一种测定抗凝静脉全血糖化血红蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及临床体外诊断检测领域，公开了一种测定抗凝静脉全血糖化血红蛋白的试剂盒，包括洗脱液A、洗脱液B和溶血剂，洗脱液A和洗脱液B分别包括缓冲液、表面活性剂和添加剂，溶血剂包括表面活性剂和添加剂，添加剂为苏氨酸、β‑丙氨酸、甘氨酸中的一种或一种以上；还公开了一种测定全血中糖化血红蛋白的方法。本发明专利技术提供的糖化血红蛋白试剂盒，可以避免样本的测定值随着样本的保存时间的推移而发生变动，同时也减少了样本前处理的复杂过程，从而实现糖化血红蛋白的高效、准确检测。此外，本发明专利技术提供的测定方法，对保存后的样本也能够实现快速、准确的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种测定抗凝静脉全血糖化血红蛋白的试剂盒
本专利技术申请为申请日2018年12月29日，申请号为：201811635299.2，名称为“一种测定全血中糖化血红蛋白的试剂盒及方法”的专利技术专利申请的分案申请。本专利技术涉及临床体外诊断检测领域，尤其涉及一种测定抗凝静脉全血糖化血红蛋白的试剂盒。
技术介绍
据国际糖尿病联盟(InternationaleDiabetesFederation，IDF)统计，2017年全球糖尿病患者约有4.25亿人。美国糖尿病控制及并发症试验(DiabetesControlandComplicationTrial，DCCT)和英国糖尿病控制与并发症关系研究(UKProspectiveDiabetesStudy，UKPDS)发现糖化血红蛋白(HbA1c)是糖尿病患者疾病控制程度的一项良好指标，它反映的是患者在检测前120天内的平均血糖水平，该指标与抽血时间、病人是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。在第59届美国糖尿病协会(AmericanDiabetesAssociation，ADA)年会上，ADA将HbA1c作为血糖控制的金标准，提出所有糖尿病患者每年均应至少常规测定HbA1c两次，并要求在临床应用中，无论用什么方法反应血糖的变化，最后都要以HbA1c的变化作为最终评价一种药物或一个治疗方案的有效检测指标。因此，HbA1c检测的临床意义非常重要。目前HbA1c的检测方法主要包括色谱法、免疫法和电泳法。其中色谱法包括高效液相阳离子交换色谱法和高效液相硼酸亲和色谱法等。作为HbA1c检测的金标准，高效液相阳离子交换色谱法一向是临床上最具应用价值、最精确的方法。利用高效液相阳离子交换色谱法测定全血中HbA1c的原理是：全血样本用溶血剂溶血释放目标蛋白，由于样本中糖化血红蛋白(HbA1c)和非糖化血红蛋白(HbA0)的等电点不同，因此，在弱酸性条件下它们各自所带正电荷的数量不同，所以，样品经过糖化血红蛋白分析柱时，与分析柱中带有负电荷的离子交换固定相的吸附和交换能力存在差异，然后采用两种不同盐浓度的洗脱液(洗脱液A和洗脱液B)将各组份分离；首先用低盐浓度的洗脱液A将HbA1c洗脱，再用高盐浓度的洗脱液B将HbA0洗脱；被洗脱的蛋白依次通过检测器，检测器自动记录其在415nm的光吸收强度变化，并将光信号转化为电信号，得到物质信号谱图，对收集到的谱图数据进行分析计算得出HbA1c、HbA0峰的面积，HbA1c峰面积占总血红蛋白Hb峰面积的百分含量即为人全血样本中HbA1c的检测结果。然而，在用上述液相离子交换色谱法测定HbA1c的研究时，样本(例如全血样本、全血稀释样本、全血冻干样本等)保存后再进行HbA1c检测时，测定值会随着样本的保存时间的推移而变动。公开号为CN101595230A的专利技术专利公开了一种HbA1c测定方法，同时也指出了含Hb试样保存后再进行HbA1c检测时，将得到比使用刚采集的含Hb试样的测定值低的值。该专利采用在样本中加入抑制剂的方法来避免因保存样本而引起的HbA1c测定值的变动，但是，该方法需要测量者的直接参与，使测量过程复杂化，从而大大降低了检测效率。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中样本保存后再进行HbA1c检测的测定值会随着样本的保存时间的推移而变动的缺点，提供了一种测定全血中糖化血红蛋白的试剂盒及方法，利用该试剂盒可以高效、准确地体外定量测定人全血试样中糖化血红蛋白的浓度，而测定值不受样本保存时间的影响。为了解决上述技术问题，本专利技术通过下述技术方案得以解决：一种测定全血中糖化血红蛋白的试剂盒，包括洗脱液A、洗脱液B和溶血剂，洗脱液A和洗脱液B分别包括缓冲液、表面活性剂和添加剂，溶血剂包括表面活性剂和添加剂，添加剂为苏氨酸、β-丙氨酸、甘氨酸中的一种或一种以上。作为优选，洗脱液A、洗脱液B和溶血剂中添加剂的添加量均为0.01g/L～1.00g/L，优选为0.05g/L～0.50g/L。作为优选，缓冲液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液和丁二酸盐缓冲液中的一种或一种以上。由于磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液和丁二酸盐缓冲液具有较宽的pH缓冲范围，因此，将该缓冲液加入到洗脱液A和洗脱液B中能达到良好的洗脱效果。作为优选，洗脱液A中缓冲液的摩尔浓度为0.01mol/L～0.50mol/L，优选为0.05mol/L～0.50mol/L，在这个摩尔浓度下的缓冲液不仅具有合适的pH缓冲范围，还能达到合适的洗脱效果。