一株俊片菌、俊片菌细胞悬浮液及其在防治辣椒枯萎病中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一株俊片菌、俊片菌细胞悬浮液及其在防治辣椒枯萎病中的应用，该俊片菌(Lampropedia sp.)的编号为M1031，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号为CGMCC No.20988，保藏日期为2020年11月2日。细胞悬浮液中俊片菌M1031的浓度为10

【技术实现步骤摘要】
一株俊片菌、俊片菌细胞悬浮液及其在防治辣椒枯萎病中的应用
本专利技术涉及生防菌及应用
，具体涉及一株俊片菌、俊片菌细胞悬浮液及其在防治辣椒枯萎病中的应用。
技术介绍
辣椒枯萎病是一种严重的土传病害，在辣椒的生长周期内，该病害均可发生，严重危害辣椒的生长。当辣椒枯萎病发生严重时，可对辣椒种植产生严重影响，甚至导致辣椒绝产。农药的出现对这一病害具有一定的作用，但是，随着生物的不断进化，引起该病害的尖孢镰刀菌开始出现了抗药性，使得农药对该病害的作用效果逐渐下降。从目前的研究来看，辣椒枯萎病在不同地区主要危害的专化型可能有所不同。我国目前报道的有两种致病专化型，分别为尖孢镰刀菌萎蔫专化型Fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum和尖孢镰刀菌辣椒专化型Fusariumoxysporumf.sp.capsicum两种。在化学农药作用效果逐渐下降的情况下，生物方法逐渐被研究人员重视。目前已有关于枯草芽孢杆菌对尖孢镰刀菌萎蔫专化型有一定效果的报道，但是对尖孢镰刀菌辣椒专化型防治效果优异的生防菌却一直未有报道；生产上常按照尖孢镰刀菌萎蔫专化型来防治，防治效果不理想。同时由于尖孢镰刀菌辣椒专化型在土壤中的更易积累，因此，提供一种对其具有优异防效的生防菌具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术的上述不足，本专利技术提供了一株俊片菌、俊片菌细胞悬浮液及其在防治辣椒枯萎病中的应用，该俊片菌(Lampropediasp.)M1031，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号为CGMCCNo.20988，保藏日期为2020年11月2日。将该俊片菌在防治辣椒枯萎病中进行应用，通过对辣椒幼苗进行蘸根处理和灌根处理，能够有效降低辣椒枯萎病害发生，效果显著。本专利技术的技术方案如下：一株俊片菌，该俊片菌(Lampropediasp.)的编号为M1031，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号为CGMCCNo.20988，保藏日期为2020年11月2日。优选的，上述俊片菌M1031分离自葱地种蝇幼虫的肠道。因葱地种蝇幼虫取食大蒜使其体内形成强烈的抗生环境，因此，分离自该幼虫的俊片菌具有良好的环境适应能力。一种俊片菌细胞悬浮液，该细胞悬浮液中，俊片菌M1031的浓度为1010CFU/mL。优选的，在制备俊片菌细胞悬浮液时，俊片菌M1031种子培养和扩大培养均采用液体LB培养基，在30℃、150rpm条件下培养。将上述俊片菌M1031在防治辣椒枯萎病中进行应用，能够有效防治辣椒枯萎病产生。优选的，上述应用具体为在防治由尖孢镰刀菌辣椒专化型(Fusariumoxysporumf.sp.capsicum)引起的辣椒枯萎病方面的应用；该俊片菌M1031对尖孢镰刀菌辣椒专化型具有很强的抑制作用，可显著降低由尖孢镰刀菌辣椒专化型引起的辣椒枯萎病。优选的，在上述应用中，采用两次用药的方式进行处理，第一次用药为移栽期，第二次用药为初花期。优选的，将该俊片菌细胞悬浮液应用于防治由尖孢镰刀菌辣椒专化型引起的辣椒枯萎病时，对细胞悬浮液稀释，使俊片菌M1031的浓度为107-109CFU/mL。相对于现有技术，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术提供了一种俊片菌，该俊片菌(Lampropediasp.)的编号为M1031，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号为CGMCCNo.20988，保藏日期为2020年11月2日。