用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术具体公开了一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用，所述试剂盒包括磁微粒及偶联在磁微粒上的去干扰蛋白，去干扰蛋白包括抗人IgM，抗人IgG，抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的一种或多种，用于消除内源性干扰。本发明专利技术提供的试剂盒相比于市面上的去除内源性干扰的阻断剂，去干扰更加全面，去干扰更加彻底；此外不会降低正常样本抗原检测的信号值，对样本检测不会有不良影响。

【技术实现步骤摘要】
用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用
本专利技术涉及免疫检测
，特别涉及一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒及其应用。
技术介绍
临床上，出现检验结果和患者临床不符的情况时有发现，导致检验结果与临床不符合的原因是多样性的，包括患者检查前是否用药，是否处于窗口期，检验方法的局限性等等，甚至可能是患者自身某些固有干扰导致的。其中患者自身固有的内源性干扰就是最容易被忽视的影响因素。内源性干扰是由于检测试剂中的抗体和患者样本中的内源性物质发生交叉反应所致，这类干扰统称为内源性干扰。其中内源性干扰主要分为以下几类：1.类风湿因子：类风湿因子是存在于血清中的一类以自身变性IgG为靶抗原的自身抗体，与天然IgG结合能力较差，易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。2.异嗜性抗体(HA)：异嗜性抗体可以与许多动物免疫球蛋白的Fc和Fab等部位上的表位结合，模拟被测抗原的免疫活性，同时结合捕获抗体、标记抗体干扰实验。3.人抗动物抗体(HAAA)：人抗动物抗体是具有抗动物活性的抗体。去除这些内源性干扰，目前市面上最主流的做法是加入各种类型的阻断剂。阻断剂类型多种多样，根据阻断剂作用机制分类有被动阻断剂和主动阻断剂。被动阻断剂一般为正常动物血清或正常动物IgG，其工作原理为通过高浓度添加，使干扰抗体优先与阻断剂结合而不与检测抗体或捕获抗体结合，从而降低干扰；主动阻断剂，一类对干扰抗体具有高亲和力的试剂。与干扰抗体结合后，可以通过位阻效应阻断干扰抗体与检测抗体或捕获抗体的结合。>由于临床样本具有特殊性，干扰类型不一，干扰千差万别，各类阻断剂针对的样本类型并非完全一致。目前并没有一种单一配方的阻断剂适用于所有的免疫检测，相关开发人员只能根据自己免疫检测系统的情况，添加一种或几种阻断剂，达到去除干扰的目的。本专利技术使用磁珠与免疫球蛋白及去干扰物质连接，为一类根据血清及待检物性质特定配置的含多种抗体的磁珠液，可以用于完全去除样本中的干扰物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒，用以解决样本特殊性的问题，可以将免疫检测中的干扰物质全部去除。鉴于此，本专利技术的技术方案如下：一种用于消除免疫检测干扰的试剂盒，包括磁微粒、分别偶联在磁微粒上的去干扰蛋白及保存缓冲液；所述去干扰蛋白选自抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的多种。根据本专利技术的实施例，所述去干扰蛋白为单克隆抗体和/或多克隆抗体。根据本专利技术的实施例，所述磁微粒为羧基末端的磁性微粒。本专利技术还提供以上所述的试剂盒在制备免疫检测产品中的应用。本专利技术还提供以上所述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)取磁微粒，磁性分离去上清，加入溶解在偶联缓冲液的去干扰蛋白，置于空气振荡器中反应，磁性分离后去上清；2)封闭未偶联的磁珠，磁性分离，去上清；3)将分别偶联的不同种类去干扰蛋白的磁珠均匀地混合，磁性分离去上清；使用保存缓冲液保存。本专利技术还提供一种消除免疫检测中样本内源性干扰的方法，将以上所述试剂盒与待检血清样本混合，反应后进行磁性分离，取上清样本；所述试剂盒中的磁微粒在血清样本中含量为20-200μg/ml。相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：1.本专利技术提出的消除方法去除干扰类型全面，所示方法中磁微粒上含有针对各种类型干扰的相对应的抗体，对于IgM类，IgG类或者IgA类的干扰，均有特定的相对应的抗体进行去除。相比于市面上的去除内源性干扰的阻断剂，其去干扰更加全面，去干扰更加彻底。2.本专利技术提供的消除方法不影响现有检测信号值，选用的抗体及将磁珠偶联后，不会对原有的检测系统产生影响，不会降低正常样本检测的信号值，对样本检测不会有不良影响。3.本专利技术提供的消除方法操作便捷。所述磁微粒具有极强的磁响应性，且磁微粒作为抗体的载体具有较高的比表面积，能够充分的和样本进行反应，加之外加磁场的灵活运用，较之前具有更便捷的操作方法。4.去除干扰方法新型。传统内源性的干扰消除方式通过在样本稀释液中或者酶标液中添加阻断剂来去除内源性干扰，阻断剂即为一类针对内源性干扰物质的特异性抗体。由于检测抗体及包被抗体的不一致及各种检测方法、检测靶标的差异性，导致在不同项目及不同检测方法上，所添加的阻断剂千差万别，同时，由于添加在样本稀释液或者酶标夜中，部分阻断剂还会对检测系统有不小的影响。本专利技术的去除内源性干扰的方法，可以将各种类型的血清样本的干扰类物质去除完成，同时不受项目及检测方法的影响。同时，通过磁微粒去除干扰后，并不会影响血清的正常的检测。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰明白，以下结合具体实施方式，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本专利技术，并不是为了限定本专利技术。本专利技术提供一种用于消除免疫检测内源性干扰的试剂盒，包括表面偶联有去干扰蛋白的磁性微粒，每个磁性微粒偶联单一的去干扰蛋白；所述去干扰蛋白选自抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的多种；所述磁性微粒为巯基末端的磁性微粒，本专利技术选择磁性微粒表面含有羧基作为功能基团，利用偶联试剂可以将内源性干扰的蛋白分子共价结合在其表面。也可以选择氨基末端的磁性微粒，偶联的原理相同。根据上述磁性微粒偶联的机理，所述去干扰蛋白可以选择单克隆抗体和/或多克隆抗体。制备上述试剂盒的方法包括如下步骤：1)使用磁性微粒偶联免疫球蛋白配基：取定量磁性微粒，磁性分离去上清，加入溶解在偶联缓冲液的免疫球蛋白配基，置于空气振荡器中充分反应，磁性分离，去上清；封闭未偶联的磁珠，磁性分离，去上清；2)按照比例将偶联的不同种类的去干扰球蛋白配基的磁珠均匀地混合，磁性分离去上清；保存缓冲液保存磁珠备用。所述去干扰球蛋白的磁珠固定比例针对不同的样本类型，依据样本特性选择不同磁珠的配方进行调整使用。上述试剂盒保存缓冲液为：10mMPB，0.15MNaCl。本专利技术提供一种用于消除免疫检测中样本内源性干扰的方法，将临床待检血清样本处理后，按1ml血清样本加入20-200μg试剂盒中的磁珠(去除保存缓冲液后)，反应5-10分钟后，磁性分离，取上清样本进行项目检测。本专利技术所述消除免疫检测中样本内源性干扰的原理如下：根据磁性微粒结合抗体蛋白的特点，可以设计单一抗体偶联得到的磁性微粒；再进一步根据待检样本特性，按比例配制抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体(单抗或多克隆抗体)等多种磁性微粒偶联抗体的试剂盒，由于上述抗体会与样本中的内源性物质发生交叉反应，从而去除内源性干扰蛋白，达到消除干扰的作用。实施例.磁微粒的偶联、封闭及不同类别的混合取1mg的磁性微粒置于离心管中，磁性分离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于消除免疫检测干扰的试剂盒，其特征在于，包括磁微粒、分别偶联在磁微粒上的去干扰蛋白及保存缓冲液；所述去干扰蛋白选自抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的多种。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于消除免疫检测干扰的试剂盒，其特征在于，包括磁微粒、分别偶联在磁微粒上的去干扰蛋白及保存缓冲液；所述去干扰蛋白选自抗人IgM、抗人IgG、抗人IgA、抗人IgE、抗人IgD、抗异嗜性抗体及抗类风湿因子抗体中的多种。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述去干扰蛋白为单克隆抗体和/或多克隆抗体。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为羧基末端的磁性微粒。


4.权利要求1-3任意一项所述的试剂盒在制备免疫检测产品中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：熊雨胜，张薇，周欢，
申请(专利权)人：武汉原谷生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42