一种针头取样-微萃取-催化显色检测生物胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种针头取样

【技术实现步骤摘要】
一种针头取样
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微萃取
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催化显色检测生物胺的方法


[0001]本专利技术属于食品分析
，涉及一种针头取样
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微萃取
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催化显色检测生 物胺的方法，特别是涉及一种基于针头取样法结合液相微萃取和类过氧化物酶催 化显色反应检测肉类样品中生物胺的方法。

技术介绍

[0002]生物胺(BAs)存在于各种富含蛋白质的食物中，比如肉类、奶制品和水产 等，是一类低分子量的含氮化合物，包括腐胺、尸胺、组胺等。食物中的某些蛋 白质可能会分解成游离氨基酸存在于食物中。如果食物被含有脱羧酶的细菌污染， 这些游离氨基酸会进行脱羧反应释放出BAs。食品中的BA含量与其腐败情况和 质量安全密切相关，因此BAs被认为是肉类和肉制品在储存过程中新鲜度和卫 生的标志物。腐败变质食物中的BA会散发出特殊气味，这不仅影响食品的风味， 更为重要的是会对人的生命健康构成潜在威胁。例如，当BAs累积到一定浓度 时，容易引发哮喘、过敏反应、食物中毒、偏头痛、血压异常、口腔科疾病等症 状。组胺是毒性最大的BAs，其阈值在欧洲渔业产品中立法确立，富含组氨酸的 鱼类中组胺含量不得超过200mg/kg；若在盐水中经过发酵处理的鱼类，其组胺 含量不得超过400mg/kg。腐胺和尸胺的存在会增强组胺的毒性，它们还会在食 品中与亚硝酸盐和硝酸盐形成致癌的N
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亚硝胺。因此，组胺、腐胺和尸胺常被 作为食品腐败的标志物。由此可见，肉类食品腐败所产生的BA会对人体产生严 重危害。而肉类作为人类最常见的营养来源之一，其质量安全与人的生命健康息 息相关。因此，快速、灵敏、简便地测定肉类中的BAs含量十分必要。
[0003]目前，科研人员已经开发了多种可以用于BAs检测的方法，例如色谱法、 毛细管电泳法、化学发光法、比色分析法以及酶联免疫吸附测定等，但这些方法 难以避免复杂昂贵的仪器和繁复的前处理过程，并且容易造成样品的浪费，因此 更加经济环保、操作简便的BAs分析方法亟待开发。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供了一种针头取样
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微萃取
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催化显色检测生物胺的 方法。
[0005]技术方案：为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一种针头取样
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微萃取
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催化显色检测生物胺的方法，具体操作步骤如下：
[0007](1.1)、先向离心管中加入DAO溶液，再加入BAs溶液，反应20
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35min， 加入混合显色液，反应10
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25min，随后用超微量紫外
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可见分光光度计在650nm 处进行检测，绘制BAs与紫外强度相关的标准曲线；
[0008](1.2)、用注射泵吸取DAO溶液，将针头扎入肉样中，顺时针逆时针各旋 转一周，将针头斜面压在肉样上取出，将注射泵与针头组装，推动注射泵活塞， 打一滴DAO溶液，使肉样浸润在其中反应25
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40min；
[0009](1.3)、拉动注射器活塞，将萃取了BAs的液滴抽回，用干净针头取出肉 样，用注射器吸取混合显色液，反应10
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25min；
[0010](1.4)、检测时，打出一滴用超微量紫外
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可见分光光度计对显色液滴进行 分析检测其中氧化TMB的紫外
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可见光强度，从上述标准曲线上计算肉样中BAs 的浓度。
[0011]进一步的，在步骤(1.1)中，所述DAO溶液：浓度为5mg/mL，溶剂0.1M PBS，pH 7.2。
[0012]进一步的，在步骤(1.1)中，所述混合显色液为0.8M CH3COOH溶液、0.1M TMB和0.5mg/mL ATO水溶液按体积比7:1:1的混合液。
[0013]进一步的，在步骤(1.2)中，所述注射泵规格为1mL，针头规格为1.2*38mm。
[0014]进一步的，在步骤(1.3)中，所述针头规格为0.45*16mm。
