【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产生异源二聚体抗体的方法对相关申请的交叉引用本申请要求于2018年12月18日提交的美国临时申请序列号62/781,180的权益，其全部内容通过引用并入本文。专利
本专利技术涉及产生异源二聚体抗体的方法。序列表本申请包含通过EFS-Web提交的序列表，其全部内容通过引用并入本文。ASCII文本文件创建于2019年12月10日，命名为JBI6029Wopct1_st25.txt，大小为21千字节。专利技术背景单克隆抗体已证明成功作为治疗分子，特别是在治疗癌症中。预期双特异性抗体增加单克隆抗体疗法的效力和功效，因为它们可用于将药物或有毒化合物导向靶细胞，将效应机制重新导向疾病相关位置或增加对肿瘤细胞的特异性，例如通过与肿瘤细胞上表达的一个或多个靶分子结合实现。此外，通过将两种单克隆抗体的特异性组合成一个，双特异性抗体可能潜在地参与一大批作用机制。已描述了不同形式的双特异性抗体和产生它们的方法，但是存在通过优化制造方法以大规模产生双特异性抗体的挑战。专利技术简述本...
【技术保护点】
1.产生异源二聚体抗体的方法，其包括：/na)提供包含含有第一CH3区的免疫球蛋白的第一Fc区的第一同源二聚体抗体和包含含有第二CH3区的免疫球蛋白的第二Fc区的第二同源二聚体抗体，其中所述第一CH3区与所述第二CH3区的氨基酸序列不同，并且使得所述第一CH3区与所述第二CH3区之间的异源二聚体相互作用比所述第一CH3区之间的同源二聚体相互作用或所述第二CH3区之间的同源二聚体相互作用更强；/nb)将所述第一同源二聚体抗体和所述第二同源二聚体抗体组合成混合物；以及/nc)在还原剂和环境溶氧(DO
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181218 US 62/781,1801.产生异源二聚体抗体的方法，其包括：
a)提供包含含有第一CH3区的免疫球蛋白的第一Fc区的第一同源二聚体抗体和包含含有第二CH3区的免疫球蛋白的第二Fc区的第二同源二聚体抗体，其中所述第一CH3区与所述第二CH3区的氨基酸序列不同，并且使得所述第一CH3区与所述第二CH3区之间的异源二聚体相互作用比所述第一CH3区之间的同源二聚体相互作用或所述第二CH3区之间的同源二聚体相互作用更强；
b)将所述第一同源二聚体抗体和所述第二同源二聚体抗体组合成混合物；以及
c)在还原剂和环境溶氧(DO2)存在下温育所述混合物以产生所述异源二聚体抗体，其中该方法在产生所述异源二聚体抗体期间缺乏一个或多个以下步骤：测量所述混合物中的百分比(％)DO2，控制所述混合物中的％DO2，或将氧加入所述混合物中。
2.权利要求1的方法，其中在步骤1b)时，所述混合物中％DO2为约30％或更高。
3.权利要求1或2的方法，其中在产生所述异源二聚体抗体期间，所述％DO2为约10％至约90％。
4.权利要求1至3中任一项的方法，其中步骤1b)中将所述第一同源二聚体抗体和所述第二同源二聚体抗体以约1：1至约1：2的摩尔比组合成所述混合物。
5.权利要求1至3中任一项的方法，其中步骤1b)中将所述第一同源二聚体抗体和所述第二同源二聚体抗体以约1.05：1的摩尔比组合成所述混合物。
6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述混合物中免疫球蛋白的总浓度为约8g/L至约13g/L，如约10.5g/L。
7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述混合物在所述还原剂存在下温育约10分钟或更久。
8.权利要求7的方法，其中所述混合物在所述还原剂存在下温育约10分钟至约24小时。
9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述还原剂是2-巯基乙胺(2-MEA)、2-MEA的化学衍生物、L-半胱氨酸或D-半胱氨酸。
10.权利要求9的方法，其中所述混合物中2-MEA的浓度为约20mM至40mM，如约35mM。
11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述混合物包含缓冲液。
12.权利要求11的方法，其中所述缓冲液包含乙酸钠缓冲液。
13.权利要求12的方法，其中所述缓冲液还包含NaCl。
14.权利要求13的方法，其中所述缓冲液包含约100mM乙酸钠和约30mMNaCl。
15.权利要求14的方法，其中所述缓冲液的pH为约7.3。
16.权利要求1至15中任一项的方法，其包括从所述混合物中去除所述还原剂的步骤。
17.权利要求16的方法，其中所述还原剂通过过滤去除。
18.权利要求17的方法，其中所述过滤是渗滤。
19.权利要求1至18中任一项的方法，其中所述第一同源二聚体抗体和所述第二同源二聚体抗体是IgG1，IgG2或IgG4同种型。