作为优选，洗脱液B中缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L～1.00mol/L，优选为0.06mol/L～1.00mol/L，在这个摩尔浓度下的缓冲液不仅具有合适的pH缓冲范围，还能达到合适的洗脱效果。作为优选，表面活性剂为吐温20、曲拉通X-100中的一种或两种，表面活性剂的加入有利于增加生物膜对小分子的渗透性，有利于细胞溶解。表面活性剂的添加量为1.00g/L～20.00g/L，优选为5.00g/L～9.00g/L。作为优选，洗脱液A、洗脱液B和溶血剂中还包括防腐剂，防腐剂可以抑制微生物生长，增加洗脱液A、洗脱液B和溶血剂的贮藏时间。防腐剂优选为叠氮化钠，因其有抑制细胞中基础代谢酶的合成作用，从而抑制微生物生长，起到防腐作用。洗脱液A、洗脱液B和溶血剂中防腐剂的添加量小于等于5.00g/L，此时即可有效抑制微生物生长。作为优选，还包括分析柱、质控品和校准品，分析柱的填料为阳离子交换固定相，填料粒径为3μm～10μm，柱长10mm～50mm，柱内径4.0mm～4.6mm；质控品和校准品均为糖化血红蛋白血样冻干粉，校准品的糖化血红蛋白血样冻干粉可以通过IFCC(国际临床化学和实验室医学联盟)溯源。一种测定全血中糖化血红蛋白的方法，包括以下几个步骤：样本中加入溶血剂进行溶血，溶血后的样本在分析柱中用洗脱液洗脱得到HbA1c组分和HbA0组分后进行检测，计算得到HbA1c的检测结果；洗脱液为上述洗脱液A和上述洗脱液B。作为优选，洗脱条件为：分析柱的填料为阳离子交换固定相，填料粒径为3μm～10μm，柱长10mm～50mm，柱内径4.0mm～4.6mm；检测波长：415nm；柱温为37℃；洗脱梯度：0s～45s洗脱液A体积100％，洗脱液B体积0％；46s～75s洗脱液A体积0％，洗脱液B体积100％；76s～120s洗脱液A体积100％，洗脱液B体积0％；流速1.5mL/min，进样量10μL。作为优选，样本为全血样本、全血稀释样本或全血冻干样本。本专利技术由于采用了以上技术方案，具有显著的技术效果：本专利技术提供的糖化血红蛋白试剂盒，在洗脱液A、洗脱液B和溶血剂中均添加了添加剂，可以避免样本的测定值随着样本的保存时间的推移而发生变动，同时也减少了样本前处理的复杂过程，从而实现糖化血红蛋白的高效、准确检测。此外，本专利技术提供的测定方法，对保存后的样本也能够实现快速、准确的检测。因此，对于血样采集地点和测试地点不同、或收集一定数量样本后集中检测，需要对样本进行保存后再检测的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定抗凝静脉全血糖化血红蛋白的试剂盒，包括洗脱液A、洗脱液B和溶血剂，其特征在于：/n洗脱液A包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂和添加剂；/n洗脱液B包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂和添加剂；/n溶血剂包括表面活性剂、防腐剂、添加剂；/n洗脱液A包括浓度23.62g/L的丁二酸、浓度为21.01g/L的一水合柠檬酸、浓度为24.00g/L的磷酸二氢钠、浓度为7.00g/L吐温20、浓度为0.20g/L叠氮化钠、浓度为0.05g/L甘氨酸；/n洗脱液B包括浓度为108.06g/L的丁二酸钠、浓度为58.82g/L的柠檬酸三钠、浓度为56.78g/L的磷酸氢二钠、浓度为7.00g/L吐温20、浓度为0.20g/L叠氮化钠、浓度为0.05g/L甘氨酸；/n溶血剂包括浓度为7.00g/L吐温20、浓度为0.20g/L叠氮化钠、浓度为0.05g/L甘氨酸；/n试剂盒洗脱用到的分析柱的填料为阳离子交换固定相；/n试剂盒洗脱梯度：0s～45s洗脱液A体积100％，洗脱液B体积0％；46s～75s洗脱液A体积0％，洗脱液B体积100％；76s～120s洗脱液A体积100％，洗脱液B体积0％。/n

【技术特征摘要】
1.一种测定抗凝静脉全血糖化血红蛋白的试剂盒，包括洗脱液A、洗脱液B和溶血剂，其特征在于：
洗脱液A包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂和添加剂；
洗脱液B包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂和添加剂；
溶血剂包括表面活性剂、防腐剂、添加剂；
洗脱液A包括浓度23.62g/L的丁二酸、浓度为21.01g/L的一水合柠檬酸、浓度为24.00g/L的磷酸二氢钠、浓度为7.00g/L吐温20、浓度为0.20g/L叠氮化钠、浓度为0.05g/L甘氨酸；
洗脱液B包括浓度为108.06g/L的丁二酸钠、浓度为58.82g/L的柠檬酸三钠、浓度为56.78g/L的磷酸氢二钠、浓度为7.00g/L吐温20、浓度为0.20g/L叠氮化钠、浓度为0.05g/L甘氨酸；
溶血剂包括浓度为7.00g/L吐温20、浓度为0.20g/L叠氮化钠、浓度为0.05g/L甘氨酸；
试剂盒洗脱用到的分析柱的填料...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙旭东，王植，吕志刚，
申请(专利权)人：江山德瑞医疗科技有限公司，孙旭东，
类型：发明
国别省市：浙江;33