一种靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用，属于生物技术领域；氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示；同时本发明专利技术还提供一种靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体的制备方法，通过分离免疫条纹斑竹鲨外周血淋巴细胞，提取总RNA，再反转录为cDNA；以cDNA为模板，扩增条纹斑竹鲨vNAR片段，与载体连接构建噬菌体文库；从噬菌体文库中淘选识别新冠病毒N蛋白的阳性克隆；构建表达载体，诱导表达新冠病毒N蛋白单域抗体，最终获得靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体。靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体。靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体。

【技术实现步骤摘要】
IgNAR(Ig New antigen Receptor)，每条链由1个可变区(vNAR)和5个恒定区 (cNAR)构成。将IgNAR的可变区vNAR重组表达，即可获得具有完整功能的抗体分子片段，被称为鲨鱼单域抗体。公开号为CN106831981A的中国专利公开了一种单域抗体蛋白骨架及其制备方法，具体公开了来源于条纹斑竹鲨的单域抗体，其单域抗体蛋白骨架序列组成依次为FR1，CDR1，FR2，CDR3和FR3 区，其中FR1、FR2、FR3区为固定氨基酸序列，CDR1和CDR3区为抗体互补决定区，其氨基酸序列可变，CDR1和CDR3区决定与不同的抗原结合，证明了鲨鱼单域抗体具有抗原结合区，能够实现抗原抗体结合，用于诊断和治疗；此外，公开号为WO2010033913A1的专利公开了一种抗体，模拟物及其用途，具体公开了鲨鱼和骆驼科动物重链抗体及其类似物可用于诊断，治疗以及同时诊断和治疗。
[0007]因此，利用鲨鱼单域抗体检测新冠病毒抗原蛋白并制成抗体检测试剂盒是完全可行且具有较高临床应用价值。

技术实现思路

[0008]为解决现有技术中需要进一步提高高灵敏度检测新本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体，其特征在于：所述鲨鱼单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。2.一种靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体，其特征在于：所述鲨鱼单域抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。3.一种如权利要求1或2的靶向新冠病毒N蛋白的鲨鱼单域抗体的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)分离免疫条纹斑竹鲨外周血淋巴细胞，提取总RNA，再反转录为cDNA；(2)以cDNA为模板，扩增条纹斑竹鲨vNAR片段，与载体连接构建噬菌体文库：采用巢式PCR，经过两轮PCR扩增，得到条纹斑竹鲨单域抗体vNAR基因；将vNAR基因片段与载体进行酶接后构建噬菌体文库；(3)从噬菌体文库中淘选识别新冠病毒N蛋白的阳性克隆：通过对噬菌体文库进行扩大培养、富集、淘筛和鉴定，将所有OD450值大于1的阳性克隆进行测序分析，排除重复后，最终获得2株单域抗体，命名为鲨鱼单域抗体的N05抗体和N38抗体；通过测序，获得N05抗体和N38抗体的vNAR基因序列；(4)构建表达载体，诱导表达新冠病毒N蛋白单域抗体：将N05抗体和N38抗体的vNAR基因序列克隆到PET30a上，获得N05抗体和N38抗体的表达载体，将表达载体转化至E.coliBL21菌株，扩大培养后，加入IPTG诱导表达，破菌收集纯化重组抗体蛋白。4.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈锦霖，潘长坤，陈建明，程云英，
申请(专利权)人：闽江学院，
类型：发明
国别省市：