20.权利要求19的方法，其中与SEQIDNO:1的野生型IgG1，SEQIDNO:2的野生型IgG2或SEQIDNO:3的野生型IgG4相比时，所述第一CH3域和所述第二CH3域包含以下突变：F405L/K409R、野生型/F405L_R409K、T350I_K370T_F405L/K409R、K370W/K409R、D399AFGHILMNRSTVWY/K409R、T366ADEFGHILMQVY/K409R、L368ADEGHNRSTVQ/K409AGRH、D399FHKRQ/K409AGRH、F405IKLSTVW/K409AGRH、Y407LWQ/K409AGRH、T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S、T366W/T366S_L368A_Y407V、L351Y_F405A_Y407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、Y407A/T366A_K409F、T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W、K409D/D399K、K409E/D399R、K409D_K360D/D399K_E356K、K409D_K360D/D399E_E356K、K409D_K370D/D399K_E357K、K409D_K370D/D399E_E357K、K409D_K392D/D399K_E356K_E357K或K409D_K392D/D399E_E356K_E357K。
21.权利要求20的方法，其中与SEQIDNO:1的野生型IgG1，SEQIDNO:2的野生型IgG2或SEQIDNO:3的野生型IgG4相比时，所述第一Fc区和/或所述第二Fc区包含调节所述第一Fc区和/或所述第二Fc区与Fcγ受体(FcγR)，FcRn或蛋白A结合的一个或多个突变。
22.权利要求21的方法，其中所述FcγR是FcγRI，FcγRIIa，FcγRIIb或FcγRIII。
23.权利要求21的方法，其中所述调节第一Fc区和/或第二Fc区与Fcγ结合的一个或多个取代是L234A_L235A、F234A_L235A、S228P_F234A_L235A、S228P_L234A_L235A、V234A_G237A_P238S_H268A_V309L_A330S_P331S、V234A_G237A、H268Q_V309L_A330S_P331S、S267E_L328F、L234F_L235E_D265A、L234A_L235A_G237A_P238S_H268A_A330S_P331S或S228P_F234A_L235A_G237A_P238S。
24.权利要求21的方法，其中所述调节第一Fc区和/或第二Fc区与FcRn结合的一个或多个取代是M428L_N434S、M252Y_S254T_T256E、T250Q_M428L、N434A和T307A_E380A_N434A、H435A、P257I_N434H、D376V_N434H、M252Y_S254T_T256E_H433K_N434F、T308P_N434A或H435R。
25.权利要求21的方法，其中所述调节第一Fc区和/或第二Fc区与蛋白A的结合的一个或多个取代是Q311R、Q311k、T307P_L309Q、T307P_V309Q、T307P_L309Q_Q311R、T307P_V309Q_Q311R、H435R或H435R_Y436F。
26.权利要求1至25中任一项的方法，其中在符合GMP的条件下进行产生所述异源二聚体抗体的步骤。
27.权利要求26的方法，其中在制造包含所述异源二聚体抗体的原料药期间进行产生所述异源二聚体抗体的步骤。
28.权利要求1至27中任一项的方法，其中所述异源二聚体抗体是双特异性抗体。
29.权利要求28的方法，其中所述双特异性抗体结合CD3、CD123、BCMA、EGFR或c-Met或其任何组合。
30.权利要求1至29中任一项的方法，其中所述混合物中所述还原剂与总免疫球蛋白的质量比为约1.0至约5.0。
31.权利要求30的方法，其中所述质量比为约1.4至约3.8。
32.权利要求30的方法，其中所述质量比为约3.3至约4.4。
33.产生异源二聚体抗体的方法，其包括：
a)提供包含含有第一CH3区的免疫球蛋白的第一Fc区的第一同源二聚体抗体和包含含有第二CH3区的免疫球蛋白的第二Fc区的第二同源二聚体抗体，其中所述第一CH3区与所述第二CH3区的氨基酸序列不同，并且使得所述第一CH3区与所述第二CH3区之间的异源二聚体相互作用比所述第一CH3区之间的同源二聚体相互作用或所述第二CH3区之间的同源二聚体相互作用更强；
b)将所述第一同源二聚体抗体和所述第二同源二聚体抗体组合成混合物；
c)在...
【专利技术属性】
技术研发人员：PJA马丁，MT卡帕尔迪，J科恩，A德策尔，J萨基亚马，
申请(专利权)人：健玛保，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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