2、本专利技术提供的俊片菌M1031，能够有效防治辣椒枯萎病，尤其对由尖孢镰刀菌辣椒专化型(Fusariumoxysporumf.sp.capsicum)引起的辣椒枯萎病的防治效果更加显著。3、本专利技术提供的俊片菌M1031，分离自葱地种蝇幼虫肠道，该俊片菌M1031具有极强的环境适应性，在施用至辣椒根部后，能够长期定植存活并且保持较高的丰度，对辣椒根部形成长效保护，两次施用，即可在辣椒的整个生长周期内对辣椒进行保护。4、本专利技术通过将俊片菌M1031制成细胞悬浮液进行应用，具有使用方法简单、易于操作、易于获取的优点，为辣椒的无公害生产提供了重要的菌种资源，具有重大应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本申请实施例2对峙培养的照片。图2为本申请实施例4辣椒种植50d的照片。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。实施例1菌株的分离和鉴定1、菌株分离：菌株分离样品采集于山东省泰安市范镇蒜田的葱地种蝇幼虫，将采集的幼虫放入封口袋并记录。封口袋置于冰盒保存运送回实验室待用。幼虫带回实验室后，使用体积浓度为75％的乙醇消毒液对其进行体表消毒15s,随后使用无菌水清洗。消毒、清洗过程反复三次。消毒后的幼虫置于解剖镜下，使用眼科手术剪将幼虫头部和尾部剪掉，随后从虫体侧面将幼虫剖开，取出肠道。将幼虫肠道置于1.5mL离心管内，加入100μL磷酸盐缓冲液后充分研磨。10倍梯度稀释至10-8，然后将稀释液涂布于LB培养基平板，28℃培养箱培养24h后，挑取单菌落划线于新的LB培养基平板，挑取划线后的单菌落保存在LB培养基平板，待用。2、菌株筛选：挑选对尖孢镰刀菌辣椒专化型有抑制作用的菌株，过程如下：取直径为4mm的尖孢镰刀菌辣椒专化型菌饼接种在PDA培养基平板的中央，然后将分离纯化后保存在LB培养基平板上的细菌(实施例1保持的细菌)采用划线法划线接种在距离尖孢镰刀菌辣椒专化型菌饼20mm处，以不接种细菌的PDA平板为空白对照。每个细菌菌株设置5个平行对照，于26℃黑暗条件下培养5d后，观察尖孢镰刀菌辣椒专化型的生长情况和抑菌圈情况。挑选对尖孢镰刀菌辣椒专化型生长有明显抑制作用的细菌菌株进行鉴定。3、菌株鉴定：将筛选出来的菌株使用LB培养基培养12h后，取1mL菌液在2000rpm的条件下离心10min收集菌体，使用DNA提取试剂盒提取菌株基因组DNA。采用细菌16SrDNA通用引物1492R(5’-GGCTCGAGCGGCCGCCCGGGTTACCTTGTTACGACTT-3’)和8F(5’-GCG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株俊片菌，其特征在于，该俊片菌(Lampropedia sp.)的编号为M1031，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号为CGMCC No.20988，保藏日期为2020年11月2日。/n

【技术特征摘要】
20210524 CN 20211056627511.一株俊片菌，其特征在于，该俊片菌(Lampropediasp.)的编号为M1031，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号为CGMCCNo.20988，保藏日期为2020年11月2日。


2.如权利要求1所述的俊片菌，其特征在于，俊片菌M1031分离自葱地种蝇幼虫的肠道。


3.一种由权利要求1或2所述的俊片菌制备的细胞悬浮液，其特征在于，该细胞悬浮液中，俊片菌M1031的浓度为1010CFU/mL。


4.如权利要求3所述的细胞悬浮液，其特征在于，俊片菌M1031种子培养和扩大培养均采用液体LB培养基，且均在30℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓燕，张新建，周方园，刘梅，张广志，吴晓青，周红姿，范素素，谢雪迎，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，山东省科学院生态研究所山东省科学院中日友好生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：山东;37