一种酶联免疫吸附试验模拟方法技术

本发明专利技术公开了一种酶联免疫吸附试验模拟方法，包括现有的标准酶联免疫吸附试验方法，该方法是用48孔空白酶标板替代已包被的酶标板，利用蒸馏水或生理盐水替代血清，利用蓝色指示剂替代酶试剂和底物试剂，利用盐酸溶液替代终止液，最后采用现有的标准酶联免疫吸附试验方法进行模拟试验，即可反映出标准酶联免疫吸附试验可见的客观现象。本发明专利技术采用低廉的蒸馏水和48孔空白酶标板来模拟酶联免疫吸附试验(ELISA)的操作方法及可见的客观现象，学生可人手一块48孔空白酶标板，实验前和实验后进行两次洗板的训练；在48孔空白酶标板上各孔分别加入50μl的蒸馏水替代血清，既节约了成本，又减少了因从临床带来的血清造成实验室污染或感染的机会。

【技术实现步骤摘要】
一种酶联免疫吸附试验模拟方法
本专利技术涉及一种酶联免疫吸附试验模拟方法，属于生物工程

技术介绍
酶联免疫吸附试验(ELISA)是用于检测人或实验动物体内的各种抗原或抗体，是现代各级医院检验科、各检测中心和科研机构都将用到的最基本的实验项目，该实验涉及到微量移液器(加样枪)的正确使用方法的训练、酶标仪的正确设置与使用、洗板机的使用等。由于酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果准确性除与试剂的质量、性能有关外，与每一步的正确操作(包括加样器的正确使用，如何才能做到加样准确、洗板的正确、干净与否等)是非常重要的因素。然而，商品化试剂盒价格成本非常昂贵，大多数学校没有足够的教学经费购买大量商品试剂盒供学生反复操作训练。现行的免疫学实验，无论是医学类专业或医学检验技术专业所开设的相关实验课程，每个学生每次实验能用到的酶标板加样孔最多不超过10孔，有的学校甚至低到2～5孔，不能有效提高学生的实验技能。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术提供了一种酶联免疫吸附试验模拟方法，该方法的操作方式、实验步骤、实验现象几乎等同于真实的酶联免疫吸附试验，而且成本低廉，可有效提高学生的实验技能。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种酶联免疫吸附试验模拟方法，包括现有的标准酶联免疫吸附试验方法，该方法是用48孔空白酶标板替代已包被的酶标板，利用蒸馏水或生理盐水替代血清，利用蓝色指示剂替代酶试剂和底物试剂，利用盐酸溶液替代终止液，最后采用现有的标准酶联免疫吸附试验方法进行模拟试验，即可反映出标准酶联免疫吸附试验可见的客观现象。上述方法中，所述蓝色指示剂为溴百理香酚蓝溶液。上述方法中，所述48孔空白酶标板分为四排，测定每排的结果平均值和变异系数。上述方法中，所述48孔空白酶标板的加样过程如下：在48孔空白酶标板的各孔中分别加入蒸馏水或生理盐水50μl，将0.01g/L的溴百理香酚蓝溶液混匀，在48孔空白酶标板第1排第1孔加入50μl的溴百理香酚蓝溶液，充分混匀后吸取50μl混合液加至第1列第2孔，将第1列第2孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液加入第1列第3孔，将第1列第3孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液加至第1列第4孔，将第1列第4孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液丢弃，重复上述步骤，完成酶标板第2～12列的加样。由于采用了上述技术方案，本专利技术的具有以下优点：1、本专利技术采用低廉的蒸馏水和48孔空白酶标板来模拟酶联免疫吸附试验(ELISA)的操作方法及可见的客观现象，学生可人手一块48孔空白酶标板，实验前和实验后进行两次洗板的训练；在48孔空白酶标板上各孔分别加入50μl的蒸馏水替代血清，既节约了成本，又减少了因从临床带来的血清造成实验室污染或感染的机会；2、在48孔空白酶标板上第一列第一孔加入50μl的溴百理香酚蓝溶液替代酶和底物试剂，倍比稀释至四列，重复以上方法，完成酶标板第2-12列的加样，实际上是同一份标本，让学生做了12次相同的实验，其间有近百次的混匀、吸样、加样的操作，不仅节约了大量成本，还大大加强了学生对微量移液器(加样枪)的使用次数。3、本专利技术采用的溴百理香酚蓝溶液颜色与酶联免疫吸附试验加酶和底物试剂后阳性结果的颜色(蓝色)很接近，达到了很好的模拟效果，若加样操作正确和板条、仪器精确，各排的实验结果应非常接近或相同；4、本专利技术的试验过程又非真正的酶促反应，所以又不需要像酶联免疫吸附试验酶那样进行温浴，减少了学生实验等待的时间；在48孔板各孔分别加入1％盐酸溶液50μl替代终止液，是其利用溴百理香酚蓝溶液在酸性条件下变成黄色的原理，很好地模拟了酶联免疫吸附试验加终止液后变黄色的现象，使整个实验完全达到了酶联免疫吸附试验的效果。