之间，目前市面上的APTT试剂质量不同，或者冻干粉的制剂的复溶不同，使得同一患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成监测结果的不一致，不能够灵敏反应血液中的肝素浓度变化，从而失去临床评价肝素治疗效果意义。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术的目的之一在于提出一种活化部分凝血活酶时间测定的干式试剂卡。
[0005]包括如下技术方案：
[0006]一种活化部分凝血活酶时间测定的干式试剂卡，其包括第一反应区和第二反应区，所述第一反应区由第一反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到，所述第二反应区由第二反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到；
[0007]所述第一反应试剂包括0.5w/v％
‑
1.6w/v％白陶土、0.5w/v％
‑
1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.2w/v％
‑
0.8w/v％磷脂、0.05w/v％
‑
0.15w/v％抗氧化剂和0.05w/v％
‑
0.15w/v％无机盐；
[0008]所述第二反应试剂包括0.2w/v％
‑
2.0w/v％鞣花酸、0.5w/v％
‑
1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.6w/v％
‑
1.6w/v％氯化钙、0.05w/v％
‑
0.15w/v％抗氧化剂。
[0009]本专利技术的目的之一还在于提出一种上述干式试剂卡的制备方法。
[0010]包括如下技术方案：
[0011](1)获得上述第一、二反应试剂；
[0012](2)将所述第一反应试剂滴加至基材第一反应区，将所述第二反应试剂滴加至第二反应区；
[0013](3)将基材进行烘烤干燥，即得。
[0014]本专利技术的目的之一还在于提出一种活化部分凝血活酶时间的检测方法。
[0015]包括如下技术方案：
[0016]一种活化部分凝血活酶时间测定方法，其包括如下步骤：
[0017]获取待测血液样本；
[0018]血液样本于上述干式试剂的第一反应区与第一反应试剂反应后，再与第二反应区的第二反应试剂反应；
[0019]检测血液样本凝固所需的时间。
[0020]本专利技术的专利技术人发现现有的APTT试剂不能灵敏地反应出样本中肝素浓度变化，对用肝素治疗的病人测试的值偏差比较大，并且冻干粉试剂在使用前的复溶步骤，对检测结果的一致性及稳定性均会产生影响，进而对APTT试剂的研制进行大量研究，发现通过改变常规APTT检测试剂的剂型，将液态改进为固态，形成干式试剂卡，采用鞣花酸和白陶土这两种激活剂分别与适宜浓度的羟丙基甲基纤维素、无机盐(Mn3O4、Mn5O8)配制成两种反应试剂，并涂布在基材表面干燥后制备而成一种用于检测APTT的干式试剂卡，这种干式试剂卡基于光化学检测原理，对样本中肝素敏感性高，检测结果更准确，从而可有效应用于临床肝素治疗评价中，并避免了市售常规冻干粉或液体试剂，由于剂型原因而具有严苛保存条件限制的情况。而且使用更方便，稳定性强，更利于在实际临床检测中的广泛应用，为实际APTT的检测提供便利。
附图说明
[0021]图1为实施例1中试剂卡的制备流程图。
[0022]图2为实施例1中试剂卡的基板结构图。其中标记说明为：10、测试卡；100、基板；110、加样区(也为第一反应区)；120、第二反应区；130、固定槽；200、固定座；210、让位槽；220、卡槽；300、转动件；310、转盘；320、转轴；330、钩爪；400、手柄。
[0023]图3为实施例2中采用不同稳定剂的配方配制的APTT试剂点胶后的第二反应区对比图，其中图3A为羟丙基甲基纤维素，图3B为明胶，图3C为BSA，图3D为甘露醇，图3E为海藻糖。
具体实施方式
[0024]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
[0025]除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实
施例的目的，不用于限制本专利技术。本专利技术所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0026]在整个说明书和权利要求书中，以下术语具有与本文明确相关的含义，除非上下文另有明确规定。在本专利技术中使用的短语“在一个实施方案中”不一定指代相同的实施方案，尽管其可能是。此外，在本专利技术中使用的短语“在另一实施方案中”不一定指代不同的实施方案，尽管其可能是。因此，如下所述，可以容易地组合本专利技术的各个实施方案，而不脱离本专利技术的范围或精神。
[0027]此外，如本专利技术所使用的，术语“或”是包含性的“或”符号，并且等同于术语“和/或”，除非上下文另有明确规定。术语“基于”不是排他性的，并且允许基于未描述的其他因素，除非上下文另有明确规定。此外，在整个说明书中，“一个”、“一种”和“所述/该”的含义包括复数指示物。“在......中”中的含义包括“在......中”和“在......本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种活化部分凝血活酶时间测定的干式试剂卡，其特征在于，所述干式试剂卡包括第一反应区和第二反应区，所述第一反应区由第一反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到，所述第二反应区由第二反应试剂均匀涂布于基材表面干燥后得到；所述第一反应试剂包括0.5w/v％
‑
1.6w/v％白陶土、0.5w/v％
‑
1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.2w/v％
‑
0.8w/v％磷脂、0.05w/v％
‑
0.15w/v％抗氧化剂和0.05w/v％
‑
0.15w/v％无机盐；所述第二反应试剂包括0.2w/v％
‑
2.0w/v％鞣花酸、0.5w/v％
‑
1.6w/v％羟丙基甲基纤维素、0.6w/v％
‑
1.6w/v％氯化钙、0.05w/v％
‑
0.15w/v％抗氧化剂。2.根据权利要求1所述干式试剂卡，其特征在于，所述无机盐选自Mn3O4或Mn5O8。3.根据权利要求1所述干式试剂卡，其特征在于，所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚或没食子酸丙酯。4.根据权利要求1所述干式试剂卡，其特征在于，所述第一反应试剂还包括0.05w/v％
‑
2.0w/v％增稠剂；所述增稠剂选自甘露醇、环糊精、黄原胶中的至少一种。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述干式试剂卡，其特征在于，所述第一反应试剂包括：0.6w/v％
‑
1.5w/v％白陶土、0.6w/v％
‑
1.5w/v％羟丙基甲基纤维素、0.4w/v％
‑
0.6w/v％磷脂、0.05w/v％
‑
0.15w/v％丁基羟基茴香醚、0.5w/v％
‑
1.5w/v％甘露醇、0.1w/v％
‑
0.3w/v％环糊精、0.05w/v％
‑
0.15w/v％黄原胶和0.05w/v％
‑
0.15w/v％Mn3O4。6.根据权利要求5所述干式试剂卡，其特征在于，所述第一反应试剂包括：0.7w/v％
‑
1.3w/v％白陶土、0.7w/v％
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1.2w/v％羟丙基甲基纤维素、0.45w/v％
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0.55w/v％磷脂、0.07w/v％
‑
0.13w/v％丁基羟基茴香醚、0.6w/v％
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴岸峰，景振辉，赖远强，孔繁格，朱海科，杨斌，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：