[0015]本专利技术的有益效果：相对于现有技术，本专利技术方法大大降低了背景信号干扰， 检测限制降低至1.52μM，线性范围为5～50μM和50～1000μM(r2>0.991)；可 用于测定生肉样品中的BAs含量，具有成本低廉、操作简单、检测效率高等优 点。
附图说明
[0016]图1为本专利技术方法基于针头取样法结合液相微萃取和类过氧化物酶催化显 色反应检测肉类样品中生物胺的方法的机理图；
[0017]图2为BAs
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DAO氧化反应和H2O2/TMB
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ATO显色反应条件的优化图，其中：
[0018]a为BAs
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DAO氧化反应温度从25℃到45℃的优化图；条件：pH 7.2，DAO 浓度为5mg/mL，孵化30min；
[0019]b为BAs
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DAO氧化反应pH从5到8的优化图；条件：37℃，DAO浓度为 5mg/mL，孵化30min；
[0020]c为BAs
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DAO氧化反应DAO浓度从1.5mg/mL到7mg/mL的优化图；条 件：37℃，pH 7.2，孵化30min；
[0021]d为BAs
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DAO氧化反应时间从15min到60min的优化图；条件：37℃，pH 7.2，DAO浓度为5mg/mL；
[0022]e为H2O2/TMB
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ATO显色反应pH从3到5.5的优化图；条件：ATO浓度为 0.5mg/mL，TMB浓度为0.1M，反应10min；
[0023]f为H2O2/TMB
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ATO显色反应时间从5min到30min的优化图；条件：ATO 浓度为0.5mg/mL，TMB浓度为0.1M，pH 4。
[0024]图3为BAs的校准曲线及全谱图，其中：
[0025]b为BAs的校准曲线；条件：BAs
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DAO氧化反应，37℃，pH 7.2，DAO浓 度为5mg/mL，反应32min；H2O2/TMB
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ATO显色反应，pH 4，反应15min；
[0026]c为不同浓度BAs的全谱图；
[0027]图4为实际样品检测结果，其中：
[0028]a为在不同保存条件下鱼肉中的BAs含量随时间变化的曲线；
[0029]b为在不同保存条件下猪肉中的BAs含量随时间变化的曲线；
[0030]c为的不同部位鱼肉(4℃冷藏敞口包装保存)中的BAs含量随时间变化的 曲线；
[0031]d为不同部位鱼肉中BAs含量随时间变化的可视化色调图。
具体实施方式
[0032]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面结合附图对本专利技术的技术方案做 进一步的详细说明：
[0033]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针头取样
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微萃取
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催化显色检测生物胺的方法，其特征在于，具体操作步骤如下：(1.1)、先向离心管中加入DAO溶液，再加入BAs溶液，反应20
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35min，加入混合显色液，反应10
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25min，随后用超微量紫外
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可见分光光度计在650nm处进行检测，绘制BAs与紫外强度相关的标准曲线；(1.2)、用注射泵吸取DAO溶液，将针头扎入肉样中，顺时针逆时针各旋转一周，将针头斜面压在肉样上取出，将注射泵与针头组装，推动注射泵活塞，打一滴DAO溶液，使肉样浸润在其中反应25
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40min；(1.3)、拉动注射器活塞，将萃取了BAs的液滴抽回，用干净针头取出肉样，用注射器吸取混合显色液，反应10
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25min；(1.4)、检测时，打出一滴用超微量紫外
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可见分光光度计对显色液滴进行分析检测其中氧化TMB的紫外
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可见光强度，...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐盛，许孟婵，宋畅，姜依依，刘畅，鞠嘉和，陈一桐，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：