一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法技术

本发明专利技术提供了一种番茄果实中16种多酚类物质的提取和测定方法，属于植物多酚提取与含量检测技术领域。本发明专利技术提供的方法包括以下步骤：(1)番茄果实多酚类物质的提取：样品经冷冻干燥后，采用甲醇超声提取，离心后收集上清液，有机滤膜过滤；(2)采用高效液相色谱仪对番茄果实多酚提取液中的各酚类物质进行测定，分别对流动相、梯度洗脱程序、流速、柱温、进样量和波长进行了优选。最终确定的方法线性关系好，相关系数R

【技术实现步骤摘要】
一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法
本专利技术属于植物多酚物质提取与含量检测
，具体涉及一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法。
技术介绍
番茄(Solanumlycopersicum)原产南美洲，是茄科、番茄属的一年生或多年生草本植物，中国南北方广泛栽培。番茄果实营养丰富，含有可溶性糖、有机酸、矿物质、类胡萝卜素和多酚化合物等。食用番茄有助于促进身体健康，对降低癌症、心血管疾病的发病率有一定作用。多酚类物质具有良好的抗氧化活性，能与维生素C、E和胡萝卜素等其他抗氧化物在体内一起发挥抗氧化功效，清除自由基、延缓衰老。多酚类物质是番茄果实的主要次级代谢产物和生物活性物质，可在一定程度上反映番茄的营养水平。因此，番茄果实中多酚类物质的提取与检测方法对番茄营养品质评价至关重要。查阅关于番茄多酚类物质的提取与检测相关专利文献，未见相关报道。查阅番茄多酚类物质的提取与检测相关期刊文献，发现《Extractionoftomatoby-products’bioactivecompoundsusingohmictechnology》，MartaCoelho等报道了一种欧姆加热提取多酚物质的方法，当施加6或11V·cm-1电场时可获得更丰富的多酚类物质，较传统的有机溶剂提取有更高的提取效率。但存在设备投资大、耗能多和不稳定的因素。《不同番茄品种中类黄酮和咖啡酰尼酸含量测定及与抗氧化能力相关分析》，周萌等采用HPLC法测定了番茄果实中芦丁、山萘酚和绿原酸的含量，虽然测定方法较准确可靠，但检测的多酚类物质种类较少。现有关于番茄果实多酚类物质提取与检测方法，要么提取成本高，要么检测物质种类少，因此迫切需要一种快速、经济、可靠的提取方法和准确度、精密度高、操作简单可同时测定多种多酚类物质的检测方法，以实现番茄果实多酚类物质的精准定量分析。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法，该方法提取效率高、成本低，检测灵敏度和精密度高、重现性好。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤一：番茄果实中多酚类物质的提取取番茄果实，经干燥研磨成粉，向其中加入甲醇进行超声提取，提取完毕后进行离心，取离心后的上清液用过滤膜过滤，得到番茄果实多酚提取液。步骤二：番茄果实中多酚类物质的定性和定量分析A.采用高效液相色谱仪测定提取液中各种多酚类物质的含量，所述方法中，色谱柱为：WatersSymmetryC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相A为甲醇；流动相B为1％乙酸；流速为0.8-1.2mL/min；柱温为25-40℃；进样量为5-20μL；检测器为DAD；检测波长为240-322nm；洗脱方式为梯度洗脱：0-30min时流动相A体积占5％，流动相B的体积占95％；30-40min时流动相A的体积为30％，流动相B的体积为70％；40-45min时流动相A的体积为40％，流动相B的体积为60％；45-50min时流动相A的体积为50％，流动相B的体积为50％；50-55min时流动相A的体积为70％，流动相B的体积为30％；55-57min时流动相A的体积为40％，流动相B的体积为60％；57-60min时流动相A体积占5％，流动相B的体积占95％。B.标准溶液的配制：取各单酚标准品，分别用色谱甲醇溶解，配制成浓度为500mg/L母液，再逐级稀释配成浓度为0.0156、0.0312、0.312、0.625、1.25、2.5、5mg/L的标准溶液，进样分析，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线。再配制混合标准溶液，进样，得到标准品色谱图。C.根据高效液相色谱仪检测出的番茄样品色谱图与标准品色谱图进行对比鉴定，并通过样品中各多酚物质的峰面积代入标准曲线方程，计算得到各多酚类物质的含量。进一步的，所述的番茄果实中16种多酚物质为芦丁、山萘酚、槲皮素、柚皮素、4-香豆酸、肉桂酸、芥子酸、咖啡酸、对羟基苯甲酸、没食子酸、洋蓟素、绿原酸、阿魏酸、苯甲酸、原儿茶酸、龙胆酸。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤一中所述番茄果实干粉是将果实洗净、切块后经真空冷冻干燥研磨成粉。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤一中所述番茄果实干粉与提取液的料液比为1:20g/mL。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤一中所述超声提取条件为20-25℃下超声提取15-20min。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤一中所述离心操作为4℃、8000rpm下离心10min。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤一中所述过滤膜为0.22μm有机膜。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤二中所述流速为1.1mL/min。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤二中所述柱温为30℃。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤二中所述进样量为10μL。