一种二萜类化合物的制备方法及其在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用技术

本发明专利技术公开了一种二萜类化合物的制备方法及其在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用，属于水产养殖技术领域。本发明专利技术从抑制炎症风暴的角度，以CCL19作为抗炎药物筛选指标，通过乳酸菌发酵代谢产物对关键炎症因子CCL19表达的影响，结合色谱分离方法，成功的从乳酸菌代谢产物中分离获得一种二萜类化合物periconicins A，该化合物具有较好的抗炎作用是本发明专利技术的首次发现，且其对虹彩病毒的治疗效果优于广谱抗病毒药物利巴韦林，该化合物具有极好的安全性，是一种具有较好开发潜力的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种二萜类化合物的制备方法及其在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用
本专利技术涉及水产养殖
，特别是涉及一种二萜类化合物的制备方法及其在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用。
技术介绍
大口黑鲈因其肉质鲜美，营养价值高，近几年养殖规模和产量均在不断增加。但随着养殖密度提高及养殖环境的恶化其病害也不断增多，给养殖户造成了巨大的损失。其中危害最大的是鲈鱼病毒性溃疡综合征，其病原为虹彩病毒科蛙病毒属的大口黑鲈鱼虹彩病毒(Largemouthbassranavirus，LMBV)，但目前尚无行之有效的防治手段。疫苗免疫因需要进行注射难以进行群体化免疫，目前难以实现规模化应用，而水产养殖中目前还没有有效的抗病毒药物，但一旦病害爆发养殖户可能会病急乱投医，违规使用药物，造成环境污染、药物残留、耐药性等一系列问题，该病已成为制约大口黑鲈养殖业的一大瓶颈，其防治技术也成为一大难题。因此，寻找对虹彩病毒的治疗行之有效、环境友好型药物是一项迫在眉睫的工作。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种二萜类化合物的制备方法及其在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，实现对虹彩病毒所引起的鲈鱼病毒性溃疡综合征的有效治疗。为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：本专利技术提供一种二萜类化合物在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用，所述二萜类化合物的结构式为：本专利技术还提供一种上述二萜类化合物的制备方法，对干酪乳杆菌GCGR-16的发酵培养物进行色谱分离提取，得到所述二萜类化合物。进一步地，提取过程中采用活性追踪法，以CCL19作为抗炎药物筛选指标。进一步地，制备方法包括以下步骤：(1)将干酪乳杆菌GCGR-16进行发酵培养，发酵完成后，将发酵液过滤并用乙酸乙酯进行萃取，将得到的萃取物浓缩得到浸膏；(2)将得到的浸膏进行色谱分离，采用梯度洗脱，得到所述二萜类化合物。进一步地，所述梯度洗脱的流程为：先用氯仿-乙酸乙酯进行10：1至1:5的梯度洗脱，收集1:5氯仿-乙酸乙酯洗脱部分的馏分，将该馏分用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，收集5:1氯仿-甲醇的馏分；将收集的馏分用氯仿-乙酸乙酯进行洗脱，收集5:1氯仿-乙酸乙酯的馏分，过制备柱，收集254nm波长下出峰馏分，即得所述二萜类化合物。进一步地，所述发酵时间为48h。炎症风暴是机体遭受外界病毒感染或药物刺激后，细胞因子的过度反应，如白细胞介素、趋化因子等大量产生，进而造成对机体自身的伤害。对大口黑鲈蛙虹彩病毒的感染机理研究发现，炎症风暴是造成鲈鱼死亡的重要原因，本专利技术从抑制炎症风暴的角度来进行干预，利用多组学方法找到关键的炎症因子，进而利用活性追踪法，研究乳酸菌的发酵代谢产物对关键炎症因子CCL19表达的影响，以CCL19作为抗炎药物筛选指标。本专利技术从乳酸菌代谢产物中分离得到的二萜类化合物为periconicinsA，该化合物最先是由SangheeKim于2004年在内生植物真菌Periconiasp中分离获得，并发现该化合物对枯草芽孢杆菌(ATCC6633)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538p)、葡萄球菌(ATCC12228)、肺炎克雷伯菌(IFO13541)、普通变形杆菌(ATCC3851)等具有较好的抑菌作用，但该化合物的其他功能目前国内外均未见报道。本专利技术公开了以下技术效果：本专利技术从抑制炎症风暴的角度，以CCL19作为抗炎药物筛选指标，通过乳酸菌发酵代谢产物对关键炎症因子CCL19表达的影响，结合色谱分离方法，成功的从乳酸菌代谢产物中分离获得一种二萜类化合物periconicinsA，本专利技术首次发现该化合物具有较好的抗炎作用，且其对虹彩病毒的治疗效果优于广谱抗病毒药物利巴韦林，该化合物具有极好的安全性，是一种具有较好开发潜力的药物。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为差异基因的KEEG分析；图2为差异基因的富集分析；图3为不同时间点RT-PCR验证CCL19的表达结果；图4为PericonicinsA的分离纯化制备过程；图5为各组大口黑鲈肝脏中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平；图6为各组大口黑鲈体内NO和PGE2的表达水平；图7为各组大口黑鲈抗蛙虹彩病毒的累计死亡率；图8为各组肝组织病理学观察结果。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。实施例1体内抗炎药物筛选模型构建将体重为26.8±4.5g的大口黑鲈在室内温控循环养殖桶里适应性饲养2周后，随机分为2个组，即空白对照组和攻毒组，每组设置3个重复。试验控制水温25±1℃。攻毒组腹腔注射50倍TCID50大口黑鲈蛙虹彩病毒，空白对照组腹腔注射相同剂量的细胞培养液。在攻毒前，攻毒后4h，24h，48h以及72h，采集各实验组的肝脏组织，并迅速用液氮保存，利用二代转录组测序进行转录组学分析，之后利用RT-PCR法进行炎症相关因子的验证。通过转录组分析，共鉴定获得3569个差异表达基因(DEGs)。对DEGS进行KEGG聚类分析，发现其主要被注释富集到36个相关通路中，其Top20通路如图1，主要是细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路、MAPK信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll-样受体信号通路等相关信号通路中。对所有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种二萜类化合物在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用，其特征在于，所述二萜类化合物的结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.一种二萜类化合物在制备治疗鲈鱼病毒性溃疡综合征药物中的应用，其特征在于，所述二萜类化合物的结构式为：





2.一种权利要求1中所述二萜类化合物的制备方法，其特征在于，对干酪乳杆菌GCGR-16的发酵培养物进行色谱分离提取，得到所述二萜类化合物。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，提取过程中采用活性追踪法，以CCL19作为抗炎药物筛选指标。


4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干酪乳杆菌GCGR-16进行发酵培养，发酵完成后，将发酵液过滤并用乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚嘉赟，尹文林，袁雪梅，吕立群，王浩，潘晓艺，沈锦玉，张成赛，
申请(专利权)人：浙江省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33