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术的实施例：一种酶联免疫吸附试验模拟方法，包括现有的标准酶联免疫吸附试验方法，该方法是用48孔空白酶标板替代已包被的酶标板，利用蒸馏水或生理盐水替代血清，利用蓝色指示剂替代酶试剂和底物试剂，利用盐酸溶液替代终止液，最后采用现有的标准酶联免疫吸附试验方法进行模拟试验，即可反映出标准酶联免疫吸附试验可见的客观现象。所述蓝色指示剂为溴百理香酚蓝溶液；所述48孔空白酶标板分为四排，测定每排的结果平均值和变异系数。所述48孔空白酶标板的加样过程如下：在48孔空白酶标板的各孔中分别加入蒸馏水或生理盐水50μl，将0.01g/L的溴百理香酚蓝溶液混匀，在48孔空白酶标板第1排第1孔加入50μl的溴百理香酚蓝溶液，充分混匀后吸取50μl混合液加至第1列第2孔，将第1列第2孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液加入第1列第3孔，将第1列第3孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液加至第1列第4孔，将第1列第4孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液丢弃，重复上述步骤，完成酶标板第2～12列的加样。本专利技术的具体实验过程如下：1材料与方法1.1材料微量移液器(加样枪)、48孔空白酶标板、纸巾。1.2试剂洗涤液(PBS-T缓冲液)、蒸馏水或生理盐水、0.01g/L溴百理香酚蓝(PH值调到7.6～8.0)、1％盐酸。1.3仪器DNM-9602酶标分析仪、DNX-9620A电脑洗板机。1.4方法1.4.1编号：取48孔空白酶标板一块,按序编号。1.4.2洗板：将编好号的48孔空白酶标板用洗涤液清洗干净(可以手工洗，也可以用洗板机洗)，一般洗涤5次即可，每次洗涤应保持40秒左右的浸泡时间，洗涤后用纸巾扣干。1.4.3比色：将48孔空白酶标板放入酶标仪，用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔吸光度值,并打印记录结果。此结果为空白1，用O1表示这组数据。1.4.4加样1.4.5在48孔空白酶标板各孔分别加入蒸馏水或生理盐水50μl。1.4.6完成酶标板第1列的加样：将0.01g/L的溴百理香酚蓝溶液混匀，在48孔空白酶标板第1排第1孔加入50μl的溴百理香酚蓝溶液，充分混匀后吸取50μl混合液加至第1列第2孔，将第1列第2孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液加入第1列第3孔，将第1列第3孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液加至第1列第4孔，将第1列第4孔中的溶液充分混匀后吸取50μl混合液丢弃。1.4.7重复1.4.6的步骤，完成酶标板第2～12列的加样。(若加样操作正确和板条、仪器精确，各排的实验结果应非常接近或相同，实际上是同一个实验重复做了12次)。1.4.8在48孔板各孔中加入1％盐酸溶液50μl。1.4.9比色：同1.4.3操作，此结果为测量值，用U表示这组数据。第一排结果为U1，第二排结果为U2，第三排结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶联免疫吸附试验模拟方法，包括现有的标准酶联免疫吸附试验方法，其特征在于：该方法是用48孔空白酶标板替代已包被的酶标板，利用蒸馏水或生理盐水替代血清，利用蓝色指示剂替代酶试剂和底物试剂，利用盐酸溶液替代终止液，最后采用现有的标准酶联免疫吸附试验方法进行模拟试验，即可反映出标准酶联免疫吸附试验可见的客观现象。/n

【技术特征摘要】
1.一种酶联免疫吸附试验模拟方法，包括现有的标准酶联免疫吸附试验方法，其特征在于：该方法是用48孔空白酶标板替代已包被的酶标板，利用蒸馏水或生理盐水替代血清，利用蓝色指示剂替代酶试剂和底物试剂，利用盐酸溶液替代终止液，最后采用现有的标准酶联免疫吸附试验方法进行模拟试验，即可反映出标准酶联免疫吸附试验可见的客观现象。


2.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验模拟方法，其特征在于：所述蓝色指示剂为溴百理香酚蓝溶液。


3.根据权利要求1所述的酶联免疫吸附试验模拟方法，其特征在于：所述48孔空白酶标板分为四排，测定每排的结果平均值和...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡永林，何玉婷，陈婧婧，葛梦琴，
申请(专利权)人：遵义医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：贵州;52