作为本专利技术一种优选的技术方案，步骤二中所述检测波长为240nm处检测对羟基苯甲酸、原儿茶酸、槲皮素、绿原酸、芦丁；280nm处检测肉桂酸、4-香豆酸、没食子酸、柚皮素、苯甲酸、阿魏酸；322nm处检测芥子酸、咖啡酸、洋蓟素、山萘酚、龙胆酸。采用本专利技术的上述方法对番茄果实多酚进行提取和测定，提取后的各酚类物质稳定性好，多酚的回收率高，重复效果好，检测方法的灵敏度和精密度高，能够快速、准确检测出16种多酚类物质的含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1.本专利技术提供了一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法，经干燥、超声提取、离心和过滤得到提取液，并采用高效液相色谱法进行检测，对色谱柱、流动相、梯度洗脱、流速、柱温、进样量和波长进行了优选，最终确定的方法操作简单、提取效率高、成本低，检测灵敏度和精密度好。克服了原有技术提取成本高、测定多酚类物质组分少的缺点。2.本专利技术涉及的16种多酚类物质基本涵盖了番茄果实中全部的多酚类物质，作为一类抗氧化活性成分，其准确定量对番茄果实的营养品质评价具有重要意义，可应用于不同番茄品种比较和不同栽培技术对番茄营养品质的影响等研究。附图说明图1为本专利技术实施例一中混合标准品多酚类物质在240nm波长下的色谱图；图2为本专利技术实施例一中混合标准品多酚类物质在280nm波长下的色谱图；图3为本专利技术实施例一中混合标准品多酚类物质在322nm波长下的色谱图；图4为本专利技术实施例一中番茄果实多酚提取样品在240nm波长下的色谱图；图5为本专利技术实施例一中番茄果实多酚提取样品在280nm波长下的色谱图；图6为本专利技术实施例一中番茄果实多酚提取样品在322nm波长下的色谱图；图7为本专利技术实施例二中流速分别为0.8、1、1.1、1.2mL·min-1时混合标准品多酚类物质在280nm波长下的色谱图；图8为本专利技术实施例二中柱温分别为25、30、35、40℃时混合标准品多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n步骤一：番茄果实中多酚类物质的提取/n取番茄果实，经干燥研磨成粉，向其中加入甲醇进行超声提取，提取完毕后进行离心，取离心后的上清液用过滤膜过滤，得到番茄果实多酚提取液；/n步骤二：番茄果实中多酚类物质的定性和定量分析/nA.采用高效液相色谱仪测定提取液中各种多酚类物质的含量，所述方法中，色谱柱为：Waters Symmetry C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相A为甲醇；流动相B为1％乙酸；流速为0.8-1.2mL/min；柱温为25-40℃；进样量为5-20μL；检测器为DAD；检测波长为240-322nm；洗脱方式为梯度洗脱：0-30min时流动相A体积占5％，流动相B的体积占95％；30-40min时流动相A的体积为30％，流动相B的体积为70％；40-45min时流动相A的体积为40％，流动相B的体积为60％；45-50min时流动相A的体积为50％，流动相B的体积为50％；50-55min时流动相A的体积为70％，流动相B的体积为30％；55-57min时流动相A的体积为40％，流动相B的体积为60％；57-60min时流动相A体积占5％，流动相B的体积占95％；/nB.标准溶液的配制：取各单酚标准品，分别用色谱甲醇溶解，配制成浓度为500mg/L母液，再逐级稀释配成浓度为0.0156、0.0312、0.312、0.625、1.25、2.5、5mg/L的标准溶液，进样分析，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线；再配制混合标准溶液，进样，得到标准品色谱图；/nC.根据高效液相色谱仪检测出的番茄样品色谱图与各单酚标准品色谱图进行对比鉴定，并通过样品中各单酚物质的峰面积代入标准曲线方程，计算得到各多酚类物质的含量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种番茄果实中16种多酚类物质的提取与测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤一：番茄果实中多酚类物质的提取
取番茄果实，经干燥研磨成粉，向其中加入甲醇进行超声提取，提取完毕后进行离心，取离心后的上清液用过滤膜过滤，得到番茄果实多酚提取液；
步骤二：番茄果实中多酚类物质的定性和定量分析
A.采用高效液相色谱仪测定提取液中各种多酚类物质的含量，所述方法中，色谱柱为：WatersSymmetryC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相A为甲醇；流动相B为1％乙酸；流速为0.8-1.2mL/min；柱温为25-40℃；进样量为5-20μL；检测器为DAD；检测波长为240-322nm；洗脱方式为梯度洗脱：0-30min时流动相A体积占5％，流动相B的体积占95％；30-40min时流动相A的体积为30％，流动相B的体积为70％；40-45min时流动相A的体积为40％，流动相B的体积为60％；45-50min时流动相A的体积为50％，流动相B的体积为50％；50-55min时流动相A的体积为70％，流动相B的体积为30％；55-57min时流动相A的体积为40％，流动相B的体积为60％；57-60min时流动相A体积占5％，流动相B的体积占95％；
B.标准溶液的配制：取各单酚标准品，分别用色谱甲醇溶解，配制成浓度为500mg/L母液，再逐级稀释配成浓度为0.0156、0.0312、0.312、0.625、1.25、2.5、5mg/L的标准溶液，进样分析，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线；再配制混合标准溶液，进样，得到标准品色谱图；
C.根据高效液相色谱仪检测出的番茄样品色谱图与各单酚标准品色谱图进行对比鉴定，并通过样品中各单酚物质的峰面积代入标准曲线方程，计算得到各多酚类物质的含量。


2.根据权利要求1所述的番茄果实中16种多酚物质的提取与测定方法，其特征在于：所述16种多酚物质分别为芦丁、山萘酚、槲皮素、柚皮素、4-香豆酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖雪梅，郁继华，柳帆红，吕剑，胡琳莉，钟源，张